覃 勇，黃文炳，黃金山，趙 聰，唐云姣，班雪花，施開創(chuàng)

（1.百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，百色 533000；2.平果縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，平果 531400；3.右江區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，百色 533000；4.田東縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，田東 531500；5.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南寧 530001）

口蹄疫、豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征三種疫苗同步兩點(diǎn)免疫在規(guī)模豬場(chǎng)的應(yīng)用試驗(yàn)

覃 勇1，黃文炳2，黃金山3，趙 聰1，唐云姣1，班雪花4，施開創(chuàng)5

（1.百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，百色 533000；2.平果縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，平果 531400；3.右江區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，百色 533000；4.田東縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，田東 531500；5.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南寧 530001）

為探索和評(píng)估口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）、豬瘟（classical swine fever，CSF）、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）的合理免疫程序，選擇6個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，其中3個(gè)豬場(chǎng)采用“332法”免疫程序（即先用FMD和CSF疫苗同時(shí)在頸部?jī)蓚?cè)注射，間隔14 d后再用HP-PRRS疫苗注射），另3個(gè)豬場(chǎng)采用“321法”免疫程序（即將CSF和HP-PRRS疫苗混合后作1針在頸部一側(cè)注射，F(xiàn)MD疫苗作1針在頸部另一側(cè)注射），每季度采集血清和病死豬組織樣品。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血清中的FMD、CSF和HP-PRRS抗體，應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)組織樣品中的FMD、CSF和HP-PRRS病原體；統(tǒng)計(jì)分析抗體陽性率、發(fā)病率、死亡率、死亡豬病原陽性率等評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果顯示，應(yīng)用“321法”的3個(gè)豬場(chǎng)與應(yīng)用“332法”的3個(gè)豬場(chǎng)相比，其生豬死亡率（下降1.3%）、HP-PRRS病原體陽性率（下降6.6%）顯著下降（P＜0.05），而其他考核指標(biāo)則差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究表明，規(guī)模豬場(chǎng)應(yīng)用“321法”免疫程序的免疫效果優(yōu)于“332法”免疫程序的免疫效果，值得在臨床推廣應(yīng)用。

口蹄疫；豬瘟；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征；免疫程序；田間試驗(yàn)

口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）、豬瘟（classical swine fever，CSF）、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS）是當(dāng)前國內(nèi)嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）感染可以導(dǎo)致免疫抑制和抗體依賴性增強(qiáng)作用[1,2]，可以影響CSF疫苗的免疫效果[3,4]；豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）感染也會(huì)抑制機(jī)體的免疫功能[5,6]，影響FMD疫苗的免疫效果[7,8]。為做好FMD、CSF和HP-PRRS的防控，各級(jí)政府和廣大養(yǎng)殖戶投入了大量的人力、物力和財(cái)力。其中，疫苗免疫是最為重要的防控措施，而合理的免疫程序?qū)γ庖咝Ч陵P(guān)重要。為此，許多學(xué)者開展了FMD、CSF和HPPRRS 3種疫苗不同免疫程序的研究，但不同學(xué)者的研究結(jié)果有所差異。張長龍等[9]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF和HP-PRRS 3種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫相互之間干擾較大；而接種CSF疫苗7 d后，再接種FMD和HP-PRRS疫苗，兩者具有協(xié)同促進(jìn)作用。盧景等[10]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF和HP-PRRS 3種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，其抗體水平都低于單獨(dú)免疫；FMD和HP-PRRS疫苗或CSF和HP-PRRS疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，均會(huì)產(chǎn)生相互干擾作用。竇鵬勛等[11]報(bào)道，F(xiàn)MD與HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫具有協(xié)同作用，CSF和HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫會(huì)相互影響。馬睿麟等[12]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF和HP-PRRS 3種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫或單獨(dú)免疫，免疫效果一致。陶得和等[13]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF、HPPRRS疫苗同時(shí)免疫的效果優(yōu)于兩兩聯(lián)合免疫的效果。本課題組開展的3種疫苗不同免疫程序的前期研究表明，先用FMD和CSF疫苗同時(shí)在頸部分點(diǎn)注射、間隔14 d后再用HP-PRRS疫苗注射（簡(jiǎn)稱“332法”），與HP-PRRS和CSF疫苗釋稀后混合在一起作為一針、FMD疫苗作為一針同時(shí)分點(diǎn)注射（簡(jiǎn)稱“321”法），均取得了良好的免疫效果[14]。由于“321法”只需開展一次注射即可完成三種疫苗的免疫，深受廣大養(yǎng)殖戶和獸醫(yī)人員的歡迎。本研究將“332法”和“321法”免疫程序在6個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)擴(kuò)大田間應(yīng)用試驗(yàn)，比較兩種方法的免疫效果，為臨床大面積推廣應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

2015年試驗(yàn)期間，口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株）在第一、二季度使用內(nèi)蒙古必威安泰生物科技有限公司生產(chǎn)的疫苗（批號(hào)2014009），在第三、四季度使用中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的疫苗（批號(hào)1411006）；豬瘟弱毒疫苗（細(xì)胞源）使用成都天邦生物制品有限公司生產(chǎn)的疫苗（批號(hào)2014076）；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗（TJM-F92株）使用吉林特研生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的疫苗（批號(hào)2014121002）。

1.2 主要試劑

口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA試劑盒為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所產(chǎn)品（批號(hào)2014092301、20150415101-2、20150729101-2），豬瘟（CSFV-Ab）抗體檢測(cè)試劑盒為韓國金諾公司產(chǎn)品（批號(hào)107HS544），豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒為法國LSI公司產(chǎn)品（批號(hào)5-TTVETPRA-047）?？谔阋咄ㄓ眯蚏T-PCR檢測(cè)試劑盒（批號(hào)FMD20141216P）、豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測(cè)試劑盒（批號(hào)CSF20141218P）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Nsp2 1594～1680變異株）RT-PCR檢測(cè)試劑盒（批號(hào)HPRRS20150203P）均為北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇6個(gè)自繁自養(yǎng)的中小規(guī)模豬場(chǎng)，這些豬場(chǎng)飼養(yǎng)生豬品種、飼養(yǎng)規(guī)模、飼養(yǎng)模式、管理水平、免疫疫苗種類及免疫程序（主要免疫口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病、豬圓環(huán)病毒病等）基本一致。近年生產(chǎn)平穩(wěn)，沒有發(fā)生傳染病流行及異常大量死亡現(xiàn)象，僅有個(gè)別豬只零星發(fā)病死亡或因消瘦、病弱而被淘汰。2014～2016年，應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室建立的鑒別檢測(cè)PRRSV經(jīng)典株、變異株和疫苗株的多重RT-PCR方法[15]，對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)PRRS流行情況進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，未發(fā)現(xiàn)PRRSV經(jīng)典株在豬群內(nèi)流行。

6個(gè)試驗(yàn)豬場(chǎng)包括廣西壯族自治區(qū)右江區(qū)A、B豬場(chǎng)、田東縣C、D豬場(chǎng)、平果縣E、F豬場(chǎng)，25～28日齡斷奶，30～35日齡首次免疫。其中A、C、E場(chǎng)采用“332法”免疫程序，即先用FMD O型滅活疫苗和CSF弱毒疫苗在頸部?jī)蓚?cè)同時(shí)分點(diǎn)注射，間隔14 d后，再用HP-PRRS弱毒疫苗（TJM-F92株）免疫，免疫劑量為1 mL（頭份）/頭；B、D、F場(chǎng)采用“321法”免疫程序，即將CSF弱毒疫苗和HP-PRRS弱毒疫苗（TJM-F92株）釋稀后混合在一起作為一針在頸部一側(cè)注射，同時(shí)將FMD O型滅活疫苗作為一針在頸部另一側(cè)注射，免疫劑量為1 mL（頭份）/頭。于每個(gè)季度最后一個(gè)月的20～25日，分別在6個(gè)豬場(chǎng)隨機(jī)采集首次免疫后30～45 d的血清樣品各20份，全年共480份；在6個(gè)豬場(chǎng)的日常管理和疫病防控中，根據(jù)豬群的健康狀況和生產(chǎn)指標(biāo)，結(jié)合發(fā)病情況和臨床癥狀，解剖病死或淘汰豬，發(fā)現(xiàn)疑似FMD、CSF、HP-PRRS等傳染病明顯病變的，則采集組織樣品（心、肝、肺、扁桃體、淋巴結(jié)等），每個(gè)豬場(chǎng)每個(gè)季度各10份，全年共240份。置-20℃保存?zhèn)溆?。同時(shí)，在6個(gè)豬場(chǎng)各隨機(jī)選擇1窩（8頭/窩）30～35日齡健康小豬，作為免疫抗體消長規(guī)律的監(jiān)測(cè)豬。于免疫后0、15、30、60、90 d分別采集血清，共240份，置-20℃保存?zhèn)溆?。其中，?32法”免疫程序的豬場(chǎng)分別按照FMD O型滅活疫苗和CSF弱毒疫苗免疫時(shí)間、HP-PRRS弱毒疫苗免疫時(shí)間采樣。

1.4 血清抗體檢測(cè)

HP-PRRS抗體采用ELISA檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)：IRPC≤20時(shí)判為HP-PRRS抗體陰性，IRPC＞20時(shí)判為HP-PRRS抗體陽性；CSF抗體采用ELISA檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)：PC＜40 %時(shí)判為CSF抗體陰性，PC≥40%時(shí)判為CSF抗體陽性；FMD抗體采用液相阻斷ELISA檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，判斷標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照臨界值，抗體效價(jià)＜1:64時(shí)判為FMD O型抗體陰性，1:64時(shí)判為FMD O型抗體可疑，≥1:128時(shí)判為FMD O型抗體陽性。

1.5 組織樣品病原檢測(cè)

FMDV采用RT-PCR檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，被檢樣品出現(xiàn)131 bp擴(kuò)增帶時(shí)判為FMDV陽性，否則為陰性；CSFV采用RT-PCR檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，被檢樣品出現(xiàn)235 bp擴(kuò)增帶時(shí)判為CSFV陽性，否則為陰性；PRRSV采用RT-PCR檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，被檢樣品出現(xiàn)278 bp擴(kuò)增帶時(shí)判為HP-PRRSV陽性，否則為陰性。

1.6 數(shù)據(jù)采集與統(tǒng)計(jì)分析

根據(jù)6個(gè)試驗(yàn)豬場(chǎng)日常防疫檔案記錄，統(tǒng)計(jì)分析生豬免疫數(shù)、發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)；根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)分析抗體陽性率、病原陽性率。利用excel 2007 單因素方差分析法對(duì)各數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗體消長規(guī)律檢測(cè)結(jié)果

從6個(gè)豬場(chǎng)各選取一窩豬（8頭/窩），于疫苗免疫后0、15、30、60、90 d采集血清，共240份。分別應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)FMD、CSF、HP-PRRS抗體。結(jié)果顯示，F(xiàn)MD、CSF、HP-PRRS抗體于免疫后15 d抗體水平迅速提高，到30 d達(dá)到最高峰，此后逐步下降，到90 d時(shí)抗體陽性率均高于70%（見圖1），仍達(dá)到農(nóng)業(yè)部對(duì)免疫抗體群體合格率的要求。數(shù)據(jù)分析表明，應(yīng)用“321法”與“332法”免疫程序的抗體陽性率在試驗(yàn)期間差異均不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

采集的480份血清進(jìn)行FMD、CSF、HP-PRRS抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，應(yīng)用“321法”與“332法”免疫程序相比，F(xiàn)MD抗體陽性率低2.9%，差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.1274＞0.05）；CSF抗體陽性率低0.8%，差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.7216＞0.05）；HP-PRRS抗體陽性率高3.7%，差異不具備應(yīng)用ELISA方法，對(duì)6個(gè)豬場(chǎng)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.4507＞0.05），見表2。

2.3 生豬發(fā)病率與死亡率

對(duì)6個(gè)豬場(chǎng)的飼養(yǎng)量、發(fā)病率、死亡率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示：應(yīng)用“321法”與“332法”免疫程序相比，生豬平均發(fā)病率低1.5%，差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.1547＞0.05），生豬平均死亡率低1.3%，差異具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0019＜0.05），見表3。

2.4 病死豬病原檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用RT-PCR方法，對(duì)從6個(gè)豬場(chǎng)采集的240份病死豬組織樣品進(jìn)行FMDV、CSFV、HP-PRRSV病原檢測(cè)。結(jié)果顯示：應(yīng)用“321法”與“332法”免疫程序相比，F(xiàn)MDV均為陰性；CSFV陽性率低0.8%，差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.7502＞0.05）；HP-PRRSV陽性率低6.6%，差異具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04983＜0.05），見表4，部分病原檢測(cè)結(jié)果見圖2。

圖1 疫苗免疫后FMD（A）、CSF（B）和HP-PRRS（C）抗體動(dòng)態(tài)變化情況Fig. 1 Changes of FMD (A), CSF (B) and HP-PRRS (C) antibodies after vaccination

表1 疫苗免疫后抗體消長情況Table 1 Changes of antibody positive rate after immunization with vaccines

表2 FMD、CSF和HP-PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果Table 2 The detected results of FMD, CSF and HP-PRRS antibodies

表3 生豬發(fā)病率和死亡率情況Table 3 The data of morbidity rate and mortality rate

表4 病死豬FMDV、CSFV和HP-PRRSV檢測(cè)結(jié)果Table 4 The detected results of FMDV, CSFV and HP-PRRSV from dead pigs

2.5 綜合評(píng)價(jià)

“321法”與采用“332法”免疫程序相比，其生豬死亡率、病死豬HP-PRRSV病原檢出率顯著降低（P

綜合分析各項(xiàng)考核指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，采用＜0.05），表明“321法”免疫程序取得更佳的防控效果，見表5。

3 討論

規(guī)模豬場(chǎng)需要免疫的疫苗種類多、勞動(dòng)強(qiáng)度大，為簡(jiǎn)化免疫程序、減少免疫次數(shù)、提高免疫效果，許多學(xué)者針對(duì)FMD、CSF、HP-PRRS三種疫苗開展了大量免疫試驗(yàn)。張長龍等[9]采用三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，發(fā)現(xiàn)三種疫苗之間相互干擾較大，CSF抗體產(chǎn)生時(shí)間推遲；而先接種CSF疫苗，7 d后接種FMD和HP-PRRS疫苗，后兩者具有協(xié)同促進(jìn)作用。盧景等[10]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF和HP-PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，其抗體水平都低于單獨(dú)免疫；FMD和HP-PRRS疫苗或CSF和HP-PRRS疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，均會(huì)產(chǎn)生相互干擾作用，但對(duì)7 d后免疫的CSF疫苗或FMD疫苗沒有影響；FMD和CSF疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，7 d后再免疫HP-PRRS疫苗，其抗體效價(jià)與三種疫苗單獨(dú)免疫基本一致。竇鵬勛等[11]報(bào)道，CSF、FMD、HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫可取得理想的免疫效果，F(xiàn)MD與HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫具有協(xié)同作用，CSF和HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫會(huì)相互干擾。馬睿麟等[12]報(bào)道，CSF和HP-PRRS疫苗組合免疫，7 d后免疫FMD疫苗，F(xiàn)MD抗體值較低；先免疫CSF疫苗，7 d后免疫FMD和HP-PRRS疫苗，豬瘟抗體受到干擾；FMD、CSF和PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫或單獨(dú)免疫，免疫效果一致。陳文武等[16]報(bào)道，先免疫HP-PRRS疫苗，7 d后同時(shí)分點(diǎn)注射FMD和CSF疫苗，或者CSF、FMD、HP-PRRS三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫注射，均獲得較好的免疫效果；CSF和FMD同時(shí)免疫具有協(xié)同作用，CSF和HP-PRRS或FMD和HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫會(huì)相互干擾。任宇斕等[17]用FMD、CSF、HP-PRRS疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射以及3種疫苗間隔7 d免疫注射，均取得理想的免疫效果。陶得和等[13]報(bào)道，F(xiàn)MD、CSF、HP-PRRS疫苗同時(shí)免疫的效果優(yōu)于兩兩聯(lián)合免疫的效果?？梢?，不同學(xué)者的試驗(yàn)結(jié)果并不完全一致，這可能與不同地域的氣候條件、養(yǎng)殖習(xí)慣、飼養(yǎng)管理、豬的品種品系、年齡、健康狀況、疫苗種類和生產(chǎn)廠家、免疫程序、豬群基礎(chǔ)免疫、母源抗體水平等多種因素的影響有關(guān)。值得注意的是，以上報(bào)道均是小規(guī)模試驗(yàn)所獲得的研究數(shù)據(jù)，迄今未見臨床較大規(guī)模應(yīng)用的數(shù)據(jù)。臨床實(shí)際應(yīng)用的效果如何，有待于進(jìn)一步擴(kuò)大田間應(yīng)用試驗(yàn)。

本課題組從節(jié)約人力、物力、財(cái)力、時(shí)間成本以及獲得最佳防控效果等多方面考慮，結(jié)合廣西當(dāng)前政府采購3種疫苗的種類以及常用的幾種免疫方式，開展試驗(yàn)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CSF弱毒疫苗和HPPRRS弱毒疫苗釋稀后混合為一針，F(xiàn)MD滅活疫苗另作一針同時(shí)分點(diǎn)免疫（簡(jiǎn)稱“321法”）；或者先用FMD滅活疫苗和CSF弱毒疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫，間隔14 d后，再用HP-PRRS弱毒疫苗免疫（簡(jiǎn)稱“332法”），均取得較好的免疫效果[14]。周建國等[18]在云南省的試驗(yàn)，也得到類似的結(jié)果。為將該項(xiàng)研究成果大面積推廣應(yīng)用于臨床，本研究進(jìn)一步在3個(gè)縣6個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)擴(kuò)大田間應(yīng)用試驗(yàn)，其中3個(gè)豬場(chǎng)應(yīng)用“332法”、另3個(gè)豬場(chǎng)應(yīng)用“321法”免疫程序。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用“321法”免疫程序與采用“332法”免疫程序相比，豬群死亡率（下降1.3%）、病死豬HP-PRRSV病原陽性率（下降6.6%）顯著下降（P＜0.05），其他指標(biāo)如發(fā)病率、抗體陽性率等雖然有所差異，但差異不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明，“321法”的免疫效果優(yōu)于“332法”的免疫效果，并且可以節(jié)省大量人力、物力、財(cái)力，值得在臨床推廣應(yīng)用。值得注意的是，即使經(jīng)過疫苗免疫，仍能從病死豬組織樣品中檢測(cè)到CSFV和HP-PRRSV，說明免疫豬群中仍有CSFV和HP-PRRSV存在和循環(huán)，對(duì)豬群構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，必須高度重視，加以重點(diǎn)防控。

近年來，我國通過實(shí)行強(qiáng)制免疫等措施，有效控制了PRRS的發(fā)生和蔓延，大大降低了該病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害。但是，國內(nèi)豬群仍普遍感染PRRSV野毒株[19]，PRRS時(shí)有發(fā)生，對(duì)該病的防控絲毫不可松懈，其中疫苗免疫仍是最為有效的措施。疫苗免疫可降低感染豬組織中的病毒含量，縮短豬群向外排毒時(shí)間，可減輕病豬的臨床癥狀、病理損傷，降低感染豬群的發(fā)病率和死亡率[20,21]。本研究中，采用“321法”與采用“332法”免疫程序相比，豬群的HP-PRRS抗體陽性率高3.7%，死亡率低1.3%，病死豬HP-PRRSV陽性率低6.6%，疫苗免疫取得明顯成效。但是，由于弱毒疫苗的免疫效果與豬群中的流行毒株密切相關(guān)，其對(duì)同一基因型同源毒株（homologous isolate）提供幾乎完全保護(hù)，對(duì)異源毒株（heterologous isolate）提供部分保護(hù)，而對(duì)不同基因型毒株幾乎不提供保護(hù)[22,23]。因此，必須加強(qiáng)豬群中流行毒株的監(jiān)測(cè)，明確豬群中流行的是基因I型（歐洲型）還是基因Ⅱ型（美洲型）、是美洲型經(jīng)典株還是變異株，以便使用有針對(duì)性的疫苗株，如選擇使用歐洲型或美洲型毒株，抑或選擇使用美洲型經(jīng)典株致弱活疫苗（如CH-1R株）或變異株致弱活疫苗（如JXA1-R、HuN4-F112、TJM-F92株），以提高疫苗免疫效果，確保防控成效。但是，近年來我國PRRSV流行毒株不斷出現(xiàn)新的特點(diǎn)，以Ch-1a株為代表的PRRSV經(jīng)典株在豬群中仍有流行，以JXA1株為代表的HP-PRRSV繼續(xù)作為流行優(yōu)勢(shì)毒株并處于持續(xù)變異之中[18]，不同毒株間（野毒株與野毒株、野毒株與疫苗株、疫苗株與疫苗株之間）發(fā)生重組不斷產(chǎn)生新的強(qiáng)毒株[24]，最近又報(bào)道了在nsp2基因存在393個(gè)核苷酸缺失的美洲型NADC30類病毒的存在[25]，加上已在部分省份的臨床發(fā)病豬群中分離到歐洲型毒株[26]，使得PRRSV流行毒株日益多樣化和復(fù)雜化。特別是美洲型NADC30類病毒在我國有迅速蔓延之勢(shì)[27]，而現(xiàn)有的基因Ⅱ型（美洲型）疫苗均不能提供完全的免疫保護(hù)[28]。如何針對(duì)臨床流行毒株，選擇確實(shí)有效的疫苗株，以提高疫苗的免疫效果，是當(dāng)前有效防控HP-PRRS所面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，必須給予高度重視。

綜上所述，采用“321”法免疫程序（即將CSF和HP-PRRS疫苗混合后作一針在頸部一側(cè)注射，F(xiàn)MD疫苗作一針在頸部另一側(cè)注射），在規(guī)模豬場(chǎng)開展田間應(yīng)用試驗(yàn)取得良好的免疫和防控效果，值得在臨床大量推廣應(yīng)用。

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FIELD EFFICACY OF FMD, CSF AND HP-PRRS VACCINES SIMULTANEOUSLY ADMINISTERED ON INTENSIVE PIG FARMS AT TWO DIFFERENT SITES

QIN Yong1, WANG Wen-bing2, HUANG Jin-shan3, ZHAO Cong1, TANG Yun-jiao1, BAN Xue-hua4,SHI Kai-chuang5
(1. Baise Center for Animal Disease Control and Prevention, Baise 533000, China; 2. Pingguo Center for Animal Disease Control and Prevention, Pingguo 531400, China; 3. Youjiang Center for Animal Disease Control and Prevention, Baise 533000, China; 4. Tiandong Center for Animal Disease Control and Prevention, Tiandong 531500, China; 5. Guangxi Center for Animal Disease Control and Prevention, Nanning 530001, China)

To explore the optimal vaccination procedure of foot-and-mouth disease (FMD), classical swine fever (CSF) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS) vaccines on intensive pig farms, field vaccination experiment was carried out on 6 pig farms. Two vaccination procedures were implemented. The "332" procedure used on three farms included FMD and CSF vaccines were injected at the same time and HP-PRRS vaccine was injected 14 days later. The "321" procedure used on other three farms was that HP-PRRS and CSF vaccines were mixed together and injected in one side of the necks and FMD vaccine was injected in other side of the necks. Serum samples from vaccinated pigs and tissues from dead pigs were collected quarterly for examination of antibody responses and lesions. Antibodies to FMD, CSF and HP-PRRS vaccines were detected by ELISA and viraemia of FMDV, CSFV and HP-PRRSV were detected in RT-PCR. The data of 3 farms implemented "321" procedure were compared with those of 3 farms implemented "332 " procedure. On the 3 farms implemented "321" procedure, the mortality rate of pigs decreased 1.3 % and the positive rate of HP-PRRSV decreased 6.6 %, which were of significance (P＜0.05) as compared with 3 farms implemented "332 " procedure. The results indicated that the field eきcacy of "321" procedure was better than that of "332" procedure, worthy to be applied in clinical practice on intensive pig farms.

Foot-and-mouth disease; classical swine fever; highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome; immune procedure; field eきcacy

S852.659.6

A

1674-6422（2017）06-0015-08

2017-03-06

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科轉(zhuǎn)14125004-22）；廣西水產(chǎn)畜牧科技項(xiàng)目（桂漁牧科201528017）；廣西科技重大專項(xiàng)（2017）

覃勇，男，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防控制工作

施開創(chuàng)，E-mail: shikaichuang@126.com