□ 佟麗娜 徐明亮 高金波 北大荒黑土薯業(yè)有限公司

馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖檢測(cè)方法

□ 佟麗娜 徐明亮 高金波 北大荒黑土薯業(yè)有限公司

磷酸寡糖屬于新型功能性低聚糖類，除了具備低聚糖的基本特點(diǎn)外，還具有其他功能，比如促進(jìn)鈣鐵等礦物質(zhì)吸收的主要功能。本次分析馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖的檢測(cè)方法和結(jié)果，并對(duì)結(jié)果展開(kāi)相應(yīng)分析，旨在為今后實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

馬鈴薯；淀粉；磷酸寡糖；檢測(cè)

磷酸寡糖即屬于功能性低聚糖，具有促進(jìn)雙歧桿菌增值，使人和動(dòng)物的腸道環(huán)境改善的效果，另外還具備抑制體內(nèi)毒素、使集體免疫特性增強(qiáng)，抗腫瘤的特點(diǎn)[1]。磷酸寡糖屬于新興起的一種低聚糖類，具備低熱量、地腐蝕性等特點(diǎn)，常用于日用化工、保健食品和淀粉食品加工業(yè)等方面，應(yīng)用市場(chǎng)相對(duì)比較廣泛[2]。

1 材料和主要設(shè)備

實(shí)驗(yàn)材料：磷酸寡糖（從馬鈴薯淀粉中分離提?。粔A性磷酸酯（生物科技公司）；芽低聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司）。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：分光光度計(jì)、微量進(jìn)樣器。

2 具體檢測(cè)方法

2.1 處理磷酸寡糖的方法

選擇一定數(shù)量的磷酸寡糖，加水定容至一定體積，選擇2 mL磷酸寡糖溶液，分別添加堿性磷酸酯酶溶液（10μL 400 μm/ml），pH值為9.4左右的碳酸鹽緩沖溶液（20 mL），將溶液混合后放置在37 ℃的水浴鍋中保溫，之后取出，再向其中添加3滴苯酚溶液，使酶失活，用水定容，容積為50 mL。

2.2 磷酸寡糖的鑒別方法

（1）薄層色譜法檢測(cè)方法。選擇一定數(shù)量的硅膠，添加水，硅膠和水的比例控制在1∶2.5左右，再使用玻璃棒進(jìn)行攪拌，等到硅膠漿液均勻分散之后，確保溶液的黏稠度處于適中狀態(tài)，再將漿液均勻的涂抹在玻璃板上，玻璃板的面積為（10 cm×15 cm），室溫環(huán)境下晾干。使用之前需要在110℃的環(huán)境下活化1 h，在使用微量點(diǎn)樣器點(diǎn)樣，然后取出薄層板，將其放在盛有展開(kāi)劑的層析缸中，再展開(kāi)。

（2）堿性磷酸酯酶檢測(cè)法。使用DNS法測(cè)定吸光度值，選擇的溶液分別為1、2、3 mL，測(cè)定次數(shù)為3次，然后選取平均值，檢測(cè)磷酸寡糖的含量。

3 結(jié)果

3.1 展開(kāi)劑選擇比較結(jié)果

本次研究中所選擇的展開(kāi)劑類型比較多樣，但主要比較兩種類型的展開(kāi)劑分離效果，類型1：水+乙醇+正丁醇；類型2：吡啶+乙酸乙酯+水。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，類型1展開(kāi)劑可以對(duì)麥芽糖一直到麥芽七糖等能夠?qū)崿F(xiàn)分離，分離斑點(diǎn)清晰，總體效果較好。類型2展開(kāi)劑無(wú)法將各糖組進(jìn)一步分離，而且整個(gè)顯色為藍(lán)色帶狀，分離效果整體較差。

3.2 顯色劑的比較結(jié)果

本次研究中顯色劑分別選擇了3種.類型1：磷酸+二苯胺+苯胺；類型2：濃度20%硫酸的乙醇溶液；類型3：氨水+氫氧化鉀+硝酸銀。三種類型顯色劑的顯色結(jié)果比較見(jiàn)表1。

表1 三種類型顯色劑顯色效果比較

3.3 馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖檢測(cè)結(jié)果

本次研究中分別使用顯色劑和展開(kāi)劑檢測(cè)磷酸寡糖，最終的檢測(cè)結(jié)果顯示，馬鈴薯淀粉中的磷酸寡糖包含以下幾種糖類，分別是麥芽三糖、麥芽七糖、麥芽糖和葡萄糖等，其中麥芽三糖到麥芽六糖斑點(diǎn)面積較大，顏色較深，說(shuō)明在馬鈴薯淀粉中的磷酸寡糖中，麥芽三糖至六糖為最主要的成分。

3.4 馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖回收率檢測(cè)結(jié)果

堿性磷酸酯酶能夠在特定的條件下水解磷酸寡糖中的磷脂鍵，并且游離出糖，條件相對(duì)溫和，并不會(huì)產(chǎn)生破壞作用。本次研究顯示踐行磷酸酯酶法測(cè)定馬鈴薯淀粉中的磷酸寡糖，樣品的回收率可達(dá)到8.7%左右，誤差相對(duì)較小，這說(shuō)明此種方式的準(zhǔn)確性比較高。

4 討論

我國(guó)屬于典型的馬鈴薯生產(chǎn)大國(guó)，每年馬鈴薯的種植面積大約為500萬(wàn)公頃，產(chǎn)量位于世界之首，馬鈴薯主要種植區(qū)域分布在西南、華北、東北和西北等地區(qū)，但是受到加工水平的影響，加工轉(zhuǎn)化率水平比較低，甚至達(dá)不到5%，但是在發(fā)達(dá)國(guó)家的轉(zhuǎn)化率卻已經(jīng)達(dá)到了80%左右，所以必須積極研發(fā)相關(guān)的生產(chǎn)工藝，拓寬農(nóng)民的收入途徑[3]。本次主要分析馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖檢測(cè)方法，可得出以下結(jié)論：①展開(kāi)劑選擇類型1，顯色劑選擇類型1，點(diǎn)樣原點(diǎn)直徑小于2mm，點(diǎn)樣量濃度為2 μg/μL時(shí)，可以將磷酸寡糖中麥芽糖中進(jìn)一步的細(xì)分，分為麥芽一糖至七糖，最終的分離效果整體較好，斑點(diǎn)為圓形、清晰。因此最佳點(diǎn)樣量濃度為2 μg/μL。②麥芽三糖至六糖為馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖的主要成分。

5 結(jié)論

磷酸寡糖屬于新型的低聚糖種類，能夠促進(jìn)人體對(duì)鈣的吸收。磷酸寡糖的作用于CPP效果具有一致性，可以從馬鈴薯淀粉中提取。本次筆者詳細(xì)分析馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖檢測(cè)方法，指出最佳檢測(cè)方法，為今后實(shí)際應(yīng)用提供理論支持。

[1]楊麗,楊文軍,劉霞,等.由馬鈴薯淀粉制得磷酸寡糖的定性定量測(cè)定[J].食品科學(xué),2011(14):198-201.

[2]楊文軍.馬鈴薯淀粉制備磷酸寡糖的研究[D].安徽:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[3]毛跟年,許牡丹,楊亞洲,等.馬鈴薯淀粉中磷酸寡糖的檢測(cè)[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(6):23-24,46.