賈巍，尹長恒

（哈勵遜國際和平醫(yī)院，河北 衡水 053000）

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，是最常見的甲狀腺上皮細胞來源的惡性腫瘤[1]。近年來隨著分子生物學的發(fā)展，甲狀腺乳頭狀癌分子生物指標的研究成為重點[2]。P53、Her-2和Ki67是惡性腫瘤的主要檢測指標[3-4]。特異性腫瘤標志物的確立，對提高確診率，改善甲狀腺乳頭狀癌的治療具有重要意義。本文采用免疫組織化學法檢測甲狀腺組織內P53、Her-2、Ki67的表達，分析其在甲狀腺乳頭狀癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年3月-2016年3月哈勵遜國際和平醫(yī)院甲狀腺乳頭狀癌手術患者128例作為乳頭狀癌組，其中，男性52例，女性76例；年齡26～72歲。收集甲狀腺腺瘤手術患者56例作為腺瘤組，其中，男性21例，女性35例；年齡28～69歲；結節(jié)性甲狀腺腫21例，橋本甲狀腺炎35例。另收集正常甲狀腺組織9例作為對照組。所有病例資料完整。

1.2 免疫組織化學法

采用全自動免疫組織化學染色儀進行標準免疫組織化學SP法染色。標本經10%中性甲醛固定，梯度酒精脫水，石蠟包埋組織，采用4μm連續(xù)切片，行蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE），鏡下觀察。

1.3 結果判定

1.3.1 P53P53基因陽性染色呈棕黃色顆粒狀，定位于細胞核。無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞數計分：隨機觀察10個高倍鏡（×400）視野，各計數100個細胞，計算陽性細胞百分比。陽性細胞數＜5%計0分，5%～25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，≥75%計4分。上述2項結果的乘積為0分表示陰性（-），1～3分表示弱陽性（+），4～6分表示陽性（++），＞6分表示強陽性（+++）。

1.3.2 Her-2Her-2陽性產物位于細胞膜，呈棕黃色顆粒。每張切片隨機選取10個高倍鏡視野（×400）進行觀察，參照FDA推薦的Hercep Test評分標準進行評判：（-）（+）為陰性；（++）為弱陽性，需進一步用FISH法證實；（+++）為陽性。無癌細胞膜著色或≤10%癌細胞膜染色為陰性（-）；＞10%癌細胞膜弱染色，但染色間斷，未環(huán)繞細胞膜為弱陽性（+）；＞10%癌細胞膜弱到中等程度染色，染色連續(xù)，環(huán)繞整個胞膜為陽性（++）；＞10%癌細胞膜強染色，染色連續(xù)，環(huán)繞整個胞膜為強陽性（+++）。FISH結果判讀：首先在低倍鏡下觀察整張FISH切片，然后于高倍鏡下通過特異通道濾光片觀察Her-2和CSP17信號，進行信號計數和比值計算。計數選擇細胞核無重疊、信號清晰的細胞，隨機計數≥30個癌細胞核中的雙色信號。判讀標準參照美國臨床腫瘤學會/美國病理醫(yī)師學院檢測指南：Her-2信號成簇狀分布時可不計數，直接視為基因擴增，Her-2信號成點狀分布時通過計數比值進行判斷，Her-2/CSP17比值≤1.8為Her-2陰性，比值≥2.2為Her-2陽性，比值在1.8～2.2為Her-2結果不確定，需要再計算30個細胞核中的信號。

1.3.3 Ki67Ki67陽性標志是細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒；陰性：＜14%腫瘤細胞胞核染色陽性；低表達：14%～25%腫瘤細胞胞核染色陽性；中表達：25%～50%腫瘤細胞胞核染色陽性；高表達：＞50%腫瘤細胞胞核染色陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

數據分析釆用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計數資料以率（%）表示，用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 P53、Her-2、Ki67在甲狀腺組織中的表達

2.1.1 P53正常甲狀腺組織中未見P53表達。P53在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達率為85.15%（109/128），陰性表達率為14.84%（19/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽性表達率為26.78%（15/56），陰性表達率為73.21%（41/56）；在正常組織中陽性表達率為0.00%（0/9），經χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=11.933，P=0.000），甲狀腺乳頭狀癌組織中P53陽性表達率高于甲狀腺腺瘤。見表1和圖1。

2.1.2 Her-2正常甲狀腺組織中未見Her-2表達。Her-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達率為40.62%（52/128），陰性表達率為59.37%（76/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽性表達率為16.07%（9/56），陰性表達率為83.92%（47/56）；在正常組織中陽性表達率為0.00%（0/9），經χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.765，P=0.012），甲狀腺乳頭狀癌組織中Her-2陽性表達率高于甲狀腺腺瘤。見表1和圖2。

2.1.3 Ki67正常甲狀腺組織中未見Ki67表達。Ki67在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達率為38.28%（49/128），陰性表達率為61.71%（79/128）；在甲狀腺腺瘤組織中陽性表達率為23.21%（13/56），陰性表達率為76.78%（43/56）；在正常組織中陽性表達率為0.00%（0/9），經χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=7.815，P=0.375）。見表 1 和圖 3、4。

2.2 P53、Her-2、Ki67表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關系

圖1 P53在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達 （SP×400）

圖2 Her-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達（SP×400）

在128例甲狀腺乳頭狀癌中，P53、Ki67的表達僅與淋巴結轉移有關（P＜0.05），與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、組織學分型、分化程度無關（P＞0.05）。Her-2的表達與腫瘤大小、局部浸潤、淋巴結轉移有關（P＜0.05），與年齡、性別、組織學分型、分化程度無關（P＞0.05）。見表 2。

表1 3組P53、Her-2、Ki67陽性表達率比較 例（%）

圖3 Ki67在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達 （SP×400）

圖4 甲狀腺乳頭狀癌病理組織切片 （HE×400）

表2 甲狀腺乳頭狀癌患者不同臨床病理特征的P53、Her-2、Ki67陽性率比較

續(xù)表2

3 討論

甲狀腺癌是內分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，占惡性腫瘤的1%～5%，總發(fā)病率在世界各地呈快速增長趨勢[5-6]。目前，大多數甲狀腺腫瘤采用組織病理學或細胞學檢查能做出診斷，但由于乳頭狀增生的結節(jié)難以區(qū)分良、惡性，導致甲狀腺乳頭狀癌的診斷比較困難，在甲狀腺乳頭狀癌的預后指標中，尚缺乏有效的特異分子標志物[7]。

P53基因是比較重要的抑癌基因，其突變型是腫瘤發(fā)生的促進因子，可以通過多種途徑參與細胞周期和細胞凋亡的調控，并與腫瘤的浸潤、轉移有關。有研究表明，P53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為88.4%，診斷的準確度為86.2%[8]。另有研究顯示，P53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為86.1%，且與患者的年齡、性別無關[9-10]。國外的報道中也表明，P53在甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率為47.3%，且與淋巴結轉移有關；P53在甲狀腺乳頭狀癌中的表達與臨床病理特征無關[11]。本研究顯示，P53在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽性高表達，且與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、組織學分型、分化程度無關，僅與淋巴結轉移有關。

Her-2基因被認為是惡性腫瘤侵襲性生物學行為的有效標志物?；虮磉_產物是一種具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白，在細胞信號傳導中具有重要作用，主要參與細胞生長、分化的調節(jié)，促進細胞分裂的增殖。有研究顯示，Her-2在乳腺癌、胃癌、甲狀腺癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用[12]。國內研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率達46.6%，并與淋巴結轉移、局部浸潤程度有關[13]。國外研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為79.5%，該表達與腫瘤大小、轉移程度有關[14]。本研究顯示，Her-2在甲狀腺乳頭狀癌中呈陽性高表達，且與腫瘤大小、局部浸潤、淋巴結轉移有關。

Ki67是一種DNA結合蛋白，是反映組織細胞增殖活性的重要指標。Ki67免疫組織化學法染色可將大部分G0期以外的細胞標記，Ki67的陽性率越高，說明處于增殖周期的細胞比例越高，腫瘤生長越快。Ki67單克隆抗體可快速識別正在增殖分裂的細胞，是腫瘤免疫組織化學法最常見的標志物，在惡性腫瘤中常過度表達，該指標廣泛應用于多種惡性腫瘤增殖活性的檢測[15]。本研究顯示，Ki67的表達僅與淋巴結轉移有關，與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、組織學分型、分化程度無關，與相關研究結果一致[16]。

本研究中，甲狀腺乳頭狀癌組織中P53、Her-2陽性表達率較甲狀腺腺瘤高，對臨床工作中評估甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展及預后有一定指導意義。Ki67對鑒別甲狀腺乳頭狀癌無明確臨床意義。

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