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        河北地區(qū)漢族人群KIR基因多態(tài)性研究

        2017-12-14 08:31:17趙佳蘇蔓何路軍戚海李茵胡光磊王遠(yuǎn)花錢明明李醒張蓓王振雷
        臨床輸血與檢驗(yàn) 2017年6期

        趙佳 蘇蔓 何路軍 戚海 李茵 胡光磊 王遠(yuǎn)花 錢明明 李醒 張蓓 王振雷

        河北地區(qū)漢族人群KIR基因多態(tài)性研究

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        目的 調(diào)查河北地區(qū)漢族人群殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)的基因頻率分布情況。方法 收集河北地區(qū)無血緣關(guān)系漢族人群血液樣本288份,采用PCR-SSP法檢測KIR基因型,統(tǒng)計(jì)基因頻率。結(jié)果 河北地區(qū)漢族人群中KIR框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1的基因頻率均為100.00%,2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的頻率較高,均>92.00%,而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的頻率則較低;在河北漢族人群中共發(fā)現(xiàn)51種組合型,KIR組合型2DL4+3DP1+3 DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4所占比例最大,約為43.75%。結(jié)論 河北漢族人群中KIR基因頻率與其他亞洲人群相似,不同于其他民族。KIR組合型2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4所占比例最大。

        殺傷細(xì)胞免疫球蛋白受體 基因頻率 基因多態(tài)性

        殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)是自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK細(xì)胞)和某些T細(xì)胞表面表達(dá)的一組蛋白受體,可通過與人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-I類分子特異性結(jié)合,調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性[1-4]。KIR及其HLA配體均具有豐富的多態(tài)性,在異基因造血干細(xì)胞移植中,當(dāng)供受者KIR和HLA分子不匹配,供者的NK細(xì)胞被激活,從而開啟對靶細(xì)胞的殺傷作用,發(fā)生移植物抗宿主病(graft-versushost disease,GVHD),不利于移植預(yù)后[5]。國外

        研究表明,移植后無排斥反應(yīng)的個(gè)體KIR2DL2、KIR2DS2頻率明顯增高,而移植后發(fā)生急性排斥反應(yīng)的個(gè)體KIR2DL1的頻率明顯降低[6]。目前,國內(nèi)有關(guān)KIR基因的研究還較少,現(xiàn)將河北骨髓庫漢族人群KIR基因頻率的分布情況報(bào)告如下。

        材料與方法

        1 標(biāo)本來源 288例河北籍漢族無血緣關(guān)系志愿者,在征得其知情同意后采集EDTA抗凝血5 ml。2 DNA提取 采用TIANGEN離心柱型血液基因組DNA提取試劑盒(批號(hào)N2801)提取DNA,DNA純度OD260/OD280比值為1.7~1.9,PCR擴(kuò)增前調(diào)整濃度至(30~70) ng/μl。

        3 KIR基因分型 參照文獻(xiàn)[7]合成KIR引物序列,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)–序列特異性引物擴(kuò)增(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)檢測KIR基因。PCR反應(yīng)體系為DNA 1.6 μl,10×Taq Buffer 2 μl,MgCl21.6 μl,dNTP 1.6 μl,DRA-F 0.3 μl,DRA-R 0.3 μl,相應(yīng)正向、反向引物各1 μl,Taq聚合酶1 μl,滅菌注射用水9.6 μl。

        4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 KIR基因頻率采用基因直接計(jì)數(shù)法計(jì)算,與國內(nèi)外其他地區(qū)人群KIR基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        1 河北漢族人群KIR基因分布 288例河北地區(qū)漢族人群標(biāo)本中已知的16個(gè)KIR 基因型的分布見表1。KIR框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1的基因頻率均為100.00%,2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的頻率較高,均>92.00%,而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的頻率則較低。

        2 河北漢族人群KIR基因分布與其他地區(qū)、其他種族人群的比較結(jié)果見表2。河北地區(qū)漢族人群與其他亞洲人群的KIR基因頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而與其他民族的KIR基因頻率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        3 河北漢族人群KIR基因組合型分布 河北地區(qū)漢族人群的KIR基因組合形式及所占比例見表3。51種組合型中,KIR2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL 1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4組合形式的人數(shù)最多(占43.75%)。

        表1 河北地區(qū)漢族造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者KIR基因分布(n=288)

        表2 河北地區(qū)漢族人群與其他人群KIR基因頻率比較

        表3 河北漢族人群KIR基因組合型分布情況(n=288)

        討 論

        正常情況下,表達(dá)于NK細(xì)胞和某些T細(xì)胞表面的KIR可通過與HLA-I類分子特異性結(jié)合,傳導(dǎo)抑制性信號(hào),從而阻止對自身細(xì)胞的殺傷作用。但在病理情況下,如腫瘤、感染、移植后等,靶細(xì)胞表面的HLA表達(dá)異?;虿槐磉_(dá),導(dǎo)致KIR配體缺失,NK細(xì)胞無法識(shí)別自身,同時(shí)對自身細(xì)胞的抑制作用減弱,導(dǎo)致NK細(xì)胞激活并殺傷靶細(xì)胞[8]。已證實(shí),KIR分子與靶細(xì)胞的HLA-I類分子特異性識(shí)別后發(fā)揮作用,參與移植物抗宿主病的發(fā)生且影響移植物抗白血病(graft-versusleukemia,GVL)的作用,從而造成器官移植效果的差異[5]。葉苑等[9]利用小鼠模型對移植后GVHD的發(fā)生進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)KIR/HLA在人體固有免疫和獲得性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[10]。

        KIR的多態(tài)性主要反映在群體中不同個(gè)體等位基因的擁有狀態(tài)不同,且不同人群、種族、地區(qū)的遺傳背景迥異,因此個(gè)體免疫應(yīng)答的能力及對疾病的易感度也出現(xiàn)差別。本研究分析288例河北地區(qū)漢族人群KIR基因分布,發(fā)現(xiàn)框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1幾乎存在于所有個(gè)體中,2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的頻率較高,均>92.00%,而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的頻率則較低。河北漢族人群KIR基因分布在亞洲人群中十分相似,與韓國人、日本人的KIR基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但各民族之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,如與新疆維吾爾族人、南非圣族人的KIR基因分布比較有明顯差異。

        目前國內(nèi)有關(guān)KIR基因研究的報(bào)道較少,對河北漢族人群KIR基因多態(tài)性的研究有助于解決移植后出現(xiàn)排斥反應(yīng)的難題,可以根據(jù)基因頻率分布預(yù)測不同地區(qū)、種族間移植免疫的發(fā)生概率;同時(shí)對于豐富人類KIR基因的結(jié)構(gòu)和功能的多樣性,了解不同地區(qū)、不同種族間KIR不同種類和數(shù)量的變化,以及弄清河北漢族的歷史定居和遷徙也具有一定的意義。

        1 顏衛(wèi)華.NK細(xì)胞受體研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)免疫學(xué)分冊,2002,25(4):191-194.

        2 Moretta A,Bottino C,Mingari M C,et al.What is a natural killer cell [J].Nat Immunol,2002,3(1):6-8.

        3 Lanier L L.NK cell receptors [J].Annual Rev Immunol,1998,(16):359-393.

        4 Williams A P,Bateman A R,Khakoo S I.Hanging in the balance KIR and their role in disease [J].Mol Interv,2005,5(4):226-240.

        5 Khakoo S I,Carrington M.KIR and disease:a model system or systerm of models [J].Immunol Rev,2006,214(1):186-201.

        6 Kunert K,Seiler M,Mashreghi M F.et al.KIR/HLA ligand in cornpatibility in kidney transplantation[J].Transplantation,2007,84 (11):1527-1533.

        7 Martin M P,Carrington M. KIR locus polymorphisms:genotyping and disease association analysis [J].Methods Mol Biol,2008,415:49-64.

        8 Carrington M,Martin M P.The impact of variation at the KIR gene cluster on human disease [J].Curr Top Microbiol Immunol,2006,298:225-257.

        9 葉苑,李志強(qiáng).移植物抗宿主病小鼠模型研究進(jìn)展[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2016,18(2):197-200.

        10 Kulkarni S,Martin M P,Carrington M.The Yin and Yang of HLA and KIR in human disease [J].Semin Immunol,2008,20(6):343-352.

        11 蘇品璨,楊通漢,鄒海,等.云南漢族人群KIR基因多態(tài)性研究[J].中國輸血雜志,2008,21(4):268-272.

        12 Middleton D,Meenagh A,Moscoso J,et al.Killer immun obulinreceptor gene and allele frequencies in Caucasoid,oriental andblack populations from diferent continents.Tissue Anti gens, 2008,71(2):105-113.

        Analysis Polymorphisms of KIR Ligands in Hebei Han Population

        ZHAO Jia,SU Man,HE Lu-jun,et al. Hebei Blood Center,Shijiazhuang,Hebei050071

        Objective To analyze the gene frequency of killer cell immunoglobulin-like receptor (KIR) in Hebei Han population.Methods The blood samples of 288 unrelated Hebei Han individuals were genotyped by PCRSSP method and gene frequency was analyzed. Results Among the Hebei Han population,framework gene KIR 2DL4,3DL2,3DL3 and 3DP1 was found in all samples,2DL1,2DL3,3DL1,2DS4,2DP1 presented very high frequencies and genes 2DL2,2DS2,2DS3,2DS5 presented low frequencies.A total of 51 KIR genotypes were identified,in which the genotype 2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4 were predominant,with frequencies of 43.75%.Conclusion The gene frequencies of KIR in Hebei Han population were similar to other Asian countries but significant differences with other national minority. The genotype 2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4 was predominant.

        KIR Gene frequencies Gene polymorphism

        R457.7 R392.4

        A

        1671-2587(2017)06-0566-04

        10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.011

        050071 石家莊,河北省血液中心

        趙佳(1987–),女,河北石家莊人,主管技師,碩士,主要從事免疫學(xué)檢驗(yàn)及HLA分型工作,(Tel)0311-87826911(E-mail)1262159189@qq.com。

        王振雷,男,副主任技師,學(xué)士,(Tel)0311-87820544(E-mail)lei123456789101112@sina.com。

        2017-02-20)

        (本文編輯:王虹)

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