許為民 徐靜 萬(wàn)瑛

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清白細(xì)胞介素-37檢測(cè)及其臨床意義

許為民 徐靜 萬(wàn)瑛

目的 檢測(cè)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清白介素（IL）-37的表達(dá)水平，探討其在RA病程中的意義。方法選取確診RA患者59例 （RA組）及健康對(duì)照30例作為研究對(duì)象。根據(jù)臨床資料計(jì)算DAS28評(píng)分，將RA組分為活動(dòng)組和穩(wěn)定組。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清IL-37、腫瘤壞死因子（TNF）-α、IL-17、IL-10水平，采用免疫散射比濁法檢測(cè)血清C-反應(yīng)蛋白（CRP）水平，并進(jìn)行比較。結(jié)果 RA組血清IL-37水平顯著高于健康對(duì)照組（P＜0.01）；活動(dòng)組IL-37水平顯著高于穩(wěn)定組（P＜0.01）；經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，IL-37水平與IL-17、TNF-α、CRP及DAS28呈正相關(guān)，與IL-10的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 IL-37與RA的病程進(jìn)展有關(guān)，檢測(cè)RA患者血清IL-37水平對(duì)觀察病情變化具有重要意義，IL-37可成為RA診斷和治療的新依據(jù)和靶點(diǎn)。

白介素-37 白介素-17 腫瘤壞死因子-α 白細(xì)胞介素-10 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA） 是一種病因不明的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為周?chē)鷮?duì)稱(chēng)性的多關(guān)節(jié)腫脹破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。雖然RA的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，但是大量研究表明活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子，參與了RA發(fā)生發(fā)展，免疫調(diào)節(jié)功能障礙是導(dǎo)致發(fā)病的主要機(jī)制[1-3]。最近有研究發(fā)現(xiàn)IL-37能夠抑制致炎因子及趨化因子，可能在自身免疫病中起到抑制炎性反應(yīng)、保護(hù)機(jī)體的作用[4]，但是國(guó)內(nèi)的報(bào)道較少。本文通過(guò)檢測(cè)RA患者血清白介素（IL）-37、腫瘤壞死因子（TNF）-α、IL-10、IL-17的濃度水平，探討IL-37在RA發(fā)生發(fā)展中的意義，旨在為臨床診斷和治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料

1.1 RA患者組：收集2015年3月～2016年1月江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕科門(mén)診及住院的RA患者59例，其中男性12例，女性47例；年齡36～81（59.86±11.50）歲。所有患者的診斷均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)（ACR）和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR） 2010年修訂的RA分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)（ACR／EULAR2010標(biāo)準(zhǔn)）。

1.2 健康對(duì)照組：同期選擇與RA患者性別及年齡相匹配的江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院健康體檢人員30例，排除類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其他自身免疫性疾病、感染、腫瘤等。上述2組病例的年齡、性別分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05） 。

2 儀器與試劑

2.1 主要試劑：IL-37、TNF-α、IL-10、IL-17的ELISA試劑盒來(lái)源于美國(guó)RB公司；CRP檢測(cè)試劑盒來(lái)源于美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司。

2.2 主要儀器：美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司的IMMAGE 800特種蛋白分析儀；美國(guó)Bio-Rad公司的洗板機(jī)；美國(guó)Bio-Rad公司的酶標(biāo)儀。

3 方法 所有病例均空腹采集靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min，收集血清標(biāo)本，–80℃保存。采用ELISA法檢測(cè)血清IL-37、TNF-α、IL-10、IL-17水平，采用免疫比濁法檢測(cè)血清CRP水平。實(shí)驗(yàn)過(guò)程均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用GraphPad Prism 5.0軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用 LSD-t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組間IL-37血清水平的比較 RA組IL-37（pg/ml）水平（98.41±11.09）明顯高于健康對(duì)照組（9.11±0.84）（t=6.151，P＜0.0 1），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；顒?dòng)組IL-37水平（168.90±15.66）顯著高于穩(wěn)定組（49.08±6.21）（t=7.973，P＜0.01）及健康對(duì)照組（t=12.210，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此外穩(wěn)定組IL-37水平也高于健康對(duì)照組（t=6.376，P＜0.01）。見(jiàn)圖1。2 RA患者IL-37與臨床指標(biāo)及其他細(xì)胞因子的相關(guān)性分析 將IL-37與CRP、DAS28、TNF-α、IL-17、IL-10經(jīng)Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示IL-37與CRP、DAS28、TNF-α、IL-17均呈正相關(guān)，而與IL-10的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1）。

圖1 各組間IL-37血清水平的比較

表1 RA患者IL-37與臨床指標(biāo)及其他細(xì)胞因子的相關(guān)性分析

討 論

白細(xì)胞介素-37是新近發(fā)現(xiàn)的抑炎性細(xì)胞因子，屬于IL-1家族的新成員。外周血單個(gè)核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞以及肝臟、子宮及胸腺等均能夠誘導(dǎo)分泌IL-37。研究表明IL-37與多種炎性疾病相關(guān)，如結(jié)腸炎、腫瘤、肥胖癥及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等[5-8]。IL-37的作用機(jī)制尚不明確，可能是通過(guò)抑制炎性因子信號(hào)傳導(dǎo)通路中的STATs1-4磷酸化，或者與Smad3形成復(fù)合物拮抗STAT1和STAT3，發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)。

免疫調(diào)節(jié)異常是RA發(fā)病的根本原因，其中促炎因子與抑炎因子的失衡在疾病發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。Nold等研究發(fā)現(xiàn)RA患者病變的滑膜組織中含有大量IL-37[4]，Ye等發(fā)現(xiàn)IL-37能抑制系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中炎性因子的分泌，且IL-37水平與病情密切相關(guān)[7]，說(shuō)明IL-37與自身免疫性疾病存在某種潛在關(guān)聯(lián)，但國(guó)內(nèi)對(duì)IL-37與RA關(guān)系的報(bào)道較少。

從本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)看，RA患者血清IL-37顯著增高，尤其是活動(dòng)組更為明顯，雖然穩(wěn)定組IL-37水平較活動(dòng)組降低，但仍然高于健康對(duì)照，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，IL-37與DAS28及CRP等RA活動(dòng)性指標(biāo)呈正相關(guān)，與Ting等的報(bào)道一致[9]。提示，IL-37水平與疾病活動(dòng)度有關(guān)。根據(jù)已有研究報(bào)道，IL-37增加與炎性因子有著密切關(guān)聯(lián)。Imaeda等發(fā)現(xiàn)炎癥性腸病患者中TNF-α是誘導(dǎo)IL-37分泌的主要炎癥因子[10]；Bulau等將IL-37重組質(zhì)粒DNA注射到肝炎小鼠的尾靜脈后發(fā)現(xiàn)，血清中炎性因子IL-1α、IL-6等明顯減少[11]；經(jīng)重組IL-37蛋白治療的肝損傷小鼠，其肝臟損傷程度減輕，血清TNF-α及肝活性氧自由基水平也明顯降低[12]，Nold等運(yùn)用siRNA減少I(mǎi)L-37分泌，發(fā)現(xiàn)炎性因子IL-6、IL-1α、IL-1β及G-SCF合成增加[4]。于是我們將IL-37與TNF-α及IL-17作相關(guān)性分析，結(jié)果顯示IL-37與TNF-α、IL-17均呈正相關(guān)，說(shuō)明IL-37增高可能是源于促炎因子的大量分泌，是一種代償性的增加。在RA發(fā)展過(guò)程中，IL-37通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，試圖控制過(guò)度的炎性反應(yīng)。然而，IL-37水平升高往往不能完全代償促炎性細(xì)胞因子所導(dǎo)致的炎癥效應(yīng)，所以通過(guò)增加患者IL-37水平，可能成為治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的新方法。

IL-10也是RA中一種重要的抑炎性細(xì)胞因子，能夠抑制自然殺傷細(xì)胞和Th17細(xì)胞的活性，干擾促炎因子分泌，同時(shí)可以促進(jìn)Treg細(xì)胞及B細(xì)胞的分化增殖，抑制關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)展。對(duì)兩種抑炎因子進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者之間并無(wú)相關(guān)性。Zeng等通過(guò)對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者的研究，發(fā)現(xiàn)增加或減少I(mǎi)L-37的表達(dá)，并不影響患者血清IL-10水平[13]；Liang等通過(guò)對(duì)紅斑狼瘡患者的研究也發(fā)現(xiàn)IL-37水平的變化與IL-10無(wú)關(guān)[7]；McNamee等在研究小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎時(shí)發(fā)現(xiàn)，用IL-10受體的抗體阻斷IL-10的免疫抑制作用，并不影響IL-37介導(dǎo)的免疫效應(yīng)[14]。提示IL-37和IL-10雖同為抑炎因子，但各自有著不同的信號(hào)調(diào)節(jié)通路，并非協(xié)同一致發(fā)揮免疫抑制作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RA患者血清IL-37水平顯著升高，與病情變化密切相關(guān)，且IL-37的分泌和調(diào)節(jié)機(jī)制與多種致炎因子有關(guān)。IL-37有望成為新的診斷依據(jù)和治療靶點(diǎn)，同時(shí)也為闡明RA的發(fā)病機(jī)制提供新的有力證據(jù)。

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Clinical Significance of Serum IL-37 Detection in Patients with Rheumatoid Arthritis

XU Wei-min，XU Jing，WAN Ying. The Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu212001

Objective To detect the serum level of IL-37 in patients with rheumatoid arthritis （RA） to uncover the correlation of IL-37 with rheumatoid arthritis. Methods Fifty-nine patients diagnosed as rheumatoid arthritis were enrolled in the study. Disease activity was evaluated by calculating the 28-joint Disease Activity （DAS28） Score based on the clinical information． RA patients were divided into active and inactive groups according to the DAS28 score．The serum levels of IL-37，TNF-α，IL-17，IL-10 were measured by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） and C-reaction protein （CRP） by nephelometry. Results The serum levels of IL-37 was higher in RA group compared with the other two groups （P＜0.01）. In addition，IL-37 levels in the active group were elevated markedly compared with those in the inactive group. More importantly，IL-37 showed a significantly positive correlation with DAS28，CRP，TNF-α and IL-17 concentrations in RA patients，but not with IL-10 by Spearman's test. Conclusion These findings show that IL-37 indicates the disease activity of RA and might be a valuable biomarker for auxiliary diagnosis of RA.

IL-37 IL-17 TNF-α IL-10 RA

R446.62 R593.22

A

1671-2587（2017）06-0596-04

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.019

212001 鎮(zhèn)江，江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科

許為民（1981–），女，江蘇鎮(zhèn)江人，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事免疫學(xué)檢驗(yàn)工作，（E-mail）minghan901@163.com。

2017-03-30）（本文編輯：潘?。?/p>