□ 葉玉華 貴州省黔西南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門(mén)氏菌定性檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果與分析

□ 葉玉華 貴州省黔西南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

為了提升實(shí)驗(yàn)室食品中金黃色葡萄球菌與沙門(mén)氏菌的檢測(cè)能力，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室競(jìng)爭(zhēng)能力，本實(shí)驗(yàn)室參加了貴州省食品藥品檢驗(yàn)所組織的乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門(mén)氏菌定性檢測(cè)能力驗(yàn)證。根據(jù)能力驗(yàn)證作業(yè)指導(dǎo)書(shū)、《GB 4789.10-2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》與《GB 4789.4-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌菌檢驗(yàn)》的要求，分別對(duì)QC-001B-4金黃色葡萄球菌待測(cè)樣品和QC-001A-5沙門(mén)氏菌待測(cè)樣品進(jìn)行增菌、分離與鑒定。兩個(gè)待測(cè)樣品中，其中QC-001B-4檢出金黃色葡萄球菌，QC-001A-5未檢出沙門(mén)氏菌，2個(gè)樣品檢測(cè)結(jié)果均獲得滿(mǎn)意。

乳粉；金黃色葡萄球菌；沙門(mén)氏菌；能力；驗(yàn)證

金黃色葡萄球菌是人類(lèi)的一種重要病原菌，在自然界中廣泛分布，水、空氣、人和動(dòng)物的皮膚表面及排泄物中均可找到，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表［1］。沙門(mén)氏菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，為革蘭氏陰性短桿菌，極易污染水源、食品等，對(duì)人類(lèi)健康易構(gòu)成極大危害，可引起諸如傷寒、急性腸胃炎、敗血癥等［2］。因此，金黃色葡萄球菌和沙門(mén)氏菌的檢測(cè)在食品安全檢驗(yàn)中具有重要意義。在我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，已將沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌作為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，各種食品中均要求不得檢出沙門(mén)氏菌，為提高對(duì)食品中沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌的檢測(cè)能力和水平，本實(shí)驗(yàn)室參加了貴州省食品藥品檢驗(yàn)所組織的乳粉中金黃色葡萄球菌與沙門(mén)氏菌定性檢測(cè)能力驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 待測(cè)樣品

共2份待測(cè)樣品，其中編號(hào)為QC-001B-4的樣品為添加有金黃色葡萄球菌及背景菌的乳粉，編號(hào)為QC-001A-5的樣品為添加有沙門(mén)氏菌及背景菌的乳粉，兩份樣品均采用西林瓶包裝，由貴州省食品藥品檢驗(yàn)所提供。

1.2 培養(yǎng)基及試劑

緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、亞硫酸鉍瓊脂(BS)、木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、沙門(mén)氏菌生化鑒定試劑盒、10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、血瓊脂平板、Baird-Parker瓊脂平板、腦心浸出液肉湯（BHI）、凍干兔血漿，均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、乙型副傷寒沙門(mén)氏菌[CMCC(B)50 094]購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.4 儀器

恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9082，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、立式壓力蒸汽滅菌器（LDZM-80KCS，上海申安醫(yī)療器械廠）、電子天平（JM-A10002，余姚市紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）、生物顯微鏡（H6303，重慶光電儀器有限公司）、生物安全柜（BSC-IIA2，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）等。

1.5 方法

參照能力驗(yàn)證作業(yè)指導(dǎo)書(shū)、《GB 4789.10-2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》［3］與《GB 4789.4-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌菌檢驗(yàn)》［4］進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.5.1 樣品前處理

根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)提示，分別在生物安全柜中以無(wú)菌操作打開(kāi)編號(hào)為QC-001B-4的西林瓶與編號(hào)為QC-001A-5的西林瓶，然后立即加入少量稀釋液進(jìn)行溶解，待溶解后，吸出放入無(wú)菌瓶中，反復(fù)用稀釋液清洗西林瓶?jī)?nèi)壁，回收清洗液放入上述的無(wú)菌瓶中，合計(jì)用稀釋液40 mL。全過(guò)程20分鐘完成，此溶液即為待測(cè)樣品溶液。記為QC-001B-4待測(cè)樣品溶液與QC-001A-5的待測(cè)樣品溶液。

1.5.2 增菌

用無(wú)菌吸管吸取QC-001B-4待測(cè)樣品溶液25 mL，移至盛有225 mL 10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯中，振蕩均勻，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。

用無(wú)菌吸管吸取QC-001A-5待測(cè)樣品溶液25 mL，移至盛有225 mL BPW培養(yǎng)液中，振蕩均勻，36 ℃±1℃培養(yǎng)18 h。18 h培養(yǎng)完成后，將樣品混合物移取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL TTB內(nèi)，于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。同時(shí)另取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL SC內(nèi)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。

1.5.3 分離培養(yǎng)與鑒定

將QC-001B-4樣品培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板上，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)完成后，挑取可疑菌落進(jìn)行染色鏡檢和血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。

將QC-001A-5樣品培養(yǎng)物，分別劃線接種到BS平板和XLD平板上，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)完成后，挑取可疑菌落進(jìn)行下一步生化實(shí)驗(yàn)。

表1 QC-001B-4待測(cè)樣品選擇性平板菌落特征與鑒定

表2 QC-001A-5待測(cè)樣品菌落特征與生化鑒定結(jié)果

2 結(jié)果與分析

2.1 QC-001B-4待測(cè)樣品鑒定結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1，待測(cè)樣品劃線接種于Baird-Parker平板與血平板后，兩種平板上出現(xiàn)了典型的金黃色葡萄球菌可疑菌落特征，分別對(duì)其進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢與血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)，均呈陽(yáng)性，與標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC(B)26 003結(jié)果完全相同，綜合以上結(jié)果，可以斷定QC-001B-4樣品檢出金黃色葡萄球菌。

2.2 QC-001A-5待測(cè)樣品鑒定結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表2，待測(cè)樣品在BS平板與XLD平板呈現(xiàn)的菌落均為可疑菌落特征，對(duì)其進(jìn)行生化鑒定，在三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫，賴(lài)氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)為陰性，尿素酶實(shí)驗(yàn)為陰性，氫化鉀實(shí)驗(yàn)也為陰性，ONPG實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性?？膳卸≦C-001A-5樣品菌落為非沙門(mén)氏菌。

3 討論

能力驗(yàn)證是一種重要的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理手段，可提高實(shí)驗(yàn)室管理水平，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，增強(qiáng)客戶(hù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的信任度，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的生存和發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義［5,6］。本次能力驗(yàn)證樣品數(shù)量為兩個(gè)，一個(gè)為金黃色葡萄球菌的待測(cè)樣品，另一個(gè)為沙門(mén)氏菌的待測(cè)樣品，在對(duì)兩個(gè)待測(cè)樣品進(jìn)行前處理時(shí)，應(yīng)分開(kāi)單獨(dú)在生物安全柜中操作，避免樣品的混淆與交叉污染。使用標(biāo)準(zhǔn)菌株做陽(yáng)性質(zhì)控時(shí)也要注意避免對(duì)樣品的污染，應(yīng)先操作待測(cè)樣品，再操作標(biāo)準(zhǔn)菌株陽(yáng)性質(zhì)控樣。

分離與鑒定金黃色葡萄球菌時(shí)，除了使用國(guó)標(biāo)規(guī)定的Baird-Parker平板與血平板外，還可使用金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，該類(lèi)培養(yǎng)基特異性強(qiáng)且結(jié)果直觀，可避免干擾菌對(duì)結(jié)果的影響。

分離與鑒定沙門(mén)氏菌時(shí)，在使用選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)同時(shí)采用2種以上的培養(yǎng)基，建議采用沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基，沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基在分離及結(jié)果判定方面有較高的特異性。在BS與XLD培養(yǎng)基上的可疑沙門(mén)氏菌的特征形態(tài)多樣，其中BS培養(yǎng)基的選擇性最差，而在沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上，可疑沙門(mén)氏菌特征明顯，容易辨別。

［1］彭曉蘭.金黃色葡萄球菌食物中毒66例報(bào)告[J].海南醫(yī)學(xué),1998(3):187.

［2］曹際娟．腸道沙門(mén)氏菌分子檢測(cè)與分子分型[M].北京:中國(guó)質(zhì)檢出版社,2013.

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì),國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB 4789.10-2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

［4］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 4789.4-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌菌檢驗(yàn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

［5］中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).GB/T15483.1-2004.利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的能力驗(yàn)證：能力驗(yàn)證計(jì)劃的建立和運(yùn)作[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

［6］江志杰,王似錦,高春.食品中沙門(mén)氏菌檢出能力驗(yàn)證結(jié)果與分析[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2015(5):1929-1935.