徐麗霞 毛根珍 林群 雷永良 劉敏

[摘要] 目的 探討類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）相關自身抗體對HIV病毒不同篩查方法的影響，為臨床中出現的HIV檢測結果假陽性提供解釋依據。 方法 選擇2015年7月～2016年7月我院接診的90例RA患者進行檢測，按RA抗體類風濕因子（rheumatoid factor，RF）值高低分為RF<18 U/mL組（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）值高低分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51），采用快速膠體金法、酶聯免疫吸附法（ELISA）及電化學發(fā)光法（ECLIA）對所有患者進行血清HIV病毒檢測，陽性標本采用免疫印記確認實驗，并采用ELISA法對所有患者RF及抗CCP抗體進行檢測。 結果 快速膠體金法和ELISA法所檢測的所有患者結果均為陰性，ECLIA法檢測出12例患者HIV抗體呈陽性，陽性標本采用免疫印記確認，結果均為陰性，差異有統計學意義（P<0.05）；ECLIA法檢測RF-IgM<18 U/mL組的HIV抗體呈陽性患者1例，RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗體呈陽性患者分別為11例、3例，差異有統計學意義（P<0.05）；抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組中HIV抗體呈陽性患者2例，抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組HIV抗體呈陽性患者12例，兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 類風濕關節(jié)炎高滴度的自身抗體對ECLIA法檢測患者HIV抗體具有一定的影響，會導致假陽性的產生，因此多種檢測方式進行篩查是有必要的。

[關鍵詞] 類風濕關節(jié)炎；抗體；篩查方法；HIV病毒

[中圖分類號] R593 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）06-0124-04

[Abstract] Objective To investigate the influence of autoantibodies associated with rheumatoid arthritis（RA）on different HIV screening methods and to provide an explanation basis for the false positive of HIV test results in clinic. Methods 90 RA patients admitted in our hospital from July 2015 to July 2016 were enrolled in the study. According to the rheumatoid factor（RF） value of RA antibody， the patients were divided into RF<18 U/mL group（n=33） and RF>300 U/mL group（n=57）. According to anti-cyclic citrullinated peptide（anti-CCP） value， the patients were divided into anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group（n=39）and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL group（n=51）. Serum HIV was detected in all patients by rapid colloidal gold assay， enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）and electrochemiluminescence（ECLIA）. The positive samples were confirmed by immunoblot. The RF and anti-CCP antibodies in all patients were detected by ELISA method. Results All the patients tested by rapid colloidal gold assay and ELISA showed negative results. HIV antibodies in 12 patients were positive detected by ECLIA method and positive samples were confirmed by immunoblot. The results were negative（P<0.05）. There was 1 patient with HIV antibody-positive detected by ECLIA test in RF-IgM <18 U/mL group. There were 11 and 3 HIV antibody-positive patients in RF-IgM>300 U/mL and RF-IgG>300 U/mL group， respectively， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. There were 2 and 12 cases of HIV antibody positive in the anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL HIV group， and the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The high titer of autoantibodies to rheumatoid arthritis may affect the detection of HIV antibodies by ECLIA and lead to false positives. Therefore， a variety of testing methods for screening are necessary.

[Key words] Rheumatoid arthritis；Antibodies；Screening methods；HIV

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是一種可對人類免疫系統造成缺陷并感染的慢性病毒，在病毒分類學中屬于逆轉錄病毒[1]。據調查，HIV病毒于1981年美國首次發(fā)現。HIV病毒通過對人體T淋巴細胞進行破壞，阻斷了細胞及體液免疫過程，使人體免疫系統呈現癱瘓狀態(tài)，最終導致各種疾病感染蔓延，形成艾滋病[2-3]。目前HIV-1和HIV-2兩種HIV型已經被發(fā)現，其病毒結構和傳播的方式均極為相似。近年來，我國HIV病毒感染患者及艾滋病患者數量逐年上升，個別地區(qū)已經屬于快速增長期，形式極為嚴峻[4]。目前，國內外對HIV抗體的篩查方式較多，由于檢測原理不同將其主要分為快速膠體金法、酶聯免疫吸附法（ELISA）及電化學發(fā)光法（ECLIA），可快速或常規(guī)對患者血液、尿液及唾液進行HIV篩查[5-6]。為了進一步探討RA相關自身抗體對不同篩查方法檢測HIV病毒結果的影響，我院選取了90例RA患者采用不同方式進行HIV病毒篩查，并且為了有效縮短窗口期，避免患者于窗口期傳染，采用將HIV抗原和抗-p24抗體共同包被的第4代抗原抗體雙監(jiān)測系統的雙抗原夾心法試劑盒，同時對患者抗原和抗體進行檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2015年7月～2016年7月我院接診的90例RA患者進行檢測，所有患者均符合類風濕性關節(jié)炎分類標準，其中男52例，女28例，年齡38～62歲，平均（46.57±12.38）歲，病程1～21年，平均（12.23±3.64）年。按RF值高低分為RF<18 U/mL組（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗CCP抗體值高低分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51）。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 取所有患者空腹靜脈血4 mL，采集時避免溶血，且采集后將標本放置1～2 h，血液凝固且血塊已經收縮后以3000 r/min進行離心，時間為5 min，取出血清。需保存的血清應置于-20℃以下環(huán)境，以待檢測。

1.2.2 檢測方法 采用3種檢測方式對標本進行HIV病毒檢測：①快速膠體金法；②酶聯免疫吸附法（ELISA）；③電化學發(fā)光法（ECLIA）?？焖倌z體金法（試劑盒由山東康華生物有限公司提供）及ELISA法（試劑盒由上?？迫A生物工程有限公司提供）包被抗HIV-1和抗HIV-2抗體；ECLIA法（試劑盒由羅氏診斷有限公司提供）包被抗HIV-1、抗HIV-2抗體以及HIV-1 p24抗原；ELISA法檢測患者類風濕因子及抗CCP抗體。檢測儀器選擇美國1575型洗板機和Bio2Rad550 酶標儀，所有檢測操作均嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標

①對所有患者采用快速膠體金法、酶聯免疫吸附法及電化學發(fā)光法進行檢測，并將檢測結果記錄；②陽性標本采用免疫印記確認實驗；③檢測RF濃度對ECLIA法篩查HIV抗體的影響，RF濃度分為兩種，即RF<18 U/mL和RF>300 U/mL；④檢測抗CCP抗體濃度對ECLIA法篩查HIV抗體的影響，抗CCP抗體濃度分為兩種，即抗CCP抗體濃度<25 RU/mL和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL。

1.4 統計學方法

數據用SPSS 18.0軟件包處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料的比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 所有患者三種檢測結果比較

90例患者采用快速膠體金法及酶聯免疫吸附法進行檢測，結果均為陰性；電化學發(fā)光法檢測結果中，12例患者HIV抗體呈陽性，以上三種檢測方法所檢測的結果差異有統計學意義（χ2=25.1163，P<0.05）。陽性標本驗證采用免疫印記確認實驗，其中HIV-p24抗原不確定患者9例，陰性患者3例；經1個月觀察后進行復查，7例患者由陽性轉為陰性，2例患者仍然為不確定；經3個月觀察后重新采血進行檢查，結果均轉為陰性。

2.2 RF濃度對ECLIA法檢測HIV抗體的影響

90例患者分為RF<18 U/mL和RF>300 U/mL兩組，33例患者RF濃度<18 U/mL，ECLIA法檢測出RF-IgM<18 U/mL的1例患者HIV抗體呈陽性，陽性率為3.03%；57例患者RF濃度>300 U/mL，ECLIA法檢測RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗體呈陽性患者分別為11例（19.30%）、3例（5.26%），差異有統計學意義（χ2=11.0942，P<0.05）。見表2。

2.3抗CCP抗體濃度對ECLIA法檢測HIV抗體的影響

90例患者分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51），ECLIA法檢測出抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組中HIV抗體呈陽性患者2例（5.13%），檢測出抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組中HIV抗體呈陽性患者12例（23.53%），差異有統計學意義（χ2=7.2293，P<0.05）。見表3。

3討論

艾滋病屬于危害性極大的一種傳染病，主要由于人體感染人類免疫缺陷病毒（HIV）產生[7-8]。HIV病毒可對人體的免疫系統進行攻擊，其攻擊對象為人體免疫細胞中最為重要的CD4 T淋巴細胞，HIV病毒對CD4 T淋巴細胞的大量破壞，導致人體免疫功能急劇下降，患者一旦感染HIV病毒，起初數年可能無任何表現，但若發(fā)展成為艾滋病，則會出現各種臨床癥狀，一般初期癥狀多為感冒、流感、全身無力等，隨著病情的不斷加重，會出現皮膚、黏膜等白念球菌感染，呈現出單純皰疹、紫斑、血皰等，此后不斷侵蝕肺部、胃腸等，引起患體呼吸困難、腹瀉、胸痛等癥狀，且還會對患體神經系統和心血管系統進行侵犯，經過長期的消耗，最終導致患者衰竭死亡[9-10]。據研究顯示，HIV的變異極為迅速，且可通過血液、精液等進行傳播，世界范圍內由于艾滋病死亡人數近1200萬人，且感染人數超過3000萬人，雖全世界眾多的醫(yī)學研究者為研究出治療藥物付出了巨大的心血，也未生產出特異性疫苗，以至于至今無法有效進行治療，嚴重威脅人類的健康[11-12]。因此在預防艾滋病中，對HIV抗體的檢測尤為重要。

HIV抗體非特異反應的原因非常復雜，目前多認為與血清標本出現的溶血、類風濕因子、系統性紅斑狼瘡以及使用血液制品等原因相關，除了以上內、外源性干擾因素之外，其他導致HIV抗體不確定的因素報道也較多，如患者多次進行狂犬疫苗的接種會導致結果出現非特異性反應等[13]。目前將抗體檢測結果的影響因素分為以下三種[14]：①患體免疫系統對HIV沉默；②患者已是HIV感染早期；③非特異性反應。類風濕關節(jié)炎（RA）屬于多系統性的自身免疫疾病，類風濕因子（RF）屬于一種以變性lgG為靶抗原的自身抗體，于RA患者血清及關節(jié)液中發(fā)現，該抗體屬于lgM型，可與gGFc段進行有效結合，多為IgA、IgM及IgG型[15]。其中二聚體形式的IgG型可存在于滑膜液中，二聚體沉積可通過關節(jié)軟骨表面對補體系統進行有效激活，從而對關節(jié)造成炎性損傷。據研究發(fā)現，多肽證實瓜氨酸殘基由抗中間絲相關蛋白的cDNA序列所合成，并且在RA特異的的抗中間絲相關蛋白抗體識別表位屬于必要的組成。對抗中間絲相關蛋白抗體氨基酸序列進行有效分析后，組合成為一條肽鏈，該肽鏈由瓜氨酸將精氨酸代替產生的20個左右氨基酸殘基合成。通過實驗表明瓜氨酸在RA患者血清中含有的抗中間絲相關蛋白相關抗體識別中屬于主要組成性的抗原決定簇成分[16-17]。RA患者血清中的抗CCP抗體主要為IgG型，且屬于環(huán)狀聚絲蛋白中的多肽片段，在風濕性關節(jié)炎中具有較好的特異性和敏感性[18]。本研究中，根據RA患者抗體滴度分為RF<18 U/mL組、RF>300 U/mL、抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組，通過快速膠體金法、酶聯免疫吸附法及電化學發(fā)光法對患者HIV病毒進行篩查，結果顯示電化學發(fā)光法檢測出呈陽性的患者高于快速膠體金法和酶聯免疫吸附法，并且抗CCP抗體濃度>500 RU/mL及RF>300 U/mL標本中檢測出陽性的幾率高于剩下兩組，本文分析假陽性的產生很可能是由試劑盒中用的酶標記抗人IgG與非特異性吸附的IgG或CCP等產生結合，從而導致假陽性的產生，同時表明高濃度的自身抗體和類風濕因子均對電化學發(fā)光法檢測HIV病毒具有一定的影響，從而產生一定的假陽性。

目前HIV病毒的篩查方式多采用ELISA和膠體金法，其中ELISA具有較好的特異性和敏感性，但其操作具有需要酶標儀和洗板機等進行輔助，且具有耗時長的缺點，在檢測應用中多用于大批量標本篩查；快速膠體金法操作及判定陰性和陽性的方法簡單，具有較高的敏感性，但其特異性較弱，篩查中易出現假陽性[19-20]。ECLIA在篩查HIV病毒中，可同時對抗原抗體進行檢測，有效縮短檢查窗口期，具有自動化的特點，操作較為簡潔，但具有較高的敏感性，在患有自身免疫性疾病的患者檢測中，一旦患者血清中自身免疫抗體含量較高，則會導致干擾篩查，出現假陽性。本研究中，ECLIA檢測HIV病毒出現12例陽性，且經后續(xù)觀察并采用免疫印記確認實驗，均轉為陰性，提示采用ECLIA檢測RA患者血清HIV病毒的實驗中若出現陽性結果需慎重對待，需采用另一檢測方式進行實驗。由于檢測結果中出現假陽性的原因較多，也表明了篩查人員在進行篩查時需非常仔細，以免出現人為干擾因素。

綜上所訴，類風濕關節(jié)炎高滴度的自身抗體對ECLIA法檢測患者HIV抗體具有一定的影響，可能會導致假陽性的產生，因此多鐘檢測方式進行篩查是有必要的，ECLIA法包被HIV-p24抗原，因此該檢測方法在HIV抗體篩查中具有臨床意義。

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（收稿日期：2017-08-01）