鄭 波 楊 德 殷曉蕾 焦 振 李 寧

(泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271016)

蜂蜜對茶多酚抑菌作用的影響*

鄭 波 楊 德 殷曉蕾 焦 振 李 寧

(泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271016)

目的 檢測蜂蜜是否能夠增強茶多酚的抑菌作用，以更好地了解蜂蜜和綠茶的保健功效，進而為口腔炎癥、潰瘍等疾病的治療提供新思路和方法。方法 以革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌大腸桿菌為研究對象，采用濾紙片法測定棗花蜂蜜或槐花蜂蜜對不同濃度的茶多酚抑菌作用的影響。 結(jié)果 棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液抑菌效果無明顯差別，但是均比茶多酚的抑菌效果明顯。結(jié)論 蜂蜜茶多酚混合物具有很好的抑菌作用，可以作為優(yōu)良的天然保健品，并為某些炎癥的治療提供新思路。

濾紙片法；棗花蜂蜜；槐花蜂蜜；茶多酚；抑菌作用

我國是世界上主要的茶葉生產(chǎn)國之一，茶葉資源非常豐富。茶葉中的有效成分茶多酚，是一種天然的抗氧化劑，具有很好的應用價值。茶多酚又名茶單寧、茶鞣質(zhì)，是茶葉中所含有的一類多羥基酚類化合物的總稱，簡稱為TP[1]?，F(xiàn)代研究[2-3]已證實，茶多酚有止渴提神、延緩衰老、抗腫瘤和抗輻射等多種作用。另外，茶多酚對細菌的抑菌效果較強，對霉菌和酵母菌的抑制效果不明顯[4]。蜂蜜被人們稱為“健康之友”，是自然界賜于人們的一種珍貴的保健食品，它不但甜爽可口，營養(yǎng)豐富，而且可以治療創(chuàng)傷、便秘、潰瘍、鼻炎等疾病[5-7]。此外，國內(nèi)已有研究發(fā)現(xiàn)蜂蜜因其滲透性、酸度以及含有過氧化氫等抗菌物質(zhì)使其具有很好的抑菌效果[8]。但是目前,有關蜂蜜與茶多酚混合物對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌抑制作用的研究較少。本研究通過檢測棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合物對革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌大腸桿菌的抑制效果，使我們更好地了解蜂蜜和綠茶的保健功效，進而為蜂蜜類茶飲料的抑菌保存提供新方法和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1菌種來源

供試細菌有革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、革蘭氏陰性菌大腸桿菌(Escherichiacoli)。

1.2培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基按標準方法配制，分裝滅菌備用。

1.3茶多酚

供試茶多酚由河南天潤生物科技有限公司提供。茶多酚>950 mg/g，兒茶素>800 mg/g，EGCG>400 mg/g,咖啡堿<2 mg/g。使用時，用無菌水配制成所需濃度的溶液。

1.4蜂蜜

供試蜂蜜由寧波新康蜂業(yè)有限公司提供棗花蜂蜜及槐花蜂蜜。使用時，用無菌水配制成所需濃度的溶液。

1.5方法

1.5.1菌懸液的制備 用無菌生理鹽水制成稀釋度為10-6的大腸桿菌懸液和稀釋度為10-3的金黃色葡萄球菌懸液。

1.5.2茶多酚最低抑菌濃度的測定 將茶多酚溶液溶于無菌水中，配置成不同質(zhì)量濃度的茶多酚溶液，濃度設定如下：0.0005，0.001，0.005，0.075，0.01(單位：g/ml)，分別將無菌濾紙片浸泡于上述茶多酚溶液中，放置于涂布有金黃色葡萄球菌或大腸桿菌的平皿上，培養(yǎng)24 h后觀察是否有抑菌圈產(chǎn)生。

1.5.3蜂蜜溶液使用濃度的確定 將棗花蜂蜜和槐花蜂蜜溶液分別溶于無菌水中，配置不同濃度的蜂蜜溶液，濃度(體積比)設定如下：10%、20%、30%、40%、50%。將上述配置的蜂蜜溶液分別加入大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的菌液中，培養(yǎng)24 h后觀察其渾濁度，從而測定不同濃度蜂蜜溶液的抑菌效果，進而確定茶多酚與蜂蜜溶液的配比。

1.5.4茶多酚溶液抑菌效果檢測 用濾紙片法分別將已滅菌烘干的圓濾紙片(直徑為6 mm)浸入質(zhì)量濃度不同的茶多酚溶液中，濃度設定如下：0.005，0.010，0.015，0.020，0.025(單位：g/ml)，撈出瀝干，貼于含菌平板中。每個平板貼3片濾紙片，重復3次，培養(yǎng)24 h，測定抑菌圈直徑，以無菌水作為對照。

1.5.5蜂蜜茶多酚混合液抑菌效果檢測 采用濾紙片法，將已滅菌烘干的圓濾紙片(直徑為6 mm)浸入棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液中，撈出瀝干，貼于含菌平板中。每個平板貼3片濾紙片，重復3次，培養(yǎng)24 h，測定抑菌圈直徑，以無菌水作為對照。

1.6實驗設計及數(shù)據(jù)處理

抑菌圈直徑利用十字交叉法進行測量。實驗數(shù)據(jù)采用二因素多水平方差分析，其中 A 因素(實驗所需供試菌)設2個水平；B因素(蜂蜜茶多酚混合液中茶多酚質(zhì)量濃度)設6個水平(含對照組)。運用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，對抑菌實驗結(jié)果進行方差分析，不同實驗菌及茶多酚不同濃度之間的差異顯著性均采用LSD法進行多重比較。

2 結(jié) 果

2.1茶多酚最低抑菌濃度的測定

經(jīng)濾紙片法檢測發(fā)現(xiàn)，濃度為0.0005 g/ml、0.001 g/ml的茶多酚溶液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌沒有抑制作用。濃度為0.005 g/ml的茶多酚溶液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌開始表現(xiàn)出抑菌效果，并且隨著濃度的升高抑菌效果越好。因此，最低抑菌濃度為0.005 g/ml(表1)。

表1 茶多酚最低抑菌濃度的測定

注：“-”沒有抑菌作用，“+”有抑菌作用。

2.2蜂蜜溶液使用濃度的確定

經(jīng)目測觀察發(fā)現(xiàn)，不同濃度的棗花蜂蜜溶液或槐花蜂蜜溶液(體積比為：10%、20%、30%、40%、50%)對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有抑制效果，并且蜂蜜濃度越高抑菌效果越好。其中50%的蜂蜜溶液抑菌效果顯著，因此采用此濃度的蜂蜜溶液檢測對茶多酚的抑菌作用影響。

2.3棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液抑菌作用檢測

通過測量茶多酚、棗花蜂蜜與茶多酚混合液、槐花蜂蜜與茶多酚混合液分別對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌產(chǎn)生的抑菌圈直徑。由圖1和圖2可知，棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有明顯的抑菌效果。其中，當茶多酚濃度為0.005g/ml時，棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液對金黃色葡萄球菌抑制作用明顯增強，而當茶多酚濃度為0.01 g/ml時，棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液對大腸桿菌抑制作用明顯增強。

另外，棗花蜂蜜茶多酚混合液與槐花蜂蜜茶多酚混合液對金黃色葡萄球菌或大腸桿菌的抑菌效果沒有顯著差異。棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液分別對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用也沒有明顯差異。

圖1 茶多酚、棗花蜂蜜與茶多酚混合液、槐花蜂蜜與茶多酚混合液對金黃色葡萄球菌抑菌作用檢測

圖2 茶多酚、棗花蜂蜜與茶多酚混合液、槐花蜂蜜與茶多酚混合液對大腸桿菌抑菌作用檢測

3 討 論

由以上實驗結(jié)果可知，棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有明顯的抑菌效果，并且均比茶多酚溶液的抑菌效果顯著。但是，棗花蜂蜜茶多酚混合液與槐花蜂蜜茶多酚混合液對金黃色葡萄球菌或大腸桿菌的抑菌效果沒有顯著差異。另外棗花蜂蜜或槐花蜂蜜與茶多酚混合液分別對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用沒有顯著性差異。

有研究發(fā)現(xiàn)不同來源的蜂蜜的抗菌效果不同[9-10]，但在本研究中棗花蜂蜜或槐花蜂蜜對大腸桿菌或金黃色葡萄球菌的抑菌影響差異不明顯，并且棗花蜂蜜或槐花蜂蜜對茶多酚的抑菌作用的影響也無明顯差異。這可能是因為棗花或槐花蜂蜜的主要抗菌物質(zhì)相似或者抗菌物質(zhì)的含量相近。另外，蜂蜜生產(chǎn)的時間及貯存條件也都有可能影響蜂蜜的抗菌效果。

目前，對蜂蜜或綠茶的抗菌功效了解比較清楚，但蜂蜜與茶混合液的抗菌功效還有待于被進一步研究，進而為口腔炎癥、潰瘍等疾病的治療提供新思路和方法。

[1] 楊彩霞，朱宇匯，張繼. 常見茶多酚純化工藝探究[J]. 食品研究與開發(fā), 2011, 32(1):169-171.

[2] 嚴志慧，方義，張錫友，等. 茶多酚提取與分離純化研究進展[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學, 2010, 56(6):86-87.

[3] 傅錦坤，于臘佳. 茶多酚對自由基抑制效應[J]. 廈門大學學報:自然科學版, 1998, 37(5):727-731.

[4] 唐裕芳，張妙玲，馮波，等. 茶多酚的抑菌活性研究[J]. 浙江林學院學報, 2005, 22(5):553-557.

[5] 江嬌. 蜂蜜的研究進展及臨床應用[J]. 成都醫(yī)藥, 1999, 25(1):61-62.

[6] 吳金泉．蜜蜂.健康.美容[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998．

[7] 呂效吾. 蜂菌殺菌作用的機理[J]. 蜜蜂雜志, 1990(1):10-11.

[8] Roderick JW. The contribution of catalase and other natural products to the antibacterial activity of honey:are-view[J]. Food Chemistry, 2000,71:235-238.

[9] Allen KL, Molan PC, Reid GM. Asurvey of the antibacterial activity of some NewZealand honeys[J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology,1991,43:817-822.

[10] Sinigaglia M, Corbo MR, Massa S. Effect of three honey types on Escherichiacoli O157BH7 and Shigellaf lexneri[J]. Advances in Food Sciences, 2000, 22(5/6): 156-160.

Study of antibacterial activity of honey on tea polyphenols

ZHENG Bo YANG De YIN Xiao-lei JIAO Zhen LI Ning

(Taishan Medical University, Taian 271016 China)

Objective: To explore whether honey can enhance the antibacterial activity of tea polyphenols, and to help us to understand the health effects of honey and green tea, and to provide new ideas and methods for the treatment of oral inflammation, ulcers and other diseases. Methods: The gram positive bacteria (Staphylococcus aureus ) and the gram negative (Escherichia coli) were used. Filter paper method was used to test the antibacterial activity of Acacia honey and tea polyphenols mixture or Huaihua honey and tea polyphenols mixture. Results: The antibacterial activity of Acacia honey and tea polyphenols mixture was similar to the Huaihua honey and tea polyphenols mixture's, but both were more significant than the tea polyphenols'. Conclution: Honey and green tea mixture has a good antibacterial activity, which can be used as an excellent natural health care product, and some inflammations will be treated with honey and green tea mixture.

Filter paper method; acacia honey; huaihua honey; tea polyphenols; antibacterial activity

國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201510439057) 。

鄭波，男，在讀本科生。

殷曉蕾，女，博士，講師，E-mail：Yinxiaolei0113@163.com。

TS281

A

1004-7115(2018)01-0047-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.014

2017-11-02)