初云海，來杰，賈靜麗，國紫薇，田明*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省食品藥品檢驗所，黑龍江 哈爾濱 150088；3.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

梔子厚樸湯對小鼠抗抑郁作用研究

初云海1，來杰2，賈靜麗3，國紫薇3，田明3*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省食品藥品檢驗所，黑龍江 哈爾濱 150088；3.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：研究評價梔子厚樸湯抗抑郁的藥效學作用。方法：選用小鼠行為絕望模型小鼠懸尾和強迫游泳實驗，以及利血平引起的體溫下降拮抗實驗和育亨賓毒性增強實驗，評價梔子厚樸湯抗抑郁作用及機制。結果：梔子厚樸湯的高、中劑量組(24 g/kg，12 g/kg)能顯著減少小鼠懸尾不動和強迫游泳不動時間(P<0.05)；梔子厚樸湯高、中、低三個劑量組(24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg)能有效抵抗利血平引起的體溫下降并增強育亨賓對小鼠的毒性(P<0.05)。結論：梔子厚樸湯具有抗抑郁的作用。

梔子厚樸湯;抗抑郁

梔子厚樸湯出自《傷寒論》，由梔子、厚樸、枳實三味藥組成，具有清熱除煩，寬胸消滿之功效。中醫(yī)臨床是主治熱擾胸腹證的基礎方。本文用梔子厚樸湯對小鼠抗抑郁作用及機制進行了研究。

1 實驗材料與儀器

1.1 動物

清潔級昆明小鼠，體質量20±2 g，雄性，由黑龍江中醫(yī)藥大學藥物安評中心提供。

1.2 藥品與儀器

梔子厚樸湯(自制，梔子14 g,厚樸12 g,枳實4 g，水煎煮，濾過，濾液濃縮制成1 g/mL的流浸膏)。鹽酸氯米帕明(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，100601)，利血平注射液(天津金耀氨基酸有限公司，1005281)，育亨賓(yohimbine,廣州市金華大化學試劑有限公司，200543)。電子體溫計(倍爾康jxb-178)，秒表(深圳市君斯達實業(yè)有限公司)，自制懸尾支架。

2 實驗方法

2.1 對急性應激所致動物絕望行為的影響

2.1.1 分組及給藥方法

小鼠50只隨機分成5組，即空白組、陽性對照組、梔子厚樸湯高、中、低劑量組。陽性對照組鹽酸氯米帕明40 mg/kg，低、中、高劑量梔子厚樸湯組(6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg)，空白組灌胃給予生理鹽水，每組均按0.4 mL/10 g體質量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天。

2.1.2 小鼠懸尾實驗(TST)

參照 Steru等[1]的方法，小鼠末次灌胃給藥1 h后，將小鼠尾端(在距尾尖2 cm處)用膠布固定在自制懸尾支架上，使其呈倒懸狀態(tài)，頭部離懸尾箱底約5 cm，每次同時測試2只動物，相互之間用紙板隔開。適應2 min后，記錄4 min之內，累計不動時間(小鼠停止掙扎)。

2.1.3 小鼠強迫游泳實驗(FST)

參照Porsolt等[2-3]的方法，小鼠于末次給藥后1 h，將小鼠單個放入高20 cm、直徑18 cm、水深10 cm、水溫(30±2)℃的水槽中，記錄累計不動時間(小鼠在水中停止掙扎或呈漂浮狀態(tài))。

2.2 小鼠利血平拮抗實驗

2.2.1 分組及給藥方法

小鼠60只隨機分成6組，即空白組、模型組、陽性對照組、梔子厚樸湯高、中、低劑量組。陽性對照組鹽酸氯米帕明40 mg/kg，高、中、低劑量梔子厚樸湯組(24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg)，空白組每天給予等量的生理鹽水，每組均按0.4 mL/10 g體質量灌胃給藥。每日灌胃一次，連續(xù)給藥7天。

2.2.2 體溫下降的觀測

參考Schelkunov[4-5]的方法，于末次給藥后1 h，除空白組外，腹腔注射4 g/kg利血平注射液，空白組腹腔注射等量的生理鹽水，4 h后測量體溫。記錄各組數(shù)據(jù)，比較給藥組及對照組中體溫的差異。

2.3 小鼠育亨賓毒性增強實驗

2.3.1 分組及給藥方法

小鼠120只隨機分成6組，即空白組、模型組、陽性對照組、梔子厚樸湯高、中、低劑量組。陽性對照組鹽酸氯米帕明40 mg/kg，梔子厚樸湯高、中、低劑量組(6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg)，空白組每天給予等量的生理鹽水，每組均按0.4 mL/10 g體質量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天。

2.3.2 小鼠死亡率的觀測

參考Quinton[6-7]的方法,每只小鼠末次灌胃給藥1 h后，除空白組給予生理鹽水外，其余各組小鼠皮下注射育亨賓40 mg/kg。觀察注射育亨賓18 h后，各組小鼠的死亡率。記錄小鼠的死亡率，比較給藥組、對照組小鼠的死亡率。

2.4 數(shù)據(jù)處理方法

3 實驗結果

3.1 小鼠懸尾實驗(TST)

實驗結果見表1，梔子厚樸湯中劑量組(12 g/kg)與高劑量組(24 g/kg)均能縮短小鼠的不動時間，與空白組比較P<0.05差異顯著，且高劑量效果最好。

表1 梔子厚樸湯對小鼠懸尾不動時間的影響

注：與空白組比較,*P<0.05

3.2 小鼠強迫游泳實驗(FST)

實驗結果見表2，梔子厚樸湯中劑量組(12 g/kg)與高劑量組(24 g/kg)均能縮短小鼠的不動時間，與空白組比較P<0.05差異顯著，且中劑量效果最好。

表2 梔子厚樸湯對小鼠強迫游泳不動時間的影響

注：與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01

3.3 小鼠利血平拮抗作用實驗

實驗結果見表3，梔子厚樸湯低、中、高三個劑量組均能拮抗利血平所致的溫度下降，與空白組比較P<0.05差異顯著。

表3 梔子厚樸湯對利血平所致小鼠體溫下降的影響

注：與空白組比較,▲P<0.05;與模型組比較,*P<0.05

3.4 小鼠育亨賓增強實驗

實驗結果見表4，梔子厚樸湯低、中、高三個劑量組均能顯著增加皮下注射育亨賓40 mg/kg小鼠的死亡率，與空白組比較P<0.05差異顯著。表明該方可能是通過影響去甲腎上腺素(NE)能神經傳遞，產生抗抑郁作用。

表4 梔子厚樸湯對小鼠育亨賓毒性增強作用的影響

注：與空白組比較,▲P<0.05;與模型組比較,*P<0.05

4 討論

抑郁癥是一種情感性精神障礙，以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征，中醫(yī)學屬于郁癥的范疇[8]。抑郁癥發(fā)病機率高，危害性大，嚴重影響人類的身心健康[9]。在抑郁癥治療藥物篩選中，F(xiàn)ST和TST實驗[10]常用作行為絕望模型(behavioural despair，BD)應用，也是行為藥理實驗中用于篩選和觀察抗抑郁藥物的可靠的實驗方法[11]，更是經典的抗抑郁評價模型[12]，雖然這一模型存在難以克服的藥物作用的假陽性和假陰性反映問題，但與其他抑郁模型相比，該方法簡單、快捷，有可靠性強的特點[13]。本實驗合并使用FST和TST兩種模型對梔子厚樸膠囊的初步研究，結果表明梔子厚樸湯高、中劑量組均能減少小鼠強迫游泳和懸尾的不動時間，說明了梔子厚樸湯對絕望引起的抑郁癥狀有作用。

利血平是一種囊泡再攝取抑制劑，它能使神經遞質甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)等耗竭，引起如體溫下降等生理上的變化[14]。本實驗通過小鼠利血平拮抗作用和小鼠育亨賓增強實驗，顯示梔子厚樸湯能拮抗利血平所致的小鼠體溫下降；能增強育亨賓毒性。因此本實驗初步推測梔子厚樸湯的抗抑郁作用機制，可能是與阻斷NE、5-HT等單胺類神經遞質的重攝取而抑制其生物胺失活，從而影響腦單胺遞質受體功能狀態(tài)有關。

《傷寒論》說:“傷寒下后，心煩腹?jié)M，臥起不安者，梔子厚樸湯主之?！贝朔诫m小，主治卻很明了。梔子除心煩，厚樸消胸腹脹滿，枳實除心下痞悶[15]。此方與小承氣湯僅一味之差，雖都治腹?jié)M，然小承氣湯所治偏下，本方所主則病位偏上?！芭P起不安”點出了病情的嚴重程度，也暗含了失眠之義。臨床上遇到神經官能癥、焦慮癥、失眠癥，應用此方則患者的精神狀態(tài)隨之好轉[16]。梔子厚樸湯處方各藥味所含的主要藥效成分，如厚樸酚、梔子苷、橙皮苷等多有抗抑郁作用的實驗研究[17]。梔子厚樸湯雖然是一個經典小方，但具有進一步研究開發(fā)價值。

[1] Steru L,Chermat R,Thierry B,et al.The tail suspension test:Anew method for screening antidepressants in mice[J].Psychopharmacology,1985,85(16):367-370.

[2] Porsolt RD,Bertin A,Jalfre M.Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants[J].Arch Int Pharmacodyn Ther,1977,229(12):327-336.

[3] Nixon MK.Additive effects of Lithium and antidepressants in the forced swimming test:further evidence for involvement of the serotoninergic system[J].Psychopharmacology,1994,115(9):59-64.

[4] Pawlowski L,Mazela H.Effects of antidepressant drugs ,selective noradrenaline Uptake inhibitors,on apomorphine-induced hypohermia in mice[J].Psychopharmacology,1986,88(5):240-246.

[5] Alpermann HG,Schacht U,Usinger P,et al.Pharmacological effects of Hoe 249:A new potential antidepressant [J].Drug DevRes,1992,259(6):267-282.

[6] Malick JB. Potentiation of yohimbine-induced lethality in mice:predictor of antidepressant potential[J].Drug Dev Res, 1983,22(3): 357-363.

[7] Alpermann HG,Schacht U,Usinger P,et al. Pharmacological effects of Hoe 249: A new potential antidepressant[J].Drug Dev Res, 1992,25(3):267-282.

[8] 王永炎.中醫(yī)內科學[M].上海:上?？茖W技術出版社,1998:274.

[9] 楊書彬，楊紹杰，盧春雪.中藥開心散抗抑郁癥的機制研究進展[J].中醫(yī)藥學報，2016，44(1)：79-81.

[10] Brugge K L，Hingtgen J N，Aprison M H，et al. Potentiated 52 hydroxytryptopan induced response suppression inrats following chronic reserpine[J]. Pharmacol BiochemBehavl，1987，26(2):287.

[11] 徐志偉,吳麗麗,嚴燦.逍遙散和丹梔逍遙散抗抑郁作用的實驗研究[J].中醫(yī)藥學報，2016，31(3)：79-81.

[12] 王文凱，孫雯，李廷利.生、炒酸棗仁配伍抗抑郁作用研究[J].中醫(yī)藥學報，2016，42(2):13-15.

[13] 呂俊華,鐘玲.實驗性抑郁癥動物模型的評價[J].中國病理生理雜志，2001，17(9):916.

[14] 季宇彬.中藥有效成分藥理與應用[M].哈爾濱：黑龍江科學技術出版社,2004：123-124.

[15] 張仲景.傷寒論[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2006:10.

[16] 蕭美珍.梔子厚樸湯臨證一得[J].湖南中醫(yī)學院學報,1989,9(2):951.

[17] 屈曉晟，楊義芳，張靜.梔子厚樸湯的不同提取方法及其抗抑郁譜效[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014,45(5):424-427.

R285.5;R277.7

A

1002-2392(2017)06-0049-03

2017-06-23

2017-11-12

黑龍江省中醫(yī)藥科研項目(ZHY16-094)

初云海(1973-),男，副主任藥師，主要研究方向：從事中藥調劑及方劑研究工作。

*通訊作者：田明(1963-),男，教授，碩士研究生導師，主要研究方向：中藥新藥研發(fā)。