黃富強(qiáng)

(湖北省丹江口市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 442700)

微小核糖核酸(miRNA)屬于長度為20個(gè)左右的核苷酸聯(lián)合組成的非編碼RNA，主要作用在于調(diào)節(jié)人體當(dāng)中神經(jīng)元細(xì)胞及其他細(xì)胞的分化及凋亡，同時(shí)參與人體的免疫應(yīng)答及信號傳導(dǎo)過程當(dāng)中的mRNA處理。血清當(dāng)中特定miRNA的表達(dá)可以作為艾滋病的新型診斷指標(biāo)。研究人員認(rèn)為mir-23a-3p與艾滋病的發(fā)生、發(fā)展存在著密切的聯(lián)系[1]。CXCL12作為趨化因子CXC家族的一員，主要由骨髓細(xì)胞分泌生成，并且分泌的過程是持續(xù)不斷的，是持續(xù)表達(dá)的一種趨化因子。人體當(dāng)中沒有病原體侵入的情況下表達(dá)較低，艾滋病發(fā)病之后表達(dá)水平會(huì)顯著上升[2]。本研究檢測艾滋病患者血清當(dāng)中的mir-23a-3p及CXCL12表達(dá)，分析其在艾滋病診斷及治療中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1月至2016年12月本院收治的艾滋病患者70例為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者符合艾滋病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；應(yīng)用抗病毒治療方案(AZT+3TC+NVP)；未服用其他藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠哺乳期女性患者；合并嚴(yán)重肝、腎功能障礙的患者；合并結(jié)核及腫瘤疾病患者。選取同期健康體檢人員70例為對照組。兩組研究對象的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，一般資料見表1。本試驗(yàn)參與研究者均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 兩組研究對象一般資料對比

1.2方法 采集兩組研究對象3 mL靜脈血，2 000 r/min持續(xù)離心3 min，之后收集血清，以3 000 r/min持續(xù)離心5 min，并應(yīng)用EP管收集血清，在-60 ℃條件下保存待檢。提取血清RNA時(shí)，根據(jù)操作說明書取RNA，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)cDNA，并將cDNA儲(chǔ)存于-30 ℃的冰箱待檢，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量方法進(jìn)行檢測[4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0分析處理，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，兩組結(jié)果比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組研究對象mir-23a-3p過表達(dá)情況對比 研究組患者過表達(dá)水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組研究對象mir-23a-3p過表達(dá)水平分析[n(%)]

2.2兩組研究對象CXCL12過表達(dá)對比 研究組患者過表達(dá)情況顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組研究對象CXCL12過表達(dá)水平分析[n(%)]

3 討 論

miRNA能夠參與到人體神經(jīng)系統(tǒng)的各項(xiàng)生理過程，同時(shí)調(diào)控信號表達(dá)，例如神經(jīng)細(xì)胞的分化、樹突棘的生成、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及保護(hù)等[5]。有研究認(rèn)為，血清當(dāng)中的miRNA主要來源于人體組織細(xì)胞，在生成分泌之后持續(xù)進(jìn)入到血液循環(huán)當(dāng)中，血清miRNA的表達(dá)能夠在一定程度體現(xiàn)病變組織中的情況[6]。研究人員發(fā)現(xiàn)，大鼠艾滋病模型當(dāng)中的大腦組織及外周血血清中的miRNA表達(dá)，在變化方面比較一致，兩者之間存在密切的聯(lián)系[7-8]。mir-23a-3p在膠質(zhì)瘤當(dāng)中的表達(dá)同樣存在顯著上升的問題，并且在膠質(zhì)瘤Ⅲ級患者中的表達(dá)水平更高，這意味著mir-23a-3p參與到膠質(zhì)細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)過程當(dāng)中[7]。而研究顯示，匹羅卡品誘發(fā)的艾滋病大鼠的模型，在持續(xù)24 h之后，大鼠海馬當(dāng)中的mir-23a-3p表達(dá)會(huì)顯著升高，并且大鼠海馬當(dāng)中的突觸重建情況比較活躍[8]。有學(xué)者通過分析耐藥性艾滋病患者血清當(dāng)中的mir-23a-3p表達(dá)水平，結(jié)果顯示mir-23a-3p能夠影響神經(jīng)細(xì)胞的增生、炎性反應(yīng)及突觸重建等，通過這些途徑來參與到耐藥性艾滋病患者病情的發(fā)生發(fā)展，為耐藥性艾滋病的治療提供了新的研究途徑，但具體的作用方式還需要后續(xù)的深入研究[7]。

CXCL12過表達(dá)對比方面，研究組患者過表達(dá)情況顯著高于對照組研究對象(P<0.05)，同相關(guān)研究的結(jié)果相符[9]。這提示CXCL12對艾滋病的發(fā)生、發(fā)展同樣存在重要的影響。趨化因子是有著趨化功能的細(xì)胞因子，由80個(gè)左右的氨基酸組成，可以吸引免疫細(xì)胞聚集到免疫應(yīng)答位置，從而影響免疫調(diào)節(jié)及人體的免疫反應(yīng)。截止到目前為止，國內(nèi)學(xué)者關(guān)楊等[10]報(bào)道，發(fā)現(xiàn)的趨化因子種類數(shù)量超過50種，是細(xì)胞因子中種類數(shù)量比較多的一類。CXCL12最早在小鼠骨髓細(xì)胞當(dāng)中發(fā)現(xiàn)，因其在β細(xì)胞的分化增生當(dāng)中有著重要的影響，而被認(rèn)為是β細(xì)胞的刺激因子(PBSF)。借助于克隆表達(dá)的方法，能夠分離得到cDNA。小鼠及人體當(dāng)中的CXCL12高度雷同，人體當(dāng)中的CXCL12基因主要在10號染色體，與其他趨化因子主要在4號染色體及17號染色體。同其他趨化因子不同的是，CXCL12主要是由人體的基質(zhì)細(xì)胞生成分泌的，并不受炎性因子的影響。CXCL12廣泛表達(dá)在人體的各種組織及細(xì)胞當(dāng)中，例如心臟、大腦、肝臟、腎臟及免疫細(xì)胞等。CXCL12的生物學(xué)軸能夠參與人體的白細(xì)胞浸潤、器官發(fā)育及細(xì)胞遷移等病理過程及生理過程當(dāng)中[11]。相關(guān)研究的結(jié)果表明，CXCL12對人體心臟組織及淋巴細(xì)胞都有著重要的影響，CXCL12能夠?qū)е律窠?jīng)細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，說明CXCL12可以調(diào)節(jié)人體當(dāng)中造血干細(xì)胞及巨核細(xì)胞的分化。最新研究結(jié)果顯示，CXCL12及CXCR4可以互相作用而形成反應(yīng)軸，在艾滋病的發(fā)生、發(fā)展過程當(dāng)中有重要的影響，這對于艾滋病的治療有重要的臨床意義[12]。

本研究中，研究組CXCL12過表達(dá)患者的比例要顯著高于對照組(P<0.05)，這是由于人類免疫缺陷病毒(HIV)外殼同靶細(xì)胞膜之間的融合，是病毒侵入細(xì)胞的首要步驟。如果能阻斷結(jié)合的過程，就能有效控制HIV感染靶細(xì)胞。當(dāng)前根據(jù)這一作用機(jī)制研發(fā)得到的抗HIV藥物包括AMD3100、T140及T22等。非肽類抑制是CXCL12抑制劑的重要組成部分，特別是雙環(huán)拉胺類及其衍生物能夠有效抑制CXCL12活性。研究人員在早在上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)HPA-23擁有抗HIV活性的效果，而在試驗(yàn)過程當(dāng)中發(fā)現(xiàn)其對人體的胃腸道有著明顯的不良影響，需要借助于非腸道的途徑完成吸收[13]。在此過程中，化合物在人體當(dāng)中的滯留會(huì)帶來不良反應(yīng)，同時(shí)對艾滋病的治療效果也不夠理想。因此借助于改造結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)通過使用氮原子來替代HPA-23當(dāng)中的氧原子，連接苯二亞甲基在兩個(gè)環(huán)間，結(jié)果得到抗HIV效果更強(qiáng)的AMD3100。AMD3100屬于小分子CXCL12抑制劑的一種，能夠與CXCL12外環(huán)當(dāng)中的氨酸殘基進(jìn)行結(jié)合。具體作用機(jī)制的試驗(yàn)顯示，AMD3100能夠作用于HIV感染患者的早期環(huán)節(jié)，特異性將CXCL12作為靶點(diǎn)從而阻斷HIV進(jìn)入到人體細(xì)胞當(dāng)中，但是不會(huì)作用于其他的受體。因?yàn)锳MD3100分子量及陽離子都影響到分子過膜及吸收，因此口服用藥的活性水平比較低，因此應(yīng)用更小雜環(huán)進(jìn)一步改造結(jié)構(gòu)，改善藥物的口服效果。使用吡啶甲胺基來取代AMD3100的拉胺環(huán)，從而得到單環(huán)拉胺AMD3465，抗HIV感染的活性同AMD3100比較接近，這提示兩個(gè)大環(huán)并不屬于HIV的重要結(jié)構(gòu)。近來有研究人員報(bào)道新型的CXCL12抑制劑AMD11070，分子量要顯著低于AMD3100，同時(shí)有著理想的抗HIV-1效果。但臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，AMD11070的肝毒性比較明顯，因此在安全性及實(shí)用性方面還需要后續(xù)的研究[14]。因此研究人員進(jìn)一步改進(jìn)AMD11070結(jié)構(gòu)，使用的其他雜環(huán)取代芐基，從而得到新型抑制劑，并且細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物抗HIV活性效果理想。從大環(huán)帶正電AMD3100發(fā)展到單環(huán)AMD3465及AMD11070，研究人員不斷降低藥物的分子大小及電荷，同時(shí)提高藥物的口服活性，并且作用于CXCL12的位點(diǎn)也各不相同[15]。

本研究的測序結(jié)果表明，研究組艾滋病患者的mir-23a-3p過表達(dá)及CXCL12過表達(dá)均顯著高于對照組研究對象，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本試驗(yàn)持續(xù)隨訪患者的時(shí)間為3個(gè)月，血清在冰箱當(dāng)中的保存時(shí)間比較長，測序結(jié)果表明miRNA存在一定的降解，因此需要后續(xù)改進(jìn)研究。而血清標(biāo)本通過及時(shí)處理反轉(zhuǎn)錄成為eDNA，檢測的結(jié)果可信度比較高。

綜上所述，艾滋病患者血清中的分子表達(dá)特征能夠幫助醫(yī)務(wù)人員判斷其病情進(jìn)展。艾滋病患者血清當(dāng)中普遍存在著mir-23a-3p及CXCL12的過表達(dá)，需要引起醫(yī)務(wù)人員的重視。

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