王偉 葛亮 居朝霞
抗-HCV-IgG 抗體及血清HCV RNA在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價值*
王偉 葛亮 居朝霞
目的 探討抗-HCV-IgG抗體與血清HCV RNA應(yīng)用于丙型肝炎診斷中的臨床價值。方法 選擇2014年10月~2016年10月檢驗科收集的114例丙型肝炎待查者的血清標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對抗-HCV-IgG抗體進行檢測,同時采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對HCV RNA載量進行檢測。統(tǒng)計所有標(biāo)本抗-HCV-IgG抗體、HCV RNA檢測結(jié)果。結(jié)果 采用ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體陽性率為25.44%(29/114);采用熒光定量PCR檢測HCV RNA陽性率為27.19%(31/114)。31例HCV RNA陽性標(biāo)本中抗-HCV-IgG陽性標(biāo)本有26例,符合率為83.87%(26/31)。ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體陽性率與熒光定量PCR檢測HCV RNA陽性率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。伴隨HCV RNA病毒載量的不斷增多,抗-HCV-IgG陽性抗體檢出率明顯提高;不同HCV RNA病毒載量的相鄰區(qū)間的抗-HCV-IgG陽性抗體檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體和熒光定量PCR檢測HCV RNA應(yīng)用于丙型肝炎診斷均具有一定的臨床價值,血清HCV RNA病毒載量是判斷HCV感染的重要依據(jù),能夠有效反映病毒活動性及復(fù)制程度,然而單一的抗-HCV-IgG抗體、HCV RNA檢測尚存在局限性,易出現(xiàn)漏診,兩者聯(lián)合檢測可顯著提高丙型肝炎檢出率,做到早診斷、早治療,提高臨床療效。
抗-HCV-IgG抗體 HCV RNA 丙型肝炎 診斷 臨床價值
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引發(fā)的病毒性肝炎疾病,會導(dǎo)致機體肝臟慢性炎癥壞死及纖維化,最終造成肝硬化或癌變,對患者生命健康造成嚴(yán)重威脅,所以需盡早診斷和治療[1]。近年來隨著檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展,丙型肝炎檢查方法已逐漸完善[2]。目前對丙型肝炎主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),前者用于檢測血清中HCV核心抗體,后者用于監(jiān)測HCV RNA[3,4]。為探究抗-HCV-IgG 抗體以及血清HCV RNA在診斷丙型肝炎中的價值,本研究對收治的丙型肝炎患者的血清標(biāo)本,采用ELISA法對抗-HCV-IgG 抗體進行檢測,并采用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測HCV RNA載量,為臨床丙型肝炎診斷提供依據(jù)。
1 一般資料 選擇2014年10月~2016年10月檢驗科收集的114例丙型肝炎待查者的血清標(biāo)本,其中男60例,女54例;年齡25~75歲,平均年齡(54.27±5.44)歲。所有患者均通過2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會聯(lián)合肝病學(xué)修訂的《病毒性肝炎防治方案》標(biāo)準(zhǔn)確診為丙型肝炎。排除標(biāo)準(zhǔn):其他類型的病毒性肝炎者;存在可能造成肝功能異常的疾病者。
2 方法
2.1 標(biāo)本采集:取患者清晨空腹靜脈血3 ml,室溫環(huán)境下靜置20 min后待其自然凝固,然后1500 r/min離心10 min,取上層血清,轉(zhuǎn)移至離心管,用于檢測HCV RNA,剩余血清用于檢測抗-HCVIgG,均置于-20℃冰箱內(nèi)待測。
2.2 檢測方法:采用ELISA法檢測血清中HCV抗體,在微孔板條預(yù)包被基因表達的HCV抗原,與血清中抗-HCV-IgG抗體反應(yīng),然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgG的酶標(biāo)記抗體與其結(jié)合,最后用3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺作用顯色。采用實時熒光定量PCR檢測HCV RNA,試劑盒最低檢出量為250 IU/mL,線性范圍在(1.0×103~1.0×107)IU/mL,均嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書操作。
3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料采用χ2檢驗,P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
1 抗-HCV-IgG抗體與HCV RNA檢測結(jié)果對比 采用ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體陽性率為25.44%(29/114);采用熒光定量PCR檢測HCV RNA陽性率為27.19%(31/114)。31例HCV RNA陽性標(biāo)本中抗-HCV-IgG陽性的標(biāo)本有26例,符合率為83.87%(26/31)。ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體陽性率與熒光定量PCR檢測HCV RNA陽性率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
表1 抗-HCV-IgG抗體與HCV RNA檢測結(jié)果比較(n)
2 各個區(qū)間HCV RNA病毒載量與抗-HCV-IgG檢出結(jié)果對比見表2。伴隨HCV RNA病毒載量的不斷增多,抗-HCV-IgG陽性抗體檢出率明顯提高;不同HCV RNA病毒載量的相鄰區(qū)間的抗-HCVIgG陽性抗體檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
表2 各個區(qū)間HCV RNA病毒載量與抗-HCV-IgG檢出結(jié)果對比
丙型肝炎病毒主要經(jīng)血液傳播,患者在感染初期通常無明顯癥狀,部分患者甚至無癥狀產(chǎn)生,而病情進一步發(fā)展后會逐漸引發(fā)肝硬化甚至肝癌,造成患者死亡,因此早期精確診斷對于疾病治療具有重要意義[5]。目前臨床對丙型肝炎的診斷,除患者所表現(xiàn)出的癥狀、體征及肝功能檢查外,血清病毒學(xué)檢測是確診丙型肝炎的重要依據(jù)[6]。絕大部分丙型肝炎患者的體內(nèi)存在抗-HCVIgG,所以抗-HCV-IgG陽性能夠作為HCV感染的標(biāo)志,而HCV RNA陽性能夠作為HCV感染直接判斷依據(jù),是反映HCV復(fù)制和傳染性的直接指標(biāo),且對評估治療丙型肝炎患者的療效也具有重要價值[7]。因為丙型肝炎患者體內(nèi)HCV RNA相比抗-HCV出現(xiàn)更早,所以HCV RNA能夠作為早期篩查診斷的標(biāo)準(zhǔn)[8]。目前臨床診斷HCV感染通常是檢測抗-HCV-IgG及HCV RNA,相關(guān)研究表明,若單純憑借抗-HCV-IgG進行診斷易發(fā)生較高的誤診率,會耽誤最佳治療時機[9]。
本研究對丙型肝炎患者的抗-HCV-IgG及HCV RNA陽性率進行檢測,結(jié)果顯示,采用ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體陽性率與采用熒光定量PCR檢測HCV RNA陽性率分別為25.44%和27.19%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。HCV RNA陽性標(biāo)本中抗-HCV-IgG陽性的標(biāo)本有26例,符合率為83.87%。且伴隨HCV RNA病毒載量的不斷增多,抗-HCV-IgG陽性抗體檢出率明顯提高;不同HCV RNA病毒載量的相鄰區(qū)間的抗-HCV-IgG陽性抗體檢出率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明抗-HCV-IgG抗體檢測在HCV RNA濃度較高的標(biāo)本中更易被檢測出。本研究中出現(xiàn)3例抗-HCVIgG陽性且HCV RNA陰性患者,分析其原因可能有以下幾點:①此類患者過往存在HCV感染史,但在檢測時體內(nèi)并無HCV,機體處于恢復(fù)期,所以HCV RNA檢測結(jié)果為陰性;但抗-HCV-IgG抗體卻一直存在于患者體內(nèi)[10]。②在檢測時患者正處于丙型肝炎晚期,體內(nèi)HCV RNA水平較低,難以被檢測出,機體內(nèi)病毒水平的降低與肝細胞被顯著消耗及纖維化相關(guān)[11]。③實驗操作誤差所致。因此抗-HCV-IgG陽性且HCV RNA陰性結(jié)果并不具有準(zhǔn)確性,需要進一步隨訪。此外,本研究中有5例抗-HCV-IgG陰性且HCV RNA陽性患者。其原因可能為丙型肝炎患者自身機體免疫力下降,或由于病毒復(fù)制不活躍,從而抗體產(chǎn)生量較少;也可能是患者正處于HCV感染的窗口期,因為機體在感染后通常在6~12周后才會形成抗-HCV抗體。所以當(dāng)抗-HCV-IgG為陰性時并不能表示未感染[12,13]。采用FQ-PCR檢測HCV RNA載量的靈敏度及特異度較高,且發(fā)生污染的概率較低,所以用于臨床診斷具有較大意義。但FQPCR檢測陰性無法完全排除患者感染HCV,所以臨床應(yīng)結(jié)合抗-HCV-IgG檢測更具有準(zhǔn)確性[14,15]。
ELISA檢測抗-HCV-IgG抗體和熒光定量PCR檢測HCV RNA應(yīng)用于丙型肝炎診斷均具有一定的臨床價值,血清HCV RNA病毒載量是判斷HCV感染的重要依據(jù),能夠有效反映病毒活動性及復(fù)制程度,然而單一的抗-HCV-IgG抗體、HCV RNA檢測尚存在局限性,易出現(xiàn)漏診現(xiàn)象,兩者聯(lián)合檢測可顯著提高丙型肝炎檢出率,做到早診斷、早治療,為提高臨床療效提供價值。
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Anti-HCV-RNA Antibody and Serum HCV-RNA in the Diagnosis of Hepatitis C
WANG Wei,GE Liang,JU Zhaoxia. Department of Clinical Laboratory, Jiangsu Provincial Lenter for Disease Control and Prevention, nanjing Jiangsu,210028
Objective To investigate the clinical value of anti-HCV-IgG antibody and serum HCV-RNA in the diagnosis of hepatitis C. Methods The serum samples of 114 patients with hepatitis C were collected from October 2014 to October 2016,the anti-HCV-RNA antibody was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),and the HCV-RNA load was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR).Statistics of all specimens of anti-HCV-RNA antibody,HCV-RNA data. Results The positive rate of anti-HCV-IgG was 25.44% (29/114)by ELISA.The positive rate of HCV-RNA was 27.19% (31/114)by fluorescence quantitative PCR. anti-HCV-IgG positive specimens of 26 cases were detected from 31 cases of HCV-RNA positive specimens,the coincidence rate of 83.87% (26/31).There was no significant difference in detection positive rate between anti-HCV-IgG antibody by ELISA and HCV-RNA by fluorescence quantitative PCR (P> 0.05). With the increase of HCV-RNA viral load,the detection rate of anti-HCVIgG positive antibody was significantly increased. There was no significant difference in the detection rate of anti-HCV-IgG antibody positive in the adjacent region of different HCV-RNA viral load (P> 0.05).Conclusion ELISA to detect anti-HCV-RNA antibody and fluorescence quantitative PCR detection of HCV-RNA in the diagnosis of hepatitis C have a certain clinical value,serum HCV-RNA viral load is an important basis for judging the infection of hepatitis C virus,which can But a single anti-HCV-RNA antibody,HCV-RNA detection is still limited,prone to misdiagnosis phenomenon,the combination of the two can significantly improve the detection rate of hepatitis C virus infection,Do early diagnosis,early treatment,to provide value for improving clinical efficacy.
Anti-HCV-IgG antibody HCV-RNA Hepatitis C Diagnosis Clinical value
R512.6+3 R446.11
A
1671-2587(2017)06-0602-04
10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.021
*本課題受無錫市醫(yī)院管理中心科研項目(No.YGZXH14010)資助
210028 江蘇省疾病預(yù)防控制中心檢驗科(王偉);江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科(葛亮);江蘇省無錫市第五人民醫(yī)院傳染科(居朝霞)
王偉(1986–),女,江蘇南京人,主管技師,學(xué)士,主要從事免疫學(xué)工作,(E-mail)wer09w@163.com。