龔來(lái)覲 李鶴

江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院江西樟樹(shù)331200

左金丸抗?jié)兓钚圆课缓Y選與作用機(jī)制研究

龔來(lái)覲 李鶴

江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院江西樟樹(shù)331200

目的：溶劑提取法確定左金丸抗?jié)兓钚圆课唬⒊醪教接懫渥饔脵C(jī)制。方法：采取無(wú)水乙醇灌胃法造大鼠胃潰瘍模型，以胃潰瘍指數(shù)（UI）為指標(biāo)篩選活性部位，并測(cè)定胃液pH值、血清中前列腺素E2（PGE2）含量。結(jié)果：不同溶劑提取的左金丸活性部位組均能不同程度地抑制大鼠胃潰瘍指數(shù)，其中以鹽酸-乙醇實(shí)驗(yàn)組作用最強(qiáng)。結(jié)論：鹽酸-乙醇提取左金丸活性部位具有顯著的抗?jié)冏饔?；作用機(jī)制為左金丸使大鼠胃液pH值和血清中PGE2含量升高，達(dá)到降低胃黏膜攻擊因素和增強(qiáng)胃黏膜防御功能的作用，從而起到保護(hù)大鼠胃黏膜的作用。

左金丸活性部位潰瘍作用機(jī)制大鼠

左金丸出自《丹溪心法》，為朱丹溪名方之一。該方由黃連、吳茱萸按6：1的劑量組成，具有清瀉肝火、降逆止嘔之效，常用于胃炎、食管炎、胃潰瘍等屬肝火犯胃者[1]?，F(xiàn)代藥理研究其有多方面作用，而抗?jié)優(yōu)樽钪饕乃幚碜饔弥籟2]。目前，左金丸的提取方法主要有水提、醇提、鹽酸-甲醇提取、半仿生提取等[3-6]。而不同提取方法的左金丸活性部位抗胃潰瘍的藥效研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文在前人基礎(chǔ)上，通過(guò)抗大鼠胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究，綜合比較不同溶劑提取的左金丸優(yōu)選活性部位，并對(duì)其活性部位抗?jié)儥C(jī)制作初步探討，為左金丸的制備及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物：左金丸（溫州海鶴藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z33020737，生產(chǎn)批號(hào)：20160314）；奧美拉唑腸溶膠囊（20mg×14粒，珠海潤(rùn)都制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20066724，生產(chǎn)批號(hào)：20151209）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wister大鼠104只，雌雄各半，體重180～220g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK20160010。

1.3 試劑及儀器：前列腺素E2（PGE2）Elisa試劑盒（購(gòu)于Bio-Swamp Life Science公司）；電子天平、恒溫水浴箱、低溫冰箱、酶標(biāo)儀、高壓蒸汽滅菌鍋、高速離心機(jī)等（均由江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院中藥綜合分析實(shí)驗(yàn)室提供）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 活性部位篩選：分述如下。

2.1.1 不同溶劑提取活性部位：左金丸加適量硅藻土研勻，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、65%乙醇、鹽酸-乙醇（1：100）、水提取，提取液低溫烘干，配成含生藥量1g/ml的混懸水溶液。

2.1.2 抗?jié)兓钚院Y選：取大鼠54只，隨機(jī)分為9組，模型對(duì)照組（生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組（現(xiàn)配的1g/ml奧美拉唑混懸水溶液）、左金丸實(shí)驗(yàn)組，給藥體積均為5ml/kg，模型對(duì)照組給予同體積生理鹽水。每日灌胃1次，連續(xù)給藥5d，第4d給藥后，開(kāi)始禁食24h，不禁水，于末次給藥后3h，各組大鼠均灌胃無(wú)水乙醇1ml/只。造模結(jié)束后，各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）進(jìn)行深度麻醉，麻醉后開(kāi)腹。將鼠胃從幽門至賁門沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，使黏膜面外翻后用生理鹽水輕輕漂洗，再刷去胃黏膜表面粘液，鋪平，觀察大鼠的胃黏膜損傷情況，計(jì)算胃潰瘍指數(shù)。

2.2 活性部位抗?jié)冏饔脵C(jī)制研究：分述如下。

2.2.1 活性部位不同劑量制備：左金丸加適量硅藻土研勻，用鹽酸-乙醇提取，提取液低溫烘干，分別配成含生藥量0.5g/ml（低劑量組）、1g/ml（中劑量組）、2g/ml（高劑量組）的混懸水溶液。

2.2.2 活性部位不同劑量指標(biāo)測(cè)定：將50只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、左金丸活性部位低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組各10只大鼠。按照活性篩選相同的方法造模，處死，迅速分離腹主動(dòng)脈后采血，靜置于無(wú)抗凝劑采血管中4h，再置離心機(jī)中于3000r/min離心10min，分離血清，放在EP管中于-20℃下保存?zhèn)溆谩２裳?，迅速結(jié)扎幽門，取出鼠胃，測(cè)定pH值。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)方法：胃液pH值測(cè)定：結(jié)扎鼠胃幽門，由賁門吸取少量胃液滴在pH試紙上，測(cè)定pH值。胃潰瘍指數(shù)（UI）計(jì)算：參照Guth[7]標(biāo)準(zhǔn)，即胃黏膜損傷長(zhǎng)度以mm計(jì)算，斑點(diǎn)糜爛計(jì)1分；糜爛長(zhǎng)度＜1mm計(jì)2分；糜爛長(zhǎng)度1～2mm計(jì)3分；糜爛長(zhǎng)度2～3mm計(jì)4分；糜爛長(zhǎng)度＞4mm計(jì)5分；寬度＞1mm時(shí)分值×2，全胃得分相加即為胃潰瘍指數(shù)。酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中PGE2的含量：按Elisa試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行操作。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，并用LSD法進(jìn)行兩兩比較、相關(guān)性檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)大鼠胃潰瘍的影響：與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和左金丸不同溶劑提取組大鼠UI值明顯降低（P＜0.01），各提取組潰瘍指數(shù)均小于模型對(duì)照組，對(duì)潰瘍均有一定的抑制作用；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，左金丸鹽酸-乙醇組大鼠UI值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），抗?jié)冃Ч顬轱@著，其潰瘍抑制率高達(dá)90.12%。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)大鼠潰瘍作用的影響結(jié)果（±s）

表1 對(duì)大鼠潰瘍作用的影響結(jié)果（±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.01。

組別模型對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組石油醚組氯仿組乙酸乙酯組乙醇組65%乙醇組鹽酸-乙醇組水組抑制率（%）-91.38 45.14 71.80 71.05 54.95 66.40 90.12 62.10例數(shù)5 6 5 5 6 6 6 6 5胃黏膜損傷指數(shù)80.30±10.43 6.92±1.56*44.05±15.53*22.64±8.34*23.25±8.26*36.17±12.53*26.98±9.48*7.93±1.92*30.43±10.86*

3.2 各組大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比較：與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、左金丸中、高劑量組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，左金丸中、高劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比較（±s）

表2 各組大鼠胃液pH值、血清PGE2含量比較（±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.01。

組別模型對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組活性部位低劑量組活性部位中劑量組活性部位高劑量組PGE2（ng/L）89.48±1.55 94.52±2.22*90.89±1.55 92.95±4.10*93.81±2.21*例數(shù)9 10 10 9 9胃液pH值1.74±0.25 2.78±0.27*1.81±0.25 2.26±0.24*2.80±0.23*

4 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，不同溶劑提取的左金丸活性部位對(duì)大鼠胃潰瘍均有不同程度的抑制作用，其中鹽酸-乙醇（1：100）組對(duì)胃潰瘍的抑制率最高，原因可能是由于左金丸中的生物堿一般是季銨型生物堿的形式，當(dāng)其與鹽酸反應(yīng)后，生成了鹽，增加了在溶劑中的溶解度，因此左金丸中的有效成分提取充分。

導(dǎo)致胃黏膜損傷的主要原因之一是胃酸分泌過(guò)多。本實(shí)驗(yàn)觀察到模型對(duì)照組大鼠胃液pH值顯著降低，且和胃潰瘍的發(fā)生有關(guān)。隨著左金丸活性部位劑量的升高，大鼠胃內(nèi)pH值明顯增大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示左金丸能有效抑制胃酸的分泌，使胃液pH值提高，從而抑制大鼠胃潰瘍。其原理可能是由于小檗堿的苯并二噁茂環(huán)結(jié)構(gòu)類似于奧美拉唑的苯并咪唑環(huán)結(jié)構(gòu)，屬于生物電子等排體，起到質(zhì)子泵抑制劑即H+/K+-ATP酶抑制劑的作用，從而抑制胃酸分泌。胃黏膜屏障的主要影響因素是PG，尤其是PGE2對(duì)胃黏膜具有強(qiáng)烈的保護(hù)作用。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，與模型對(duì)照組相比，左金丸活性部位中高劑量組大鼠血清PGE2水平明顯上升，說(shuō)明此活性部位可顯著促進(jìn)胃潰瘍大鼠上皮細(xì)胞合成和分泌PGE2，使胃黏膜防御功能增強(qiáng)，然后對(duì)大鼠胃潰瘍有抑制作用。

本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)采取無(wú)水乙醇灌胃法造大鼠胃潰瘍模型，以胃潰瘍指數(shù)（UI）為指標(biāo)篩選出活性部位，然后測(cè)定該活性部位不同劑量情況下胃液pH值、血清中PGE2含量，得出結(jié)論：鹽酸-乙醇提取左金丸活性部位具有顯著的抗?jié)冏饔?，其作用機(jī)制為左金丸使大鼠胃液pH值和血清中PGE2含量升高，達(dá)到降低胃黏膜攻擊因素和增強(qiáng)胃黏膜防御功能的作用，從而起到保護(hù)大鼠胃黏膜的作用。

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2017-04-09