楊烏日娜 薩日蓋 烏仁圖雅 賀喜格達(dá)來

(內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市蒙醫(yī)研究所,內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000)

不同滅菌方法對(duì)蒙藥讓·阿嘎日-8滅菌效果及目標(biāo)成分的影響

楊烏日娜 薩日蓋 烏仁圖雅 賀喜格達(dá)來

(內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市蒙醫(yī)研究所,內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000)

目的：考察4種滅菌方法對(duì)于讓·阿嘎日-8藥粉滅菌的效果以及滅菌過程中對(duì)目標(biāo)成分沒食子酸含量的影響。方法分別用鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種滅菌方法對(duì)讓·阿嘎日-8藥粉進(jìn)行滅菌處理，檢測(cè)滅菌前后藥粉的微生物限度指標(biāo)；用高效液相法測(cè)定滅菌后廣棗中沒食子酸含量。結(jié)果微生物檢測(cè)結(jié)果表明鈷60-γ射線、高壓滅菌效果較好，紫外、微波滅菌效果不太穩(wěn)定。目標(biāo)成分檢測(cè)結(jié)果表明鈷60-γ射線、高壓滅菌和紫外對(duì)沒食子酸影響較小，微波滅菌對(duì)沒食子酸影響較大。結(jié)論綜合滅菌效果和對(duì)目標(biāo)成分的影響，讓·阿嘎日-8藥粉滅菌方法可選用鈷60-γ射線或高壓滅菌。

沒食子酸;高效液相;微生物

當(dāng)前，蒙藥制劑生產(chǎn)質(zhì)量控制已成為實(shí)現(xiàn)蒙藥現(xiàn)代化的瓶頸問題，而微生物限度指標(biāo)的控制又是確保蒙藥制劑質(zhì)量的關(guān)鍵之一。蒙藥讓·阿嘎日-8是由沉香，廣棗，肉豆蔻，北沙參等八味藥組成的制劑。氣香，味苦，微酸。具有清肺心之“赫伊”，止咳等作用。用于胸肋悶痛，心悸氣短，咳嗽，前胸后背刺痛[1-2]。

本文選用蒙藥讓·阿嘎日-8為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種不同方法的滅菌處理，考察不同滅菌方法對(duì)細(xì)菌和霉菌的滅菌效果；選擇廣棗中的沒食子酸為目標(biāo)成分，測(cè)定其在滅菌后制劑中的含量?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器：L6-P6高效液相色譜儀，DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥，HPX-9082MBEX型數(shù)顯電熱培養(yǎng)箱，LDZX-75KBS型立式高壓滅菌鍋，紫外線消毒器，HY-2A型振蕩器，JJ-CJ-IFD型潔凈工作臺(tái)，SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱，Galanz微波爐。

1.2 試藥：沒食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110831-201204)，讓·阿嘎日-8散劑(鄂爾多斯蒙醫(yī)研究所蒙藥實(shí)驗(yàn)室配制)，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(02-087)，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(20150701)，乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基(02-007)，蛋白胨(01-001)，氯化鈉、無(wú)水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，甲醇，三乙胺，磷酸等均為分析純。

2.2 微生物檢查：取滅菌后的讓·阿嘎日-8藥粉參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版附錄XIII C微生物檢查法[3]。即環(huán)境潔凈度萬(wàn)級(jí)以下的局部潔凈度百級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢查過程嚴(yán)格遵守了無(wú)菌操作，防止了二次污染。

本實(shí)驗(yàn)檢查法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為35℃；霉菌培養(yǎng)溫度為27℃。檢驗(yàn)量即供試品的檢驗(yàn)量為10g。

2 方法與結(jié)果

2.1 滅菌處理：分別稱取8味藥材，粉碎后過100目篩，按表1所列滅菌設(shè)備及主要工藝參數(shù)進(jìn)行處理，得滅菌藥粉。

表1 滅菌設(shè)備及主要參數(shù)

供試品檢查：本法使用平皿法按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌數(shù)的測(cè)定。按計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備。用稀釋液稀釋成1:10稀釋劑的供試液。

平皿法：根據(jù)菌數(shù)報(bào)告規(guī)則取相應(yīng)稀釋級(jí)的供試液1mL，置直徑90mn的無(wú)菌平皿中，注入15～20mL濕度不超過45℃的熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。

陰性對(duì)照試驗(yàn)：取試驗(yàn)用的稀釋液1mL，置無(wú)菌平皿中，注入培養(yǎng)基，凝固，倒置培養(yǎng)。每種計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個(gè)平板，均不得有菌長(zhǎng)。

培養(yǎng)和計(jì)數(shù)：細(xì)菌培養(yǎng)3d、霉菌培養(yǎng)5d，逐日觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)2個(gè)平板的菌數(shù)平均數(shù)不小于15，則2個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計(jì)數(shù)。

菌數(shù)報(bào)告規(guī)則：細(xì)菌、酵母菌宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu、霉菌宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告(取2位有效數(shù)字)的依據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告1g、1mL或10cm2供試品中所含的菌數(shù)。

從圖1、2可以看出，對(duì)于細(xì)菌的滅菌效果強(qiáng)弱依次是鈷60-γ射線(Go-60)>高壓>微波>紫外。對(duì)于霉菌的滅菌效果強(qiáng)弱依次是鈷60-γ射線(Go-60)>高壓>微波>紫外。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見圖1，圖2。

表2 4種滅菌法的細(xì)菌和霉菌限度檢查結(jié)果

方劑名稱滅菌法微生物限度合格與否Go-60滅菌--紫外滅菌++讓·阿嘎日-8高壓滅菌--微波滅菌++未滅菌++

注：-表示檢查項(xiàng)合格項(xiàng)； +表示檢查不合格項(xiàng)。

2.4 對(duì)目標(biāo)成分的影響

2.4.1 色譜條件： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)波長(zhǎng):273 nm；流動(dòng)相:乙腈-0.1%三乙胺 0.3%磷酸溶液(1：99)；流速:1mL/min；柱溫:25 ℃。進(jìn)樣量：20μL。外標(biāo)法。

2.4.2 溶液的配制：對(duì)照品溶液的制備：精密稱取一定量的沒食子酸，用50%的甲醇配制成30μg/mL沒食子酸對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：精密稱取讓·阿嘎日-8藥粉5g置廣口瓶，加50%的甲醇25mL，稱其重量，超聲30min，再稱重量，將減少的部分用50%的甲醇補(bǔ)足，搖勻，抽濾，取繼濾液即可。

陰性對(duì)照品溶液的制備：精密稱取沒有加廣棗的讓·阿嘎日-8藥粉5g置廣口瓶，按供試品溶液的制備方法制備。

2.4.3 專屬性實(shí)驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液注入色譜儀，按2.4.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果見圖3，4，5。

由圖可見供試品溶液在對(duì)照品溶液出特征峰的相應(yīng)時(shí)間段里出峰而陰性對(duì)照溶液不出峰，表明其專屬性良好。

3 樣品含量測(cè)定

取不同方法滅菌后的讓·阿嘎日-8藥粉，按照2.4.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見圖6～9。結(jié)果，鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種方法滅菌后的讓·阿嘎日-8目標(biāo)成分含量分別為0.0053%，0.0055%，0.0043%，0.0002%。由此可見，各滅菌方法對(duì)于目標(biāo)成分的影響大小依次為高壓>鈷60-γ射線>紫外>微波。

4 討論

鈷60-γ射線(一定劑量)輻射蒙藥，滅菌效果好、效率高。但其費(fèi)用高，增加了成品藥的成本。我院制劑室每年藥物滅菌達(dá)15噸，每年就滅菌一項(xiàng)要用去約10多萬(wàn)的費(fèi)用。從經(jīng)濟(jì)效益上看是不夠理想的。除此用鈷60-γ射線滅菌能否對(duì)藥品產(chǎn)生放射性物質(zhì)的污染，目前尚不清楚。本次實(shí)驗(yàn)初步探索效果好、成本低、毒性殘留物少的滅菌方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高壓滅菌法是較為理想的滅菌方法。但在實(shí)際應(yīng)用中多少存在著局限性，因此有待進(jìn)一步深入研究。

[1]巴嘎那等.蒙藥方劑學(xué)[M].赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社,1984, 81-82

[2]內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)[S].赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社,1987,279

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010,附錄79-85.

R291.2

B

1006-6810(2017)06-0037-03

2017年3月10日收稿