劉芳

doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2017.20.5

摘要 目的：建立茵桅黃口服液中木犀草素等HPLC含量測(cè)定的一種方法。方法：用Agilent ZORBAX SB-phenyl色譜柱；乙氰0.5%冰乙酸溶液體系作為流動(dòng)相，梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm；柱溫：30.9℃。結(jié)果：木犀草素進(jìn)樣量在0.16～1.68μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 7）；平均回收率97.8%，RSD 0.7%（n=5）。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于茵桅黃口服液中木犀草素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞 茵桅黃口服液；木犀草素；高效液相色譜法

茵梔黃口服液為祛濕劑，具有利濕退黃、清熱解毒功效。主治肝膽濕熱所致的黃疸，癥見小便黃赤，惡心嘔吐，胸脅脹痛，面目悉黃，急、慢性肝炎等。為有效控制茵梔黃口服液制劑質(zhì)量，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)用HPLC法對(duì)該制劑的木犀草素含量進(jìn)行了測(cè)定，建立了HPLC測(cè)定茵桅黃口服液中木犀草素含量的一種方法。

方法與結(jié)果

色譜條件：①儀器和試劑：高效液相色譜儀采用日本島津LC-2010CHT；檢測(cè)儀UV-NIS；島津LC-Solution工作站；Precisa 92SM-202A電子分析天平，感量0.01 mg；超聲波清洗器。木犀草素（中國藥品生物制品檢定所）；色譜純乙睛，其他試劑都是分析純。茵桅黃口服液。②色譜柱：Agilent ZORBAXSB-phenyl（250am×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈0.5%冰醋酸流動(dòng)相體系，行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；按木犀草素峰計(jì)算理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備：取適量木犀草素對(duì)照品，加入70%乙醇配制成85μg/mL的溶液。

供試品溶液的制備：將茵梔黃口服液10mL轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加入50%的甲醇稀釋，定容至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液用0.45μm的微孔膜過濾，所得濾液即為供試品溶液。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取1、3、5、7、10 mL木犀草素對(duì)照品溶液f85μg/mL）置于10mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至10 mL。按上述測(cè)定色譜條件，分別吸取20 mL各濃度對(duì)照品溶液，注入HPLC色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，進(jìn)樣量在0.16～1.68μg木犀草素范圍內(nèi)線性關(guān)系較好（Y=1.683×105X+232，r=0.999 7）。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，在色譜條件下測(cè)定，計(jì)算木犀草素峰面積，結(jié)果RSD為0.7%，精密度較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品茵桅黃口服液，按供試品溶液制備方法分別制備5份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得木犀草素含量平均值48.3μ/g，RSD=1.2%。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，在0、4、8、12、24 h內(nèi)進(jìn)樣5次，計(jì)算RSD=0.7%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

樣品含量測(cè)定：取樣品5批，制得供試品溶液，吸取各20μL對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入HPLC色譜儀，計(jì)算木犀草素含量，結(jié)果為34.1、48.4、41.5、32.3、47.1μg，g。

討論

木犀草素是一種天然黃酮類化合物，為茵梔黃口服液中的重要成分，具有抗癌、抗過敏、抗菌、抗感染、免疫增強(qiáng)、祛痰和解痙等多種藥理活性，主要用于治療肝炎、心血管疾病、SARS、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥等。現(xiàn)代藥理研究表明，木犀草素的抗炎活性與抑制一氧化氮（NO）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等其他炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，抑制核轉(zhuǎn)錄因子KB（NF-KB）介導(dǎo)的基因表達(dá)以及蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸的磷酸化。

木犀草素是茵梔黃口服液中的主要有效成分之一，是茵梔黃口服液的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分。關(guān)于木犀草素的含量測(cè)定，一般有雙波長(zhǎng)分光光度法、HPLC和薄層掃描法等。茵梔黃口服液為復(fù)方制劑，測(cè)定時(shí)干擾成分較多。為減少其他成分的干擾，簡(jiǎn)化操作，我們選用HPLC色譜法對(duì)其進(jìn)行定量，從而使測(cè)定結(jié)果的精密度提高。endprint