陳振興

【摘要】以無菌播種取得的鐵皮石斛無菌苗作為試驗(yàn)材料，研究MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的添加物對(duì)鐵皮石斛快速壯苗的影響。結(jié)果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L為培養(yǎng)基壯苗效果顯著。

【關(guān)鍵詞】鐵皮石斛；組織培養(yǎng)；添加物

【中圖分類號(hào)】S567.239 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-3089（2017）17-0291-01

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材，具有益胃生津、滋陰清熱之功效。現(xiàn)代藥理表明石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)免疫力等功能。由于鐵皮石斛生長(zhǎng)環(huán)境要求苛刻。

自然條件下種子需與某些真菌共生才能萌發(fā)，很難用實(shí)生苗栽培，加上長(zhǎng)期過度開采，致使野生鐵皮石斛瀕臨滅絕[1]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室情況，結(jié)合不同激素和不同的添加物對(duì)對(duì)鐵皮石斛試管苗快速壯苗的影響，擬研究10種不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛試管苗快速壯苗的影響，試圖找出最適合鐵皮石斛試管苗快速壯苗的培養(yǎng)基，有利于實(shí)驗(yàn)室提高皮石斛快速繁殖的質(zhì)量和效率，確保鐵皮石斛資源的保持，為大規(guī)模育苗做準(zhǔn)備。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

組培苗為實(shí)驗(yàn)室鐵皮石斛蒴果，經(jīng)無菌播種萌發(fā)的70d的試管苗。種子培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L。

2.試驗(yàn)方法

（1）按照以下組別配制不同培養(yǎng)基配方。原料土豆汁經(jīng)過去皮處理，蘋果未去皮。

（2）接種與培養(yǎng)選取長(zhǎng)勢(shì)一致且由同一株鐵皮石斛的蒴果繁殖的生長(zhǎng)狀況良好的石斛接種到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基20瓶。培養(yǎng)室培養(yǎng)條件為：溫度22（±2）℃，光照10h/d，光照強(qiáng)度2000lx。培養(yǎng)20d，60d觀察結(jié)果。

二、結(jié)果與分析

1.鐵皮石斛在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況如下表。

2.不同激素比例對(duì)石斛生長(zhǎng)的影響

本文僅研究了添加NAA0.2mg/L和NAA0.5mg/L的培養(yǎng)基對(duì)比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明添加NAA0.5mg/L的情況下，20d和60d的苗整齊，葉色綠，生長(zhǎng)情況均優(yōu)于NAA0.2mg/L。

3.不同添加物培養(yǎng)基成分對(duì)石斛生長(zhǎng)的影響

添加1/2MS和MS在20d，苗的生長(zhǎng)狀況一致，均為生長(zhǎng)較快，苗整齊，葉色綠；60d苗在添加MS的培養(yǎng)基比1/2MS的培養(yǎng)基，生長(zhǎng)更快，苗更整齊，葉色更綠。苗在添加蔗糖20g/L和蔗糖30g/L的培養(yǎng)基上20d和60d的生長(zhǎng)情況無教明顯差異。苗在添加土豆汁100g/L和蘋果汁100g/L的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況均較好，且添加土豆汁的苗生長(zhǎng)情況更優(yōu)于添加蘋果汁的。

三、結(jié)論與討論

結(jié)果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L為培養(yǎng)基壯苗效果顯著。初步得到了一套鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗的技術(shù)方法，利用此方法生產(chǎn)出的組培苗速度快、質(zhì)量好。

從文獻(xiàn)報(bào)道可知，在生根培養(yǎng)基中通常加入土豆汁[2]可促進(jìn)生根壯。在培養(yǎng)基中加入一些天然有機(jī)物，如椰汁、蘋果汁、土豆汁等，能提供一些必要的微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素等，對(duì)鐵皮石斛原球莖的增殖和分化有促進(jìn)作用[3-4]。蔗糖濃度以3%為分化的臨界值，蔗糖2%為原球莖分化的適宜濃度[5]，但這個(gè)兩個(gè)濃度的差異對(duì)本實(shí)驗(yàn)中壯苗效果影響不明顯。本研究中的培養(yǎng)基都加入0.5g/L的活性炭，在組培過程中適當(dāng)添加活性炭，可以吸附植物代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，防止褐變，減少對(duì)植物生長(zhǎng)的影響[6]，對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。

接種過程需對(duì)無菌接種室進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌消毒操作。組培室定期需用不的消毒方法進(jìn)行滅菌消毒，防止污染菌產(chǎn)生耐藥性大量繁殖切難以消滅。采用甲醛（60～80mL）和高錳酸鉀（40～40g）溶液對(duì)無菌室進(jìn)行熏蒸，或噴灑表面消毒劑可有效降低污染。

參考文獻(xiàn)

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