徐艷　張家偉

【摘 要】為減少在植物組織培養(yǎng)中使用化學(xué)合成激素導(dǎo)致的環(huán)境污染，以鐵皮石斛為材料，研究綠豆芽研磨液與化學(xué)合成激素對(duì)鐵皮石斛組培苗誘導(dǎo)不定芽的影響。結(jié)果顯示，混合使用合成激素0.5mg/L 6BA+0.1mg/L NAA+150g/L綠豆芽研磨液培養(yǎng)基的效果最好，而單獨(dú)使用50g/L綠豆芽研磨液亦有良好效果。

【關(guān)鍵詞】激素；組織培養(yǎng)；綠豆芽液

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

綠豆芽（自制），仙斛1號(hào)組培苗（河源市裕森農(nóng)林發(fā)展有限公司提供），6-BA，NAA，瓊脂，糖，WPM；以食品攪拌機(jī)將綠豆芽攪拌成漿即為綠豆芽液。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)所用的鐵皮石斛品種為仙斛1號(hào)，選擇生長(zhǎng)情況相近的鐵皮石斛，去除頭部和尾部，保留中間部分的莖節(jié)為實(shí)驗(yàn)材料。

空白組：以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，糖15g/L，瓊脂8g/L。pH 6.8，121℃下滅菌25分鐘。

實(shí)驗(yàn)組：以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加不同量的綠豆芽研磨液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L、250g/L），糖15g/L，瓊脂8g/L。pH 6.8，121℃下滅菌25分鐘。

對(duì)照組：

（1）以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，再附加不同量的綠豆芽研磨液（50、100、150、200、250g/L），糖15g/L，瓊脂8g/L，另加化學(xué)合成激素0.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA。pH 6.8，121℃下滅菌25分鐘。

（2）以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加化學(xué)合成激素0.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA，糖15g/L，瓊脂8g/L。pH 6.8，121℃下滅菌25分鐘。

2 結(jié)果與分析

取生長(zhǎng)情況相似的鐵皮石斛組培苗莖，插入不同激素組合的WPM培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)10天，觀察其不定芽萌發(fā)情況[1-3]。

2.1 無添加激素與綠豆芽研磨液培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況

在空白組實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料在未添加綠豆芽研磨液、6-BA和 NAA的條件下，不定芽依然會(huì)萌動(dòng)生長(zhǎng)，但芽生長(zhǎng)情況不均勻，芽苗細(xì)小。

2.2 單化學(xué)激素誘導(dǎo)鐵皮石斛發(fā)芽情況

單獨(dú)使用化學(xué)激素培養(yǎng)出的組織培養(yǎng)苗生長(zhǎng)不均勻，部分芽沒有萌發(fā)，芽生長(zhǎng)不均勻，最長(zhǎng)1.9厘米，最短0.4厘米。

2.3 綠豆芽提取物誘導(dǎo)鐵皮石斛發(fā)芽情況

經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，添加50g/L，100g/L，150g/L綠豆芽研磨液的不定芽萌發(fā)數(shù)量與生長(zhǎng)情況均比空白組好。但若綠豆芽研磨液濃度高于200g/L，則不定芽芽萌發(fā)數(shù)量與生長(zhǎng)情況比空白組差。添加50g/L綠豆芽研磨液的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)3）不定芽萌發(fā)數(shù)量與生長(zhǎng)情況優(yōu)于只添加化學(xué)激素的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)2）。隨著綠豆芽研磨液添加量的增多，接種芽不生長(zhǎng)的情況越嚴(yán)重，說明綠豆芽研磨液最適宜的使用量為50g/L。

2.4 化學(xué)激素聯(lián)合綠豆芽提取物誘導(dǎo)鐵皮石斛發(fā)芽情況

經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基配添加6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、150g/L綠豆芽研磨液的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)10）芽增殖數(shù)和芽長(zhǎng)均為最好，部分苗一個(gè)芽節(jié)萌發(fā)生長(zhǎng)出五個(gè)芽?；瘜W(xué)激素聯(lián)合綠豆芽研磨液在誘導(dǎo)鐵皮石斛不定芽萌發(fā)中效果優(yōu)于單獨(dú)使用化學(xué)激素或單獨(dú)使用綠豆芽研磨液。

2.5 討論

植物學(xué)理論認(rèn)為，由于頂端生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，植物頂端幼芽含有較豐富的生長(zhǎng)激素，因此植物幼芽可作為尋找純天然植物組織培養(yǎng)激素的來源。目前食用植物的組織培養(yǎng)需要使用化學(xué)激素，可能導(dǎo)致食品安全問題，因此開發(fā)純天然植物激素替代或部分替代化學(xué)激素將非常有必要。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：添加50g/L綠豆芽研磨物的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)3）芽增殖數(shù)與芽長(zhǎng)均優(yōu)于添加化學(xué)激素的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)2），說明添加豆芽研磨液可引起不定芽較好的萌發(fā)和生長(zhǎng)，在一定程度上與添加化學(xué)激素的作用類似。而添加6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、150g/L綠豆芽研磨液的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)10）芽增殖數(shù)和芽長(zhǎng)均優(yōu)于添加50g/L綠豆芽研磨物的實(shí)驗(yàn)組（實(shí)驗(yàn)3），說明純天然植物激素聯(lián)合化學(xué)激素可引發(fā)更好的不定芽萌發(fā)和生長(zhǎng)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]秦廷豪.鐵皮石斛的組織培養(yǎng)與快速繁殖.熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)[J].2008，28（1）：25-29.

[2]張紅梅，劉建東，王巖花，張利平.鐵皮石斛莖段快繁技術(shù)研究.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）[J].2010，30（6）：495-499.

[3]李霖明，劉霖貴，鐘云芳.種有機(jī)添加物對(duì)鐵皮石斛的組培苗壯苗階段的生長(zhǎng)影響.熱帶林業(yè)[J].201139（2）：38-40.

[4]李媛，朱丹紅，潘會(huì)堂，張啟翔.3種石斛蘭以莖段為外植體的離體快繁技術(shù).東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)[J].2013，8（41）：77-81.