李慶端，侯麗華

(漳州市中醫(yī)院檢驗科，福建 漳州 363000)

二磷酸氯喹在血型鑒定和配血中的運用

李慶端，侯麗華

(漳州市中醫(yī)院檢驗科，福建 漳州 363000)

目的 探討紅細胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者血型鑒定和交叉配血不符的臨床用血策略。方法采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散試驗，制備裸細胞測定血型和交叉配血。結(jié)果 利用20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符；交叉次側(cè)為陰性。結(jié)論 采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散試驗制備裸細胞鑒定血型和交叉配血是對紅細胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者鑒定血型和交叉配血的一種補救方法，為解決臨床疑難輸血多一條路徑。

血型鑒定；交叉配血；熱放散試驗；抗體篩查

臨床輸血的安全主要取決于正確的血型鑒定和交叉配血以及不規(guī)則抗體的篩查；在實際操作中，患者自身紅細胞和血漿的問題干擾血型的正確鑒定和交叉配血，給臨床用血提出挑戰(zhàn)，為了解決這類問題，確保安全，必須拓開思路尋求合符臨床安全輸血的新對策。

1 資料與方法

1.1 2011年至2016年我院紅細胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例。

1.2 試劑來源 血型鑒定卡和Coombs檢測卡由德國Diagnostic Grifols，S.A公司生產(chǎn)提供，ABO正定型血型單克隆抗體、反定型檢測用ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細胞由長春博迅生物制品有限公司生產(chǎn)提供，凝聚胺試劑盒由合肥天一生物技術(shù)研究所提供，抗體篩查標(biāo)準(zhǔn)紅細胞Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ（三人份O紅細胞）由上海血液生物醫(yī)藥制品有限公司提供。20%二磷酸氯喹[1]：（自備）取二磷酸氯喹20g，加生理鹽水至100ml，用 1mol/L NaOH 調(diào) pH 至 5.1，2～8℃冷藏備用。

1.3 儀器德國Diagnostic Grifols，S.A公司生產(chǎn)提供的卡式離心機和卡式孵育儀；可調(diào)控水浴箱由上海醫(yī)療器械有限公司提供，血庫專用離心機有湖南湘雅醫(yī)療器械有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 卡式血型鑒定、試管法血型鑒定、凝聚胺交叉配血（MPT）、Coombs凝膠微柱交叉配血（MGT）、不規(guī)則抗體篩查、直接抗人球蛋白檢測均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4.2 裸細胞制備患者EDTA-K3抗凝紅細胞1ml加入4ml20%二磷酸氯喹混勻置45℃水浴箱中，每隔10s鐘混勻一次，孵育30min趁熱1000g離心3min去除二磷酸氯喹再用生理鹽清洗4次備用。取25μl配成2.5%的紅細胞懸液直接涂片高倍鏡下鏡檢，紅細胞成單個分散；用Coombs凝膠微柱做直接抗人球蛋白試驗，結(jié)果陰性說明裸細胞制備成功。

2 結(jié)果

2.1 紅細胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例的血型不規(guī)則抗體檢測均為陰性；用于交叉配血的供血血型不規(guī)則抗體檢測均為陰性。

2.2 紅細胞自凝患者13例，EDTA-K3抗凝血未經(jīng)處理直接檢測血型，正反定型不符12例，經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符13例（見表1）；其中4例臨床需用血的，未經(jīng)處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法4例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚，微柱凝膠法出現(xiàn)1例次側(cè)凝聚；經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞做次側(cè)管交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現(xiàn)凝集，4例患者輸血后均未出現(xiàn)不良反應(yīng)（見表 2）。

表1 13例紅細胞自凝患者紅細胞處理前后血型鑒定結(jié)果

2.3 直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例，EDTA-K3抗凝血未經(jīng)處理直接檢測血型，正反定型不符2例，經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符21例；未經(jīng)處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法3例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚，微柱凝膠法21例均出現(xiàn)次側(cè)凝聚；經(jīng)20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞做次側(cè)交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現(xiàn)凝集，21例患者輸血后均未出現(xiàn)不良反應(yīng) （見表2）。

3 討論

利用抗原抗體結(jié)合的可逆性，通過改變溫度和PH的方法使抗體從結(jié)合的紅細胞表面解脫，暴露出原有血型抗原。采用20%二磷酸氯喹在45℃環(huán)境下對紅細胞進行放散洗滌，充分去除紅細胞表面的黏附物如紅細胞自身IgG抗體和吸附在紅細胞膜上冷凝素，最大限度上保持紅細膜的完整和原有血型抗原的活性，用處理后的紅細胞再進行血型正定型，結(jié)果可靠。13例紅細胞自凝患者紅細胞經(jīng)處理后均能排除紅細胞自凝的干擾，ABO正定型與反定型相符，且患者血漿在4℃和37℃環(huán)境下不與O型標(biāo)準(zhǔn)紅細胞發(fā)生凝聚反應(yīng)，可做出血型鑒定；同樣用處理后的紅細胞做交叉配血可以排除直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者的紅細胞對次側(cè)配血的干擾。紅細胞自凝機理復(fù)雜，出現(xiàn)紅細胞自凝的患者常伴有感染、自身免疫性疾病[8]、惡性腫瘤、妊娠、藥物致敏[2]或化學(xué)損傷等因素存在，導(dǎo)致紅細胞膜結(jié)構(gòu)或膜外周的電子云改變，細胞之間容易發(fā)生黏連；或因血漿中存在大量異質(zhì)性[10]大分子蛋白質(zhì)（多數(shù)為IgM分子）吸附在紅細胞膜上，血液離體后置于常溫下易引發(fā)的紅細胞自凝或多凝[7]；冷凝集素的存在是造成血型鑒定困難的主要原因之一[3]。另一方面這些蛋白分子可作為一種異抗原致敏機體產(chǎn)生針對自身紅細胞的自身抗體，患者血清中含有大量游離的自身抗體在體外可使細胞凝聚[2]，干擾血型的正定型。自身抗體的存在導(dǎo)致患者直接抗人球蛋白試驗陽性，這也是交叉配血時微柱法次管出現(xiàn)陽性結(jié)果的主要原因[3，5，6]。 細菌、腫瘤或藥物的代謝產(chǎn)物黏附或作用紅細胞膜表面，使紅細胞抗原性發(fā)生改變，出現(xiàn)類血型抗原物質(zhì)如類B抗原，與血型鑒定試劑中相應(yīng)的抗血清反應(yīng)，出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，干擾血型正定型鑒定[4，6，9，11]。 且這些代謝產(chǎn)物在體內(nèi)多數(shù)為分子量較小，以半抗原形式存在，黏附在紅細表面，在血流的沖擊下不易使紅細胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)，在體外適當(dāng)?shù)臈l件（靜置、離心或其他介質(zhì)）下出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，干擾血型正定型和次側(cè)配血。采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散和生理鹽水充分清洗，其目的是徹底去除紅細胞表面吸附的自身抗體和外來物質(zhì)如藥物分子、腫瘤、細菌代謝產(chǎn)物等，充分暴露其原始血型抗原。本實驗中，需要輸血的25例患者的血型不規(guī)則抗體均為陰性，所用于交叉的供者血型不規(guī)則抗體均為陰性，可排除因血液中存在血型不規(guī)則抗體引起的交叉配血不符[12，14]。用處理后的紅細胞做血型正定型和交叉次側(cè)配血，能達到預(yù)期的結(jié)果，血型鑒定正反相符，交叉配血主次相容，輸血后無出現(xiàn)不良反應(yīng)[13，15]。用20%二磷酸氯喹處理后的紅細胞做血型正定型和交叉配血試驗可以減少因血型鑒定出現(xiàn)正反定型不合和交叉配血主次側(cè)不符的困惑。本方法簡單實用，成本低，可作為解決日常臨床疑難輸血另一佐證。

表2 患者紅細胞處理前后次側(cè)交叉配血結(jié)果

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R457.1+1

A

1674-1129(2017)05-0812-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.064

2017-04-17；

2017-08-09)