彭學(xué)樣，聶林貞，紀(jì)前

（1.山東省臨沂市莒南縣人民醫(yī)院，山東 臨沂 276600；2.莒南縣大店中心衛(wèi)生院，山東 臨沂 276600）

探討乙肝病毒基因分型與HBV-DNA載量及臨床表現(xiàn)的關(guān)系

彭學(xué)樣1，聶林貞2，紀(jì)前1

（1.山東省臨沂市莒南縣人民醫(yī)院，山東 臨沂 276600；2.莒南縣大店中心衛(wèi)生院，山東 臨沂 276600）

目的 探討乙肝病毒分型的不同和HBV-DNA載量及臨床表現(xiàn)的關(guān)系。方法 收集我院于2013年2月-2016年5月間收治的慢性乙型肝炎患者120例，統(tǒng)計(jì)分析患者采用FQ-PCR方法對(duì)患者HBV-DNA進(jìn)行定量檢測(cè)，檢測(cè)患者血清中ALT、白蛋白、球蛋白、AST、TBIL水平。結(jié)果 根據(jù)乙肝病毒基因分型情況顯示，B型患者41例（34.17 %），C型患者61例（50.83 %），D型患者6例（5.00 %），混合型患者6例（5.00 %），未分型患者6例（5.00 %）。B型HBV-DNA水平明顯低于C型和混合型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。D型HBV-DNA水平明顯低于C型和混合型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B型患者中原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝硬化、慢性乙型肝炎的發(fā)病率均低于C型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 本次研究中乙肝病毒分型以B型和C型為主，C型較為活躍，復(fù)制能力較強(qiáng)，對(duì)人體肝功能的破壞能力更強(qiáng)。

乙肝病毒；基因分型；HBV-DNA；臨床表現(xiàn)

0 引言

因分型的不同導(dǎo)致了病毒表現(xiàn)出的生物學(xué)特性也不盡相同，進(jìn)而直接影響了患者的臨床表現(xiàn)[1-3]。本次研究旨在探討乙肝病毒分型的不同和HBVDNA載量及臨床表現(xiàn)的關(guān)系，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院于2013年2月-2016年5月間收治的慢性乙型肝炎患者120例，其中男性患者66例，女性患者54例，年齡23-51歲，平均年齡為（36.36±12.24）歲；本次研究經(jīng)倫理會(huì)審核同意。

1.2 方法

采用FQ-PCR方法對(duì)患者HBV-DNA進(jìn)行定量檢測(cè)，UNG酶、dUTP均由上海華美生物工程公司制造，HBV-DNA大于103量則視為陽(yáng)性表達(dá)，本次研究中納入的患者均經(jīng)兩次檢測(cè)后為陽(yáng)性。使用HBV基因分型雜交試劑盒，對(duì)納入研究的患者進(jìn)行基因分型。具體操作為：取混合液100 ul先置于離心管，加入血清檢測(cè)樣本100 ul進(jìn)行混合，經(jīng)高溫煮沸15min后再經(jīng)高速離心5 min，取上層清液置于試管中混合均勻，之后依次進(jìn)行預(yù)變性、循環(huán)38次，最后進(jìn)行延伸。采用擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行冰浴。取核酸探針25 ul、雜交液90 ul加入反應(yīng)孔內(nèi)，設(shè)置空白對(duì)照，搖動(dòng)混合均勻后在50℃的水浴中放置60 min。在每個(gè)孔中加雜交洗液200 ul，重復(fù)清洗兩次。每孔加入顯色劑，檢測(cè)結(jié)果判定方法按P/ N值進(jìn)行評(píng)價(jià)，P/N值≥3.0則判定為陽(yáng)性，P/N值＜3.0則判定為陰性[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)患者血清中ALT、白蛋白、球蛋白、AST、TBIL水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用（n，%）表示，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，（P＜0.05）表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乙肝病毒基因分型情況

根據(jù)乙肝病毒基因分型情況顯示，B型患者41例（34.17 %），C型患者61例（50.83 %），D型患者6例（5.00 %），混合型患者6例（5.00 %），未分型患者6例（5.00 %）。

2.2 基因分型與HBV-DNA載量的關(guān)系

B型HBV-DNA水平明顯低于C型和混合型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。D型HBV-DNA水平明顯低于C型和混合型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。B型、D型HBV-DNA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。C型和混合型HBV-DNA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見表1。

表1 基因分型與HBV-DNA載量的關(guān)系

2.3 基因分型臨床表現(xiàn)的關(guān)系

B型患者中原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝硬化、慢性乙型肝炎的發(fā)病率均低于C型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；B型患者中無癥狀攜帶者的人數(shù)明顯高于C型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表2。

表2 基因分型臨床表現(xiàn)的關(guān)系[n(%)]

2.4 基因分型與肝功能情況比較

B型患者中TBill、ALT、球蛋白及AST水平均低于C型患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表3。

表3 基因分型與肝功能情況比較

3 討論

乙型肝炎是全球高發(fā)的疾病，據(jù)調(diào)查顯示，世界范圍內(nèi)的HBV攜帶者高達(dá)3億多人[5]。而我國(guó)是HBV的高發(fā)地區(qū)，我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)HBV攜帶者約1.2億人，乙肝患者高達(dá)2000萬(wàn)，約有5 %的幾率可能轉(zhuǎn)化為肝癌[6]。乙肝病毒在不斷進(jìn)化，正是由于其不斷的進(jìn)化形成了目前已知的A-H八種類型的基因分型[7]。

在本次研究中探討了乙肝病毒分型的不同和HBV-DNA載量及臨床表現(xiàn)的關(guān)系，結(jié)果顯示，在基因分型與HBV-DNA載量的關(guān)系中B型HBVDNA水平明顯低于C型和混合型（P＜0.05）。D型HBV-DNA水平明顯低于C型和混合型（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，C型和混合型的病毒較為活躍，復(fù)制能力較強(qiáng)。這與之前的報(bào)道相似[8-9]，該報(bào)道顯示，不同基因型的乙肝病毒活躍度及抵御機(jī)體免疫系統(tǒng)的能力不同。

綜上所述，基因分型呈現(xiàn)出一定的地域差異，本次研究中乙肝病毒分型以B型和C型為主，C型較為活躍，復(fù)制能力較強(qiáng)，對(duì)人體肝功能的破壞能力更強(qiáng)。乙肝病毒分型的研究有助于確定傳染源，對(duì)臨床治療具有重要價(jià)值。

[1] 蘇榮,羅娜,楊延斌,等.HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者乙肝病毒基因變異和分型研究[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,32(12):1804-1807.

[2] 劉愛平,徐洪濤,邢同京,等.乙肝病毒基因分型與慢性乙型肝炎患者臨床和病理的相關(guān)性研究[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2010,20(3):175-177.

[3] 李衛(wèi)昆.乙肝病毒基因分型與HBVDNA及臨床表現(xiàn)的關(guān)系[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2015,29(8):105-105,107.

[4] 孫珍,趙志軍,師志云,等.寧夏地區(qū)乙肝病毒感染者HBV基因分型與臨床意義[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,36(1):34-37.

[5] 李潔萍,謝新生,張戡,等.嘉興地區(qū)乙肝病毒基因分型與病理及耐藥的關(guān)系[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2014,12(2):159-160,163.

[6] 劉永蘭,包晗,趙錦榮,等.高通量流式熒光微球懸液芯片檢測(cè)乙肝病毒基因分型[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(35):6805-6809.

[7] 牟一坤,顧琳,曾淑珍,等.不同臨床類型慢性乙肝患者乙肝病毒基因型檢測(cè)[J].分子診斷與治療雜志,2010,2(1):46-49.

[8] 胡玉弘,李瑩,馮軍,等.淺談承德地區(qū)HBV的基因分型與阿德福韋酯的療效及耐藥變異的關(guān)系[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2014,12(16):5-6.

[9] 李延武,李卓成.基因芯片技術(shù)在乙肝病毒分型和耐藥突變檢測(cè)中的應(yīng)用[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2015,19(9):49-51,58.

To Investigate the Relationship between Hepatitis B Virus Genotype and HBV-DNA Load and Clinical Manifestation

PENT Xue-yang1, NIE Lin-zhen2, JI Qian1

(1.The People’s Hospital of Junan, Linyi, Shandong, 276600, China; 2.Dadian Central Health Center of Junan, Linyi, Shandong, 276600, China)

Objective To investigate the relationship between hepatitis B virus typing, HBV-DNA load and clinical manifestations. Methods A total of 120 patients with chronic hepatitis B admitted in our hospital from February 2013 to May 2016 were collected. were analyzed by FQ-PCR method for quantitative detection of patients with HBV-DNA, serum ALT, albumin, glob ulin, AST, TBIL. Results According to hepatitis B virus genotype the situation display,there were 41 patients with type B (34.17%),there were 61 patients with type C (50.83%),there were 6 patients with type D (5%),there were 6 patients with mixed type (5%),unclassified patients were in 6 patients (5%).The levels of type HBV-DNA B were lower than those of type C and mixed type,the differences were statistically significant (P＜0.05).The levels of type HBV-DNA D were lower than those of type C and mixed type,The differences were statistically significant (P＜0.05).The incidence of primary hepatocellular carcinoma, cirrhosis and chronic hepatitis B in patients with type B is lower than that of type C,the differences were statistically significant (P＜0.05). Conclusion Hepatitis B virus subtypes are mainly type B and type C in this study, C type is more active, replication ability is stronger, and the damage to human liver function is stronger.

Hepatitis B virus; Genotyping; HBV-DNA; Clinical manifestation

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.56