李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

熒光定性PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學指標的相關(guān)性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

目的 針對ELISA法乙肝免疫學指標與熒光定性PCR法檢測HBV-DNA間相關(guān)性進行分析。方法 以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測的168份HBsAg反應(yīng)性的獻血為觀察對象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學指標檢測，針對檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果 本組獻血者中50例在ELISE檢測中為大三陽，其HBV-DNA陽性率連同Ct值與小三陽組存在有顯著差異，且HbeAg（+）患者檢測陽性率以Ct值平同樣較HbeAg（-）高（P＜0.05），差異具備統(tǒng)計學意義。結(jié)論 乙肝免疫學檢測結(jié)果與HBV-DNA檢測情況存在有一定關(guān)聯(lián)，臨床可借此對乙肝患者進行診斷。

ELISA法；乙肝免疫學指標；HBV-DNA

0 引言

乙肝屬于危害性較大一種傳染病，在我國存在有極高的病發(fā)率，在一定程度上影響著居民健康。為實現(xiàn)對該癥病發(fā)率的有效控制，乙肝檢測工作就顯得格外重要。當前，臨床主要依據(jù)乙肝免疫學指標進行篩查與診斷。就檢測方法而言，以ELISA法與熒光定性PCR法存在有極高的使用率[1]。本次我站就針對上述兩種檢測方式與乙肝免疫學指標間的聯(lián)系情況進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測的168份HBsAg反應(yīng)性的獻血樣本為觀察對象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學指標檢測。本組患者中存在有男性100例，女性68例，年齡于15-55歲間，均值為（46.45±1.45）。所有患者HbsAg均表現(xiàn)為陽性。結(jié)合檢測結(jié)果，將本組患者劃分為大三陽組50例，小三陽組30例，A組 [AbsAg（+）、HbcAg（+）]40例，B組 [AbsAg（+）、HbcAg（-）]20例，以及C組[AbsAg（+）、HbcAb（+）]28例。均接受ELISA法與熒光定性PCR法檢測。年齡、性別組成等方面對比，5組患者無顯著差異（P＞0.05）無統(tǒng)計學意義。

1.2 方法

ELISA法檢測中所使用設(shè)備為全自動酶免分析儀（深圳愛康公司生產(chǎn)，型號為AE280，校驗周期為1年），檢測中所用試劑，一檢由廈門英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，弱陽性質(zhì)控品濃度為0.5 IU/ ml，二檢試劑由北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，弱陽性質(zhì)控品濃度為0.2 IU/ml。以上試劑為ELISA法進行血清學檢測用試劑，采用兩個不同廠家的試劑進行兩次檢測，兩次檢測均合格，此項結(jié)果合格，雙試劑反應(yīng)性直接判定為該項目不合格；單試劑反應(yīng)性時需進行雙孔復試，任意一孔反應(yīng)性則判斷為不合格；不合格樣本直接淘汰，不再進行NAT檢測，合格樣本進行NAT檢測；NAT檢測采用定性實時熒光PCR法，采用8混模式，混檢陽性，下一工作日進行拆分檢測（單檢）。

熒光定性PCR法檢測中，所用設(shè)備為，科華核酸檢測系統(tǒng)：Hamiltion Star（樣本處理系統(tǒng)）+ABI 7500（擴增儀）校驗周期為半年。所用試劑由上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)，質(zhì)控品濃度為HBV DNA200IU/ml、HCV RNA 2000IU/ ml、HIV RNA 2000 IU/ml。各項操作均嚴格按照流程進行。

1.3 統(tǒng)計學方法

本次研究中各類數(shù)據(jù)均按照SPSS19.0進行處理，采用%對計數(shù)數(shù)據(jù)表示，以χ2檢測，而計量數(shù)據(jù)則以表示，以t檢測，若（P＜0.05）則表明數(shù)據(jù)間存在有顯著差異，具備統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 大三陽與小三陽組HBV-DNA對比

結(jié)合檢測可知，大三陽組獻血組檢測陽性率為94.00 %（47/50），而小三陽組為53.33 %（16/30），且大三陽組Ct值為（37.01±0.05），而小三陽組為（32.14±0.25），兩項對比（P＜0.05）具備統(tǒng)計學意義，如表1、2所示。

表1 兩組患者陽性率對比[n(%)]

表2 兩組患者Ct值對比

表2 兩組患者Ct值對比

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2.2 其他組檢測陽性率與HBV-DNA對比

結(jié)合檢測可知，A組、B組與C組檢測陽性率與HBV-DNA對比存在有顯著差異（P＜0.05），差異具備統(tǒng)計學意義，詳見下表3。

表3 A、B、C三組患者檢測情況對比

3 討論

乙型肝炎為世界所關(guān)注的病癥，存在有較強的傳染性，且病發(fā)率較高，將直接使得患者病發(fā)肝硬化以及肝癌等病癥的幾率增加。結(jié)合臨床實際可知，我國一直屬于乙肝高發(fā)國家，乙肝攜帶率高達10 %以上，在很大程度上威脅著居民健康。因此，采用高效、安全的方式對乙肝進行檢測，幫助患者盡早確診，對于延緩病癥發(fā)展以及傳播率均有著重要意義[2]。

當前，臨床用于乙肝的檢測方式較多，常見有化學發(fā)光法、實時熒光定性PCR法以及酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。其中ELISA因存在有操作簡單，出結(jié)果快以及成本較低、具備極高的靈敏度等優(yōu)勢迅速在臨床得到推廣。但該檢測方式僅僅能達到定性檢測的效果，能為HBV感染情況提供有效診斷，而無法實現(xiàn)對患者體內(nèi)病毒復制情況及時、動態(tài)反應(yīng)的效果。而實時熒光定性PCR法，則能有效對HBV-DNA在患者體內(nèi)的復制情況加以測定，以了解乙肝病毒在患者體內(nèi)的復制情況，因其操作較為簡單，在臨床存在有極高的使用率。而該檢測方式確無法對非復制狀態(tài)感染進行檢測。基于上述兩方面因素，臨床將上述兩種方案聯(lián)合的方式運用于乙肝患者的檢測中[3-4]。

結(jié)合本次研究可知，大三陽獻血組在PCR檢測中存在有極高的準確率，且Ct值較高，可見該類患者體內(nèi)乙肝病毒極為活躍，存在有較強的傳染性。同時也能證明ABsAg（+）、HBcAg（+）等可準確對乙肝病毒感染、傳染情況加以反應(yīng)。且通過將A、B、C組對比可知，HbeAg的在乙肝患者體內(nèi)存在和HBV-DNA存在有極強的聯(lián)系。早在凌利芬等[5]報道中已經(jīng)指出，臨床可以將HbeAg作為乙肝病毒在患者體內(nèi)進行復制的主要依據(jù)，若該指標轉(zhuǎn)為陰性，則表明患者HBV-DNA復制水平得到顯著下降，能為臨床治療工作以及病癥監(jiān)測提供有效指導。同時，上述三組患者對比也可以發(fā)現(xiàn)，若HbeAg表現(xiàn)為陽性，則患者體內(nèi)乙肝病毒復制量減少，其傳染性也相對減弱。

結(jié)合上述研究可以發(fā)現(xiàn)，采用熒光定性PCR法與ELISA法對乙肝患者進行檢測，能更加準確的對患者體內(nèi)乙肝病毒復制情況進行定性進行表示，能有效克服上述兩種檢測方式在單獨使用中的局限性，能幫助乙肝患者盡早得到確診。

[1] 羅燕春,李勇,鄭惠蘭,等.熒光定量PCR檢測主要性病病原體的臨床應(yīng)用[J].海南醫(yī)學,2006,17(9):148-149.

[2] 何昕,姜惠民,張艷,等.熒光定量pcr檢測高危型hpv的方法及其試劑盒:中國,CN101886137A[P].2010.

[3] 劉揚,吳孟超,陳漢,等.巢式RT-PCR定性檢測肝癌、癌旁組織及正常肝組織內(nèi)AFPmRNA表達[J].中國腫瘤臨床,2000,27(9):695-696.

[4] 石伍華,王海清,許艾明,等.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關(guān)性分析[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2009,8(01):87-88.

[5] 凌利芬,陸學東,吳正林,等.乙肝病毒大蛋白與HBV-DNA相關(guān)性研究及在不同性別、年齡群體中的差異分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2008,23(04):30-32.

Correlation between HBV-DNA and Immunological Indexes of Hepatitis B by ELISA Method by Fluorescence Qualitative PCR

LI Chun-fang

(The Central Blood Station of Langfang, Langfang,Hebei, 065000, China)

Objective To analyze the correlation between ELISA immunology index and fluorescence qualitative PCR method for detecting HBV-DNA. Methods In our station detected during the period of January 2016 to March 2017 of 168 copies of the HBsAg reaction of blood as the object of observation, HBV-DNA and ELISA were given the detection method of hepatitis B immune indicators, according to the analysis of test results. Results This group of blood donors in 50 cases in ELISE detection for HBeAg positive rate of HBV-DNA, which together with small Sanyang group there were significant differences in the values of Ct and HbeAg (+) patients with the positive rate detected by Ct value of flat than HbeAg (-) is high (P＜0.05) , the difference has statistical significance. Conclusion The immunological test results of hepatitis B are related to the detection of HBV-DNA, which can be used to diagnose the hepatitis B patients.

ELISA method; Hepatitis B immunology index; HBV-DNA

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.58