單玉平，李 鋒，鄧建新，洪 楓，閆 艷，黃繼康，周慶雨，史 慧，王韶山，朱國(guó)強(qiáng)

（1.江蘇省連云港市畜牧獸醫(yī)站，連云港222001；2. 江蘇省鹽城市濱?？h畜牧獸醫(yī)站，濱海224500；3.江蘇省徐州市銅山縣禽病門(mén)診部，徐州221116；4.江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，連云港222100；5. 江蘇省連云港市灌云縣畜牧獸醫(yī)站，連云港222200；6.正大集團(tuán)（中國(guó)區(qū)）飼料技術(shù)線(xiàn)，連云港222047；7.江蘇東海老淮豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司，東海222300；8.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；9. 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚(yáng)州225009）

連云港市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉病因分析

單玉平1，李 鋒1，鄧建新2，洪 楓3，閆 艷4，黃繼康5，周慶雨6，史 慧1，王韶山7，朱國(guó)強(qiáng)8,9

（1.江蘇省連云港市畜牧獸醫(yī)站，連云港222001；2. 江蘇省鹽城市濱?？h畜牧獸醫(yī)站，濱海224500；3.江蘇省徐州市銅山縣禽病門(mén)診部，徐州221116；4.江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，連云港222100；5. 江蘇省連云港市灌云縣畜牧獸醫(yī)站，連云港222200；6.正大集團(tuán)（中國(guó)區(qū)）飼料技術(shù)線(xiàn)，連云港222047；7.江蘇東海老淮豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司，東海222300；8.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；9. 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚(yáng)州225009）

為了有效防控連云港市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉，本研究對(duì)其轄區(qū)內(nèi)50頭以上的規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查和主要病因分析。結(jié)果顯示：致病性大腸桿菌是主要的細(xì)菌病病原體，豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis of pigs，TGEV）、豬輪狀病毒（Porcine Rotavirus, PROV）為主要的病毒病病原體。上述研究為連云港市甚至國(guó)內(nèi)其他豬場(chǎng)的新生仔豬腹瀉的防控提供了科學(xué)依據(jù)。

新生仔豬腹瀉；病因分析

新生仔豬腹瀉是世界各地豬場(chǎng)常見(jiàn)疾病[1]，對(duì)于本病的發(fā)病機(jī)制，病因復(fù)雜且尚無(wú)確切的定論。早期報(bào)道中致病性大腸桿菌是被研究最多的病原，但大腸桿菌并不是新生仔豬腹瀉的唯一病原[2-5]，Morin等[6]在1983年對(duì)加拿大魁北克省325次腹瀉暴發(fā)中的749頭仔豬的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，病毒病占據(jù)60%，細(xì)菌病占23%，其中傳染性胃腸炎病毒占據(jù)52%，大腸桿菌病占據(jù)22.4%。近些年來(lái)，新生仔豬腹瀉病的病因變得越來(lái)越復(fù)雜，如從泰國(guó)新生仔豬腹瀉病例中分離到1株具有多重藥物耐藥的產(chǎn)氣莢膜梭菌[7]；近年來(lái)在中國(guó)、美國(guó)、泰國(guó)等全球范圍內(nèi)豬流行性腹瀉也給豬養(yǎng)殖業(yè)造成了很大損失[8-10]；在丹麥，豬群出現(xiàn)了新的疫病綜合征，當(dāng)時(shí)并未有相對(duì)應(yīng)的疫苗和及時(shí)控制[11]。值得注意的是，混合和并發(fā)感染更是加劇了本病預(yù)防和控制的難度，在南美洲的巴西，發(fā)現(xiàn)了多重輪狀病毒感染的仔豬腹瀉[12]。

近幾年來(lái)，江蘇省連云港市及周邊地區(qū)大部分規(guī)模豬場(chǎng)都不同程度地發(fā)生以初生至10日齡哺乳仔豬為主的豬腹瀉病，該病在一個(gè)豬場(chǎng)可連續(xù)多批次發(fā)生，流行可延綿半年之久，無(wú)明顯季節(jié)性，發(fā)病率50%以上，死亡率達(dá)到80%以上，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了極大損失。為了解和掌握連云港市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉發(fā)生、發(fā)展，綜合分析病因和疫情發(fā)展趨勢(shì)，本研究開(kāi)展了規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)相關(guān)致瀉病原體進(jìn)行了檢測(cè)和分析。

1 材料與方法

1.1 材料

以連云港市轄區(qū)內(nèi)飼養(yǎng)量50頭以上的規(guī)模豬場(chǎng)為調(diào)查對(duì)象，發(fā)病豬體溫在40℃左右，部分病豬體溫正常，腹瀉初期多保留吮乳欲，脫水發(fā)生較快，眼球下陷明顯，一般不見(jiàn)DIC（彌漫性血管內(nèi)凝血）過(guò)程，病程約3～5 d；仔豬多在出生后1～3 d先嘔吐、后拉稀并很快死亡，糞便多呈黃色稀粥樣，嘔吐物為黃白色乳凝塊與胃液。

1.2 調(diào)查方法

豬瘟、高致病性繁殖與呼吸道綜合征病毒血清學(xué)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自韓國(guó)安捷動(dòng)物診斷試劑有限公司；傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、輪狀病毒、圓環(huán)病毒血清學(xué)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳芬德生物技術(shù)有限公司；豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒病原學(xué)試劑盒購(gòu)自上海拜諾生物科技有限公司；細(xì)菌鑒定所用試劑購(gòu)自天津生物芯片技術(shù)有限責(zé)任公司；并按照大腸桿菌O抗原定型血清診斷液使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行和判定結(jié)果。

1.2.1 調(diào)查方法 通過(guò)發(fā)放《連云港市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉調(diào)查表》，座談、走訪、查看養(yǎng)殖檔案等形式進(jìn)行調(diào)查，主要調(diào)查規(guī)模豬場(chǎng)、縣區(qū)畜牧獸醫(yī)門(mén)診、動(dòng)物診療機(jī)構(gòu)和鄉(xiāng)村防疫員，了解近2年來(lái)的新生仔豬發(fā)病情況，調(diào)查內(nèi)容主要涵蓋臨床癥狀、圈舍條件、溫度與濕度控制情況、環(huán)境衛(wèi)生及飼養(yǎng)管理?xiàng)l件、營(yíng)養(yǎng)水平等。

1.2.2 病原體檢測(cè) 及時(shí)采集發(fā)病仔豬腹瀉樣品、死亡仔豬的小腸及其內(nèi)容物、死亡仔豬的組織樣品（肝、脾、腎、腸系膜淋巴結(jié)等）、母豬的糞便、血樣等，并將采集樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理后，通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)、細(xì)菌培養(yǎng)分離鑒定、病原分離鑒定等方法，查找分析病因。

2 結(jié)果與討論

2.1 引起新生仔豬腹瀉病的可能因素

通過(guò)填寫(xiě)調(diào)查表、座談、查看養(yǎng)殖檔案、走訪等形式初步了解近2年來(lái)全市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉發(fā)病、死亡、免疫、治療、防控等情況，本研究統(tǒng)計(jì)匯總了新生仔豬腹瀉病影響可能因素，見(jiàn)表1。本研究共調(diào)查了全市3縣3區(qū)1026個(gè)發(fā)病規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，母豬9865頭，新生仔豬29 378頭，其中發(fā)病嚴(yán)重的地區(qū)有贛榆區(qū)、東?？h和灌南縣，發(fā)病率為61.7%（326／528），死亡率為85.4%（2630／3478）。新生仔豬腹瀉病因復(fù)雜，是多因素共同作用的結(jié)果，因此要認(rèn)真分析原因，采取綜合性的防控措施，減少新生仔豬腹瀉的發(fā)生。

2.2 病原體檢測(cè)

2.2.1 血清學(xué)檢測(cè) 利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)發(fā)病仔豬及其同群母豬中豬瘟病毒、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒、傳染性胃腸炎病毒、流行性腹瀉病毒、輪狀病毒、圓環(huán)病毒等病毒的抗體含量，其中發(fā)病仔豬豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒、傳染性胃腸炎病毒、流行性腹瀉病毒、輪狀病毒、圓環(huán)病毒抗體量合格率分別為77.5%（372／480）、89.3%（429／480）、22.7%（109／480）、12.9%（62／480）、8.5%（41／480）、15.6%（75／480），同群母豬中豬瘟病毒、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒、傳染性胃腸炎病毒、流行性腹瀉病毒、輪狀病毒、圓環(huán)病毒抗體量合格率分別為82.5%（396／480）、84.1%（452／480）、28.5%（137／480）、16.25%（78／480）、18.5%（89／480）、41.3%（198／480）。結(jié)果表明，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)普遍重視豬瘟和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的免疫，對(duì)傳染性胃腸炎、流行性腹瀉、輪狀病毒、圓環(huán)病毒等疫病的免疫不夠。

2.2.2 主要病原體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) 針對(duì)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)抗體合格率較低的豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒和圓環(huán)病毒4種病原體分別進(jìn)行了RT-PCR檢測(cè)[14]及細(xì)菌培養(yǎng)分離鑒定[15]，確定引起本次連云港市新生仔豬腹瀉的主要病原體，詳見(jiàn)表2。

表1 新生仔豬腹瀉病影響可能因素Table 1 The effecting factors of new neonatal porcine diarrhea-based syndrome

表2 新生仔豬腹瀉樣品中主要病原體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)Table 2 The PCR detection results of the samples from new neonatal porcine diarrhea-based syndrome

2.2.3 細(xì)菌病原體培養(yǎng)分離鑒定 無(wú)菌操作，將采集的病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，分別接種于鮮血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18～24 h內(nèi)觀察；對(duì)新生仔豬腹瀉大腸桿菌通過(guò)玻板凝集和試管凝集進(jìn)行了血清型定型，結(jié)果詳見(jiàn)表3。

表3 新生仔豬腹瀉大腸桿菌分離株的O型血清型Table 3 Details about the O serotypes of isolated E.coli from new neonatal porcine diarrhea syndrome

由此，表明引起本次江蘇省連云港市規(guī)模豬場(chǎng)新生仔豬腹瀉病因復(fù)雜，是多因素共同作用的結(jié)果，因此要認(rèn)真分析原因，采取綜合性的防控措施。消滅傳染源、切斷傳播途徑；保護(hù)易感染動(dòng)物，從而控制腹瀉的流行，最終消滅腹瀉。

[1] 翁善鋼. 新生仔豬腹瀉的病原體檢測(cè)[J]. 今日養(yǎng)豬業(yè),2015(10): 67-68.

[2] 李剛. 新生仔豬腹瀉的病因分析[J]. 中國(guó)豬業(yè), 2013(2):122-123.

[3] Jones G W, Rutter J M. Role of the K88 Antigen in the Pathogenesis of Neonatal Diarrhea Caused by Escherichia coli in Piglets[J]. Infec and Immun, 1972, 6(6): 918-927.

[4] Nakazawa M, Sugimoto C, Isayama Y,et al.Virulence factors in Escherichia coli isolated from piglets with neonatal and post-weaning diarrhea in Japan[J]. Vet Microbiol, 1987, 13(4): 291-300.

[5] Soderlind O, Thafvelin B, Mollby R. Virulence factors in Escherichia coli strains isolated from Swedish piglets with diarrhea[J]. J Clin Microbiol, 1988, 26(5): 879-884.

[6] Morin M, Turgeon D, Jolette J,et al. Neonatal Diarrhea of Pigs in Quebec: Infectious Causes of Significant Outbreaks[J]. Can J Comp Med, 1983, 47(1): 11-7.

[7] Ngamwongsatit B, Tanomsridachchai W, Suthienkul O,et al. Multidrug resistance in Clostridium perfringens isolated from diarrheal neonatal piglets in Thailand[J].Anaerobe, 2016, 38(88-93).

[8] Stevenson G W, Hoang H, Schwartz K,et al.Emergence of Porcine epidemic diarrhea virus in the United States:clinical signs, lesions, and viral genomic sequences[J]. J Vet Diag Invest, 2013, 25(5): 649-654.

[9] Li W, Li H, Liu Y,et al.New Variants of Porcine Epidemic Diarrhea Virus, China, 2011[J]. Emerg Infec Dis, 2012, 18(8): 1350-1353.

[10] Puranaveja S, Poolperm P, Lertwatcharasarakul P,et al.Chinese-like Strain of Porcine Epidemic Diarrhea Virus,Thailand[J]. Emerg Infec Dis j, 2009, 15(7): 1112-1115.

[11] Kongsted H, Toft N, Nielsen J P. Risk factors and epidemiological characteristics of new neonatal porcine diarrhoea syndrome in four Danish herds[J]. BMC Vet Res, 2014, 10(1):151.

[12] Molinari B L D, Possatti F, Lorenzetti E,et al. Unusual outbreak of post-weaning porcine diarrhea caused by single and mixed infections of rotavirus groups A, B, C,and H[J]. Vet Microbiol, 2016,193: 125-132.

[13] Zhao Z P, Yang Z, Lin W D,et al. The rate of coinfection for piglet diarrhea viruses in China and the genetic characterization of porcine epidemic diarrhea virus and porcine kobuvirus[J]. Acta Virol, 2016(60): 55-61.

[14] Ishikawa K, Sekiguchi H, Ogino T,et al. Direct and rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus by RTPCR[J]. J Virol Methods, 1997, 69(1-2): 191-195.

[15] 宦海霞, 苗曉青, 周瓊, 等. 江蘇省部分地區(qū)鵝源致病性大腸桿菌的分離、鑒定和耐藥性分析[J]. 飼料工業(yè),2007(15): 62-64.

INVESTIGATION OF CAUSATIVE AGENTS FOR NEONATAL PORCINE DIARRHEA SYNDROME ON LARGE-SCALE PIG FARMS IN LIANYUNGANG AREA

SHAN Yu-Ping1, LI-Feng1, DENG Jian-Xing2, HONG-Feng3, YAN-Yan4, HUANG Ji-Kang5,ZHOU Qing-Yu6, SI-Hui1, WANG Shao-Shan7, ZHU Guo-Qiang8,9(1. Lianyungang Husbandry and Veterinary Station, Lianyungang 222001, China; 2. Yancheng Binhai Husbandry and Veterinary Station, Binhai
224500, China; 3. Xuzhou Tongshan Avain Disease Diagnosis Department, Xuzhou 221116, China; 4. Lianyungang Ganyu Husbandry and
Veterinary Station, Lianyungang 222100, China; 5. Lianyungang Guanyun Husbandry and Veterinary Station, Lianyungang 222200, China;
6. Zhengda Group (China) Feed Technology, Lianyungang 222047, China; 7. Jiangsu Donghai Old Huai Pig Industry Development co. LTD,Donghai 222300, China; 8. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China; 9. Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou 225009, China)

The etiological agents involved in neonatal porcine diarrhea syndrome in more than 50 pigs in Lianyungang area of Jiangsu province were investigated in this study. The results showed that pathogenicEscherichia coliwas the major pathogen detected frombacteriological diseases and Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), Porcine transmission gastroenteritidis virus(TGEV), Porcine rotavirus (PRoV) were the major pathogens involved in virological diseases. This study provided scientific basis for prevention and control of neonatal porcine diarrnea syndrome in Lianyungang and other areas.

Neonatal porcine diarrhea syndrome; cause analysis

S852.612

B

1674-6422（2017）06-0070-04

2017-08-16

連云港市科技攻關(guān)項(xiàng)目（CN1505）；省“ 333工程”科研資助項(xiàng)目（BRA2016304）；省“六大人才高峰”資助項(xiàng)目（NY-149）；連云港市“521工程”科研資助項(xiàng)目

單玉平，男，農(nóng)業(yè)推廣研究員，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣、重大動(dòng)物疫病防控

朱國(guó)強(qiáng)，E-mail：yzgqzhu@yzu.edu.cn