沈 菲，張成芳，趙 娟，覃亦偉，李 輝，陳廣新

(廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院，廣東 廣州 510800)

染色體數(shù)目檢測技術(shù)是目前確認(rèn)早期胚胎停育及自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)因素的主要手段之一。近幾年 FISH檢測分析技術(shù)的臨床應(yīng)用范圍廣泛，是一種快速準(zhǔn)確的生物學(xué)診斷技術(shù)[1]。本次我院為探討分析采用熒光原位雜交技術(shù)即FISH技術(shù)分析孕早期胚胎停育及自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)因素的效果及意義，選取2015-06—2016-06間廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院就診患者100例進行分析，結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

用數(shù)字表法選取2015-06—2016-06間本院就診患者100例，年齡25～36歲，平均年齡(28.4±5.9)歲，其中孕周小于15 周發(fā)生不明原因自然流產(chǎn)的患者病例50例，通過 B 超檢查為胚胎停止發(fā)育的患者50例，孕周7～13周，平均孕周(9.5±3.2)周。所有入選病例均經(jīng)患者本人同意，并自愿簽訂知情同意書。

1.2 方法

FISH技術(shù)試驗過程：首先需要通過冷磷酸鹽緩沖液(PBS) 沖洗處理絨毛組織標(biāo)本，去掉存留的污染母血細胞。使用倒置體視顯微鏡，使用眼科鑷挑選絨毛組織，需要注意的是要盡量避免混入蛻膜組織。根據(jù)標(biāo)本量，使用濃度為0.3 ng/mL的膠原酶 B消化持續(xù)5～10 min，再使用濃度為0.25% 的胰蛋白酶持續(xù)消化10 min。然后，通過離心技術(shù)處理，去掉消化液后，使用濃度為 0.075 mol/L的KCl 低滲處理30 min，按照3∶1的比例液經(jīng)過預(yù)固定、固定后，沉淀在同一載玻片，分別滴取 3 個雜交區(qū)。最后，對處理后的薄片進行熒光原位雜交實驗，觀察在患者的流產(chǎn)組織中是否存在數(shù)目異常的染色體及具體異常情況。

1.3 試驗結(jié)果評價標(biāo)準(zhǔn)[2]

FISH 結(jié)果的判讀依據(jù)為：每組的探針計數(shù)大于或等于100 個細胞，對每種指標(biāo)進行單獨判斷，正常細胞比>90%，則說明該項指標(biāo)正常；若異常細胞比例> 60%，則說明該項指標(biāo)存在異常；如果全部單個指標(biāo)異常細胞的比例均<10%，檢測正常結(jié)果。如果某一項指標(biāo)的異常檢測比在10%～60%，需要增加觀測樣本的細胞數(shù)，如果異常細胞的所占比例低于判斷非嵌合體狀態(tài)的異常標(biāo)準(zhǔn)(60% )，其可能原因為胎兒染色體異常嵌合體、母體細胞污染等，需要進行進一步的遺傳判斷。

1.4 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計分析Fish技術(shù)檢測染色體異常類型檢出率及不同異常類型的檢出情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 異常染色體檢出率

經(jīng)統(tǒng)計，異常染色體異常患者50例，異常檢出率50%，染色體異常情況比例較高。

2.2 不同類型異常染色體檢出情況

異常染色體檢出50例，其中16-三 體和22-三 體異常占比率均較高(圖1、圖2)為32.00%，XXX 、21-三體最低均為2.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，可見染色體數(shù)目異常為導(dǎo)致早產(chǎn)或停育的主要因素。見表1。

表1 不同異常類型的檢出情況

圖1 16-三體

圖2 22-三體

3 討論

環(huán)境因素、內(nèi)分析因素以及遺傳學(xué)因素等都是導(dǎo)致胚胎停育的重要因素，而胚胎停育后大約15%的患者會出現(xiàn)自然流產(chǎn)。目前，從遺傳學(xué)的角度講，染色體的數(shù)目異常是胚胎停育和發(fā)生早期流產(chǎn)的根本因素。而受精卵卵裂時染色體不分離等都是導(dǎo)致胚胎染色體數(shù)目異常的主要因素，而染色體異常又可以主要分為染色體數(shù)目減少或增加一條這兩種情況，即三體性或者單體性情況。而如果胚胎中存在多倍體或單倍體染色體核型，則很可能由于基因劑量效應(yīng)的作用而使胚胎無法繼續(xù)發(fā)育即停育[3]。大量研究結(jié)果顯示，染色體數(shù)目異常胚胎中僅部分 21-三體和性染色體多倍體或單倍體情況的胚胎能夠發(fā)育成熟。即便如此，這些患者大多數(shù)會在生長發(fā)育、智力或者生殖等方面出現(xiàn)嚴(yán)重的缺陷。本次調(diào)查研究結(jié)果顯示：異常染色體檢出率50.00%，其中16-三體異常占比率最高為32.00%，XXX 、21-三體最低均為2.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這一結(jié)果也可充分說明染色體數(shù)目異常為導(dǎo)致早產(chǎn)或停育的主要因素之一。且和鄭雷等[4]探究分析結(jié)果符合，說明經(jīng)FISH技術(shù)診斷染色體異常情況檢出率較高，且提示染色體數(shù)目異常為胚胎停育的主要遺傳學(xué)因素。

FISH 檢測分析技術(shù)應(yīng)用的最大優(yōu)勢為這一技術(shù)不局限于檢測分裂期的細胞，既能夠適用中期染色體，也可適用于檢測間期核及細胞周期的各個階段[5]。由此可見，通過FISH 檢測方法能夠檢測流產(chǎn)組織，并能夠充分發(fā)揮該實驗技術(shù)的檢測優(yōu)勢。另外，這一檢測技術(shù)主要能夠通過熒光信號標(biāo)記染色體，所以通過對熒光信號的判讀便能夠了解待檢標(biāo)本的染色體數(shù)目是否存在異常情況，進而發(fā)現(xiàn)由于染色體數(shù)目異常而導(dǎo)致的流產(chǎn)病因，為孕早期胚胎停育及自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)因素判斷提供可靠依據(jù)[6]。但是與此同時，F(xiàn)ISH檢測技術(shù)也存在一定的局限性，其主要針對22、21、18、16、13和X/Y這6種較為常見染色體的數(shù)目異常情況具有良好的檢測效果，而針對其他染色體的檢測效果不佳，因此在檢測過程中也會有漏診情況的發(fā)生。這也是目前FISH檢測技術(shù)無法完全取代核型分析檢測技術(shù)的重要原因，但是FISH檢測技術(shù)仍可作為早期篩選、診斷的有效手段。

綜上所述，從遺傳學(xué)角度，患者染色體數(shù)目異常是其早期胚胎停育或發(fā)生自然流產(chǎn)的主要因素，而16 號染色體三倍體的改變則是最常見的異常情況。FISH技術(shù)分析方法能夠?qū)υ性缙谕Ｓ呐咛ズ土鳟a(chǎn)組織進行有效的檢測，為該病遺傳學(xué)因素分析提供了可靠依據(jù)。

[1] 崔洪艷，陳敘，岳天孚.FISH 技術(shù)檢測自然流產(chǎn)或死胎死產(chǎn)組織中染色體異常的臨床研究[J].中國婦幼保健，2011，26(33):5220-5221.

[2] 韋紅衛(wèi)，杜娟，夏紅衛(wèi)，等.FISH 技術(shù)在檢測自然流產(chǎn)胚胎染色體異常中的應(yīng)用研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2012，20(8):40-41.

[3] 宋蘭林，熊麗，劉思平，等.FISH 技術(shù)在快速診斷自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常中的應(yīng)用[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，31(9):1605-1607.

[4] 鄭雷，何曉春，李巍，等.FISH 方法進行孕早期胚胎停育及自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)因素分析[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2013，11(29):863-865.

[5] 徐雪琴，李燦錚，林小玲，等.溫州地區(qū)110 例早孕胚胎停育絨毛染色體核型分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2012，20(12):54-55.