李雪蓮　楊芬紅　戴婉波

【摘要】 目的 探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在稽留流產(chǎn)患者外周血中的表達(dá)情況。

方法 30例稽留流產(chǎn)患者作為觀察組， 30例自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者作為對照組， 利用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測兩組研究對象外周血中CD4+CD25+Treg表達(dá)情況， 計算得出CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例， 并進(jìn)行組間比較。結(jié)果 對照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 CD4+

CD25+Treg降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程， 而其水平在妊娠早期表達(dá)明顯升高， 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 稽留流產(chǎn)；外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；表達(dá)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.25.060

稽留流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見病和多發(fā)病之一， 目前發(fā)病原因不明。母胎界面的免疫失衡是較為公認(rèn)的發(fā)病原因。而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell， Treg） 是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的重要因素， 對正常免疫耐受和妊娠的維持起重要作用。Treg為CD4+CD25+T細(xì)胞， 具有免疫負(fù)性調(diào)節(jié)功能。研究發(fā)現(xiàn)， 在小鼠孕早期轉(zhuǎn)移體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞可保護(hù)胚胎避免自然流產(chǎn)發(fā)生。既往研究資料顯示， CD4+CD25+Treg細(xì)胞與母體對胎兒的耐受程度有一定影響[1， 2]。為了研究CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)發(fā)生的過程中是否發(fā)揮作用， 本研究將檢測CD4+CD25+Treg在稽留流產(chǎn)患者和健康早孕者外周血中的表達(dá)情況， 從而初步探討其在稽留流產(chǎn)中的作用?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年12月～2017年3月本院婦科門診收治的稽留流產(chǎn)患者30例作為觀察組， 年齡20～34歲， 平均年齡（27.30±4.21）歲， 孕周6～10周；并選擇同期在本院自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者30例作為對照組， 年齡19～34歲， 平均年齡（26.07±4.07）歲， 孕周5～10周。兩組研究對象年齡、孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 檢測方法 選用美國BD公司C6型流式細(xì)胞儀、日本久保田4000型臺式離心機(jī)、美國Peprotech公司的PMA（10X）、Ionomycin（10X）、Brefeldin A（10X）Fixation/Permeabilization

Concentrate、Fixation/Permeabilization Diluent、Permeabilization Buffer工作液（1X）、相關(guān)熒光標(biāo)記流式抗體Anti human CD4-FITC， Anti-Human CD25 PE-Cyanine7及同型對照抗體等完成檢測。具體檢測步驟：所有受試者均抽取2.0 ml外周靜脈血， 并且給予20 μl/ml劑量的肝素抗凝處理后， 在6 h內(nèi)完成檢驗。CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例采用流式細(xì)胞術(shù)檢測并計算得出結(jié)果。所有操作步驟均需要嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行， 并且保證在無菌環(huán)境中完成。

1. 3 觀察指標(biāo) 對比兩組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.19， P<0.05）。

3 討論

稽留流產(chǎn)是早期自然流產(chǎn)的一種， 在臨床上常常發(fā)生。臨床主要表現(xiàn)為停經(jīng)、陰道少量流血， B超提示未見心管波動， 胚胎發(fā)育小于孕周等影像學(xué)表現(xiàn)。目前， 其發(fā)病的機(jī)制尚未完全明確。隨著研究的深入， 越來越多的證據(jù)表明， 母胎免疫失調(diào)在早期自然流產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用。但是目前尚無關(guān)于Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)中的作用研究。

現(xiàn)代生殖免疫學(xué)研究指出， 母胎免疫耐受與正常妊娠維持具有密切相關(guān)性， 如果母體免疫耐受機(jī)制平衡被打破， 則會導(dǎo)致病理性妊娠， 例如流產(chǎn)等的發(fā)生。也有學(xué)者指出， 細(xì)胞因子在妊娠成功過程中具有重要影響[3]。Treg細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一種T細(xì)胞， 是具有調(diào)節(jié)功能的成熟T細(xì)胞亞群， 最早發(fā)現(xiàn)于腫瘤疾病和免疫性疾病中。隨著臨床研究的深入和分子生物學(xué)的進(jìn)展， Treg細(xì)胞在機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)維持、移植耐受、腫瘤免疫、過敏反應(yīng)及微生物感染等方面的調(diào)節(jié)功能逐漸被證實。Treg細(xì)胞對于外周血中T細(xì)胞的穩(wěn)定， 有著一定的維持作用， 在免疫耐受的發(fā)生過程中有著重要的作用。現(xiàn)階段的研究發(fā)現(xiàn)， CD4+CD25+Treg具有免疫抑制調(diào)節(jié)功能， 與母胎免疫耐受的形成具有相關(guān)性[4， 5]。有研究發(fā)現(xiàn)Treg數(shù)量的異?？赡軈⑴c了自然流產(chǎn)的發(fā)生[6-9]。本研究結(jié)果顯示， 對照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對照組， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 這與其他相關(guān)文獻(xiàn)研究結(jié)果相符[10]， 說明CD4+CD25+Treg水平與稽留流產(chǎn)的發(fā)生有一定聯(lián)系， 其水平降低可能是導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生的原因。endprint

綜上所述， CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)、健康早孕孕婦之間的表達(dá)存在明顯差異， CD4+CD25+Treg細(xì)胞降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程， 而其水平在妊娠早期表達(dá)升高， 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān)， 可在臨床上對其進(jìn)行檢測， 為稽留流產(chǎn)的診斷和預(yù)防提供指導(dǎo)。

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[收稿日期：2017-05-15]endprint