王軍偉陳英俊余力丁慧珍譚明明樓招歡

1浙江省天臺縣人民醫(yī)院浙江天臺317200

2浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053

酒精性肝損傷大鼠模型血脂水平動態(tài)變化及烏藥的干預(yù)研究*

王軍偉1陳英俊1余力1丁慧珍1譚明明1樓招歡2#

1浙江省天臺縣人民醫(yī)院浙江天臺317200

2浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053

目的：觀察酒精性肝損傷大鼠模型血脂的動態(tài)改變以及烏藥的干預(yù)作用。方法：采用SD大鼠灌胃給予體積濃度50%的白酒，每日1次，灌胃容積1.2ml/100g，連續(xù)33d建立酒精性肝損傷模型，造模的同時灌胃給予烏藥不同提取物。分別于給藥第14d、第21d及末次給藥并禁食12h后，眼眶靜脈叢取血，離心制備血清，全自動生化分析儀測定大鼠血清TC、TG含量。結(jié)果：模型組TC、TG顯著升高；動態(tài)觀察顯示模型組血清TC、TG含量早中期逐漸升高，第3周達(dá)高峰，后期回落；較之模型組，烏藥組的血清TC、TG含量均顯著下降，烏藥醇提取物組、烏藥醇提取物石油醚萃取物組及烏藥醇提取物正丁醇萃取物組對TC下降較優(yōu)，而烏藥醇提取物組及烏藥醇提取物石油醚萃取物組對TG下降較優(yōu)。結(jié)論：酒精性肝損傷大鼠模型血脂動態(tài)改變規(guī)律為先升高后降低，第3周末血脂達(dá)高峰；烏藥可以抑制酒精引起的高脂血癥。

酒精性肝損傷血脂烏藥大鼠實驗研究

肝功能異常往往會并發(fā)血脂異常，而治療后隨著肝功能的恢復(fù)，血脂水平隨之下降。烏藥為傳統(tǒng)理氣中藥，有調(diào)節(jié)胃腸道、保肝、抗炎、降脂等作用。本研究在既往工作[1]的基礎(chǔ)上，觀察酒精性肝損傷大鼠模型血脂的動態(tài)改變，以及烏藥的干預(yù)作用。

1 材料

1.1 動物：健康SD大鼠，雌性，體重180～220g，88只，購自浙江省實驗動物中心，動物質(zhì)量合格證號：0016074。

1.2 藥品與試劑：烏藥，浙江紅石梁集團(tuán)天臺山烏藥生物工程有限公司提供，參考文獻(xiàn)[1]方法得各種提取物，即烏藥水提取物（WYSTW）、烏藥醇提取物（WYCTW）、烏藥醇提取物石油醚萃取物（WYCTC1）、烏藥醇提取物乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）、烏藥醇提取物正丁醇萃取物（WYCTC3）。陽性對照藥：思密達(dá)（浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司，批號：02130121）。白酒：紅星二鍋頭酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京紅星股份有限公司。與雙蒸水按一定體積比例稀釋，酒精體積分?jǐn)?shù)為50%。TC試劑盒，批號20140723；TG試劑盒，批號20140804，均購于寧波美康生物科技股份有限公司。

1.3 儀器：TBA-40FR全自動生化儀，日本東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會社。

2 方法

2.1 實驗方法：選取健康雌性SD大鼠88只，隨機(jī)分為8組，每組11只，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組（思密達(dá)0.9g/kg）、烏藥水提物（WYSTW）組、烏藥醇提物（WYCTW）組、烏藥石油醚萃取物（WYCTC1）組、烏藥乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）組、烏藥正丁醇萃取物（WYCTC3）組。所有大鼠均給予基礎(chǔ)飼料，自由采食飲水。除正常對照組（以等體積的蒸餾水灌胃）外，其余各組大鼠均灌胃給予濃度為50%（v/v）的白酒，每日1次，灌胃容積1.2ml/100g，連續(xù)33d。自造模第l天起，除正常對照組和模型對照組灌服蒸餾水外，其余各給藥組分別灌胃給予相應(yīng)的藥物，4g/kg，每日1次，灌胃容積為1ml/100g體重，連續(xù)33d。分別于給藥第14d、第21d及末次給藥并禁食12h后，眼眶靜脈叢取血，離心制備血清，全自動生化分析儀分別測定大鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法：使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料數(shù)據(jù)以±s表示，用單因素方差分析，兩組間比較方差齊性用LSD方法檢驗，方差不齊用Dunnett檢驗。

3 結(jié)果

3.1 酒精性肝損傷模型大鼠TC含量的動態(tài)變化及烏藥干預(yù)后變化：與正常對照組相比，造模14d、21d、33d的TC含量均顯著升高，尤以21d時達(dá)到最高水平，模型對照組大鼠21d、33d的TC含量與正常組相比有顯著性差異（P＜0.01）。與模型對照組相比，給藥第21d，WYSTW、WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3組大鼠血清TC含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）；給藥第33d，WYCTW、WYCTC1及WYCTC3組大鼠血清TC含量明顯降低（P＜0.05或0.01）。見表1。

表1 烏藥不同提取部位對急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TC含量的影響（±s）

表1 烏藥不同提取部位對急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TC含量的影響（±s）

注：與正常對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別TC（mmol/L）給藥33d 1.07±0.23 1.54±0.37##1.37±0.19 1.34±0.23 1.17±0.21*1.05±0.16**1.34±0.36 1.22±0.15*正常對照組模型對照組陽性對照組WYSTW組WYCTW組WYCTC1組WYCTC2組WYCTC3組給藥14d 1.43±0.28 1.52±0.23 1.50±0.43 1.66±0.18 1.56±0.37 1.55±0.43 1.58±0.31 1.55±0.27給藥21d 1.45±0.21 1.87±0.35##1.42±0.27**1.62±0.21*1.49±0.25**1.52±0.39*1.59±0.36*1.51±0.17**

3.2 酒精性肝損傷模型大鼠TG含量的動態(tài)變化及烏藥干預(yù)后變化：與正常對照組相比，造模14d、21d、33d的TG含量均顯著升高，尤以21d時達(dá)到最高水平，模型對照組大鼠14d、21d、33d的TG含量與正常組相比有顯著性差異（P＜0.05或0.01）。與模型對照組相比，給藥第14d及第21d，WYCTW、WYCTC1、WYCTC2及WYCTC3組大鼠血清TG含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）；給藥第33d，各給藥組大鼠血清TG含量均明顯降低（P＜0.05或0.01）。見表2。

表2 烏藥不同提取部位對急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TG含量的影響（±s）

表2 烏藥不同提取部位對急性酒精性肝損傷模型大鼠血清TG含量的影響（±s）

注：與正常對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

給藥33d 0.35±0.07 0.55±0.17#0.41±0.08*0.37±0.08*0.34±0.06**0.33±0.10**0.40±0.11*0.41±0.07*組別正常對照組模型對照組陽性對照組WYSTW組WYCTW組WYCTC1組WYCTC2組WYCTC3組TG（mmol/L）給藥14d 0.53±0.13 0.83±0.20##0.70±0.18 0.74±0.19 0.54±0.11**0.54±0.12**0.63±0.16**0.66±0.11**給藥21d 0.72±0.18 1.19±0.32##1.12±0.21 1.10±0.31 0.76±0.14**0.87±0.23**0.86±0.16**0.99±0.12*

4 討論

酒精性肝損傷致血脂異常及脂肪肝的機(jī)理與以下病理生理過程有關(guān)：當(dāng)酒精進(jìn)入肝細(xì)胞后，在乙醇氧化酶系統(tǒng)作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰?，進(jìn)而再次氧化轉(zhuǎn)變成乙酸，此過程使輔酶不斷轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型輔酶，兩者比例的改變抑制線粒體內(nèi)的三羧酸循環(huán)，導(dǎo)致脂肪氧化減弱，肝內(nèi)脂肪酸的合成增多，引起甘油三酯合成增多，導(dǎo)致血甘油三酯水平上升和脂肪肝的形成。膽固醇的最終代謝產(chǎn)物是膽汁酸，而膽汁酸僅在肝臟合成，在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微粒體酶的作用下，膽固醇在肝內(nèi)逐步轉(zhuǎn)化成膽汁酸，肝功能受損時，肝臟脂肪代謝出現(xiàn)紊亂，膽固醇降解成膽汁酸的過程受阻，從而導(dǎo)致血膽固醇升高[1]。

研究結(jié)果表明，酒精性肝損傷模型大鼠TC、TG顯著升高，動態(tài)觀察顯示模型組血清TC、TG含量早中期逐漸升高，第3周達(dá)高峰，后期回落，與文獻(xiàn)報道一致[2]?？紤]早中期血脂升高與肝功能受損相關(guān)，而后期回落可能與大鼠老化及肝功能受損后進(jìn)食量減少有關(guān)，有待進(jìn)一步論證。較之模型組，烏藥組的血清TC、TG含量均有顯著下降。比較烏藥不同提取物對急性酒精性肝損傷模型大鼠血脂生化指標(biāo)的影響，可得出烏藥醇提取物調(diào)節(jié)血脂作用優(yōu)于水提取物（藥效作用時間久，效果穩(wěn)定）；醇提取物三個萃取部位作用比較后，烏藥醇提石油醚萃取物效果最優(yōu)，藥效作用依次為：烏藥醇提石油醚萃取物＞醇提正丁醇萃取物＞醇提乙酸乙酯萃取物。

[1] 王美娟，王軍偉，吳人照，等.烏藥不同提取物對急性酒精性肝損傷模型大鼠血脂的影響[J].浙江中醫(yī)雜志，2014，49(6)：457-458.

[2] 趙敏，楊杏芬，黃俊明，等.小鼠酒精性肝損傷模型的動態(tài)研究[J].中國公共衛(wèi)生，2005，21(9)：1101-1102.

國家自然科學(xué)基金項目基于“腸-肝軸”的烏藥抗慢性酒精性肝損傷的作用機(jī)制研究，編號：81503328；浙江省科技計劃項目烏藥抗酒精性肝損傷有效部位研究，編號：2016C33184；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目烏藥不同提取物對慢性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的干預(yù)作用，編號：2015DTA021；臺州市科技計劃項目烏藥對急性酒精性肝損傷模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的干預(yù)作用，編號：2014A33339

#通訊作者：樓招歡，E-mail：lou_jasmine@163.com

2017-04-12