明繼陽，李洋，丁彥，王知斌，匡海學(xué),王秋紅

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室，黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.廣東藥科大學(xué)，廣東 廣州 510006)

知母在白虎湯中解熱作用的研究

明繼陽1，李洋1，丁彥1，王知斌1，匡海學(xué)1,王秋紅2*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室，黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.廣東藥科大學(xué)，廣東 廣州 510006)

目的：研究白虎湯中知母的解熱效果。方法：將大鼠隨機分成空白組、模型組、白虎湯組和無知母白虎湯組，采用干酵母、2,4-二硝基酚和細菌內(nèi)毒素大鼠發(fā)熱模型，觀察各組大鼠體溫變化。比較各個模型中白虎湯組和無知母白虎湯組解熱效果。結(jié)果：3個大鼠發(fā)熱模型中白虎湯組與模型組相比均有顯著性差異;白虎湯組與無知母白虎湯組對比有顯著性差異;干酵母和2,4-二硝基酚發(fā)熱模型給藥1 h后有極顯著性差異;細菌內(nèi)毒素?zé)崮Ｐ蛢H在0.5 h有極顯著差異。結(jié)論：白虎湯中知母有解熱作用，配伍知母，在解熱過程中，可以提前起效，增加療效，最后達到良好降溫的效果，尤其對高熱癥解熱效果突出。

知母；白虎湯；大鼠發(fā)熱模型

白虎湯，最早出自張仲景的《傷寒論》，方中石膏一斤，知母六兩，炙甘草二兩，粳米六合。白虎湯重用石膏，其辛甘大寒，清熱不傷陰，又能除煩止渴，是為君藥;知母苦寒質(zhì)潤，既滋陰潤燥，又能助石膏清熱，救已傷之津，是為臣藥;粳米、炙甘草益胃生津，為佐使藥[1-3]。近年來對解熱經(jīng)方白虎湯的研究主要是石膏的解熱作用[1-2]，對白虎湯中知母的解熱作用研究很少，然而根據(jù)中醫(yī)理論的經(jīng)典方解，知母在白虎湯中發(fā)揮著重要輔助清熱作用。因此本次課題選取古代經(jīng)方白虎湯，研究白虎湯中知母的解熱作用，采用干酵母、2,4-二硝基苯酚、細菌內(nèi)毒素三種物質(zhì)誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型，觀察大鼠體溫變化。通過對比白虎湯組與無知母白虎湯組大鼠溫度差異分析知母在白虎湯中的解熱作用[4-6]。

1 材料

1.1 藥品與試劑

1.1.1 藥品

知母產(chǎn)地為河北省，石膏產(chǎn)地為山東省，甘草產(chǎn)地為甘肅省，粳米產(chǎn)地為黑龍江五常市。中藥知母、石膏、甘草均是由齊齊哈爾仙鶴中藥飲片加工廠加工。粳米是由五常市貢米糧食品有限公司生產(chǎn)。

無知母白虎湯制備：取石膏、甘草、粳米，按照16∶2∶3的比例制備。用10倍量的水浸泡4 h。用14倍量的水提取2 h，共提取2次。合并提取液并濃縮，干燥[6-7]。

白虎湯制備：取石膏、甘草、粳米、知母，按照16∶2∶3∶6的比例制備。用10倍量的水浸泡4 h。用14倍量的水提取2 h，共提取2次。合并提取液并濃縮，干燥[6-7]。

1.1.2 試劑

酵母浸粉(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；2,4-二硝基苯酚(臺山市化工有限公司)；細菌內(nèi)毒素(湛江博康海洋生物有限公司)；生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司，注射時要除熱原)；醫(yī)用凡士林(天津市致遠化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 儀器和動物

1.2.1 儀器

小型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理化器械株式會社)；KQ-500DB超聲波清洗劑(昆山市超聲儀器有限公司)；FDU-2000凍干機(東京理化器械株式會社)；送風(fēng)定溫干燥箱(東京理化器械株式會社)；METTLER TOLEDO分析天平(鄭州南北儀器有限公司)；MC-612 瞬間電子體溫計(歐姆龍(大連)有限公司)。

1.2.2 動物

本次實驗選用的實驗動物為SPF級SD成年大鼠，雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g，許可證號SCXK(遼)2015-0001，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。

2 實驗方法

2.1 分組

每個模型取SD大鼠32只，雌雄各半，實驗動物在溫度 (22±2)℃，相對濕度(50±2)% 實驗環(huán)境中適應(yīng)3 d，每隔12 h測一次體質(zhì)量和肛溫，每天測量的時間為8:00和20:00，一共測3天，篩選出體質(zhì)量200～220 g、溫差波動小于0.3℃的大鼠實驗。隨機分成空白組、模型組、白虎湯組和無知母白虎湯組，每組6只。

2.2 給藥

2.2.1 干酵母大鼠發(fā)熱模型

模型組、白虎湯組和無知母白虎湯組大鼠皮下注射20%干酵母混懸液10 ml/kg[6-9]，空白組注射生理鹽水，注射5 h后給藥。按照人與大鼠給藥劑量折算比，得到無知母白虎湯給藥劑量為1.94 g/kg。白虎湯為3.98 g/kg，用生理鹽水配置成懸濁液灌胃給藥，灌胃5 ml，空白組和模型組灌胃生理鹽水。

2.2.2 2,4-二硝基苯酚大鼠發(fā)熱模型

模型組、白虎湯組和無知母白虎湯組大鼠皮下注射2,4-二硝基苯酚溶液10 ml/kg[6-9],空白組注射生理鹽水。注射45 min后灌胃給藥，給藥劑量同干酵母給藥劑量,空白組和模型組灌胃生理鹽水。

2.2.3 細菌內(nèi)毒素大鼠發(fā)熱模型

模型組、白虎湯組和無知母白虎湯組大鼠皮下20%注射內(nèi)毒素溶液10 ml/kg[6-9],空白組注射生理鹽水。注射1.5 h后灌胃給藥，給藥劑量同干酵母給藥劑量,空白組和模型組灌胃生理鹽水。

2.3 體溫指標監(jiān)測

干酵母發(fā)熱模型在給藥前和給藥后0.5 h、1 h、2 h、3 h和4 h后測肛溫[5,9]；2,4-二硝基苯酚發(fā)熱模型在給藥前和給藥后0.5 h、1 h、2 h、3 h和4 h測肛溫，脂多糖發(fā)熱模型在給藥前和給藥后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h和5 h測肛溫，記錄下體溫變化趨勢，進行數(shù)據(jù)分析。

3 實驗結(jié)果

3.1 干酵母發(fā)熱模型各組大鼠體溫變化比較

數(shù)據(jù)結(jié)果如表1所示。給藥時模型組、白虎湯組與無知母白虎湯組升溫均大于0.8℃，具有極顯著差異(P<0.05)。白虎湯組和無知母白虎湯組與模型組進行比較，給藥2 h后無知母白虎湯具有顯著性差異(P<0.05)，給藥0.5 h后白虎湯與模型組具有具有顯著性差異(P<0.05)，1 h開始具有極顯著性差異(P<0.01)。白虎湯組和無知母白虎湯組對比，給藥1 h后具有顯著性差異(P<0.05)，給藥3 h后具有極顯著性差異。

3.2 2,4-二硝基苯酚致熱模型各組大鼠體溫變化

結(jié)果統(tǒng)計，給藥時，模型組、白虎湯組與無知母白虎湯組升溫均大于0.8℃，具有顯著性差異(P<0.05)。白虎湯組和無知母白虎湯組與模型組比較，給藥1 h后具有極顯著性差異(P<0.01)。白虎湯組與無知母白虎湯組比較，給藥后與無知母白虎湯具有顯著性差異(P<0.05)，給藥1h后具有極顯著性差異(P<0.01)。

3.3 細菌內(nèi)毒素致熱大鼠體溫變化比較 對各組大鼠的體溫測定，數(shù)據(jù)結(jié)果如表1～3所示。

表1 干酵母模型大鼠體溫變化比較

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，+P<0.05，++P<0.01；與無知母白虎湯組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

表2 2,4-二硝基苯酚模型大鼠體溫變化比較

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，+P<0.05，++P<0.01；與無知母白虎湯組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

表3 細菌內(nèi)毒素模型大鼠體溫變化比較

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，+P<0.05，++P<0.01；與無知母白虎湯組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

結(jié)果統(tǒng)計，給藥時，模型組、白虎湯組與無知母白虎湯組升溫均大于0.8℃，具有顯著性差異(P<0.05)；白虎湯組和無知母白虎湯組與模型組比較，給藥無知母白虎湯后具有顯著性差異(P<0.05)，2 h后具有極顯著性差異(P<0.01)，給藥白虎湯后具有顯著性差異(P<0.05)，且為極顯著性差異(P<0.01)；白虎湯組與無知母白虎湯組進行比較，給藥0.5～3 h具有顯著性差異(P<0.01)，給藥1 h具有極顯著性差異(P<0.05)。

4 分析與討論

4.1 模型特點分析

2,4-二硝基苯酚、干酵母和細菌內(nèi)毒素三種致熱模型特點不同，干酵母和2,4-二硝基苯酚發(fā)熱模型共同點為發(fā)熱的溫度最高點都較高，屬于高溫發(fā)熱。干酵母發(fā)熱模型特點是起熱用時長，發(fā)熱強度較溫和，發(fā)熱持續(xù)時間長，是一種由注射部位的局部潰爛引發(fā)的劇烈炎癥反應(yīng)導(dǎo)致,動物全身表現(xiàn)與臨床常見明顯炎癥的里熱證類似[10-11]。2,4-二硝基苯酚發(fā)熱模型特點是起熱用時短，發(fā)熱強度高，發(fā)熱持續(xù)時間短，適用作用快速且強大的藥物[12]。細菌內(nèi)毒素大鼠致熱模型其誘導(dǎo)發(fā)熱起效較慢,宜較早給藥, 并伴有寒顫、輕微腹瀉和精神萎靡等癥狀,與臨床感染性炎癥所致發(fā)熱相似, 是經(jīng)典的炎性發(fā)熱模型。

4.2 白虎湯解熱特點

本實驗中白虎湯組有明顯的解熱作用，并且給藥后與模型組一直都有極顯著的差異，但在2,4-二硝基苯酚和干酵母誘發(fā)大鼠發(fā)熱實驗中，解熱強度很大，可以從39.5～40℃左右降至正常溫度，而細菌內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠發(fā)熱實驗一般從39℃左右降至正常溫度。

4.3 知母在白虎湯中解熱效果

4.3.1 各模型中知母在白虎湯中的解熱效果

干酵母誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型中，白虎湯的解熱效果明顯優(yōu)于無知母白虎湯，從起效時間上來看，知母加入白虎湯，可以使解熱效果提前，給藥后就開始起效，提前無知母白虎湯組2 h起效。從解熱的強度上觀察，加入知母，白虎湯藥效從開始就強于無知母白虎湯組，在1 h后療效與無知母白虎湯有極顯著差異。說明知母在提前起效和增強效果方面都作用明顯。

在2,4-二硝基苯酚誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型中，知母的引入使給藥后就開始起效，提前無知母白虎湯組1 h起效，給藥后與無知母白虎湯組比有顯著療效，在1 h后療效有極顯著差異。說明在該模型中白虎湯的解熱效果明顯優(yōu)于無知母白虎湯，知母可以促進白虎湯提前起效并提高療效。

在細菌內(nèi)毒素誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型中，知母引入白虎湯，從起效時間上來看，可以使解熱效果提前，給藥后及時解熱，并且可提前無知母白虎湯組2 h起效。從解熱的強度上觀察，白虎湯藥效從0.5～2 h強于無知母白虎湯組，并且0.5 h具有極顯著的區(qū)別。說明知母在白虎湯中發(fā)揮提前起效和增強效果的作用，且作用明顯。

4.3.2 知母在各模型中解熱效果區(qū)別

白虎湯中配伍知母，可是使其提前發(fā)揮解熱效果，在細菌內(nèi)毒素致熱模型中最為明顯，依次為2,4-二硝基苯酚和干酵母發(fā)熱模型，分別提前0.5 h，1 h，2 h。在解熱過程的強度上，知母的配伍，3個發(fā)熱模型都表現(xiàn)配伍知母給藥后與不配伍比有顯著差異，2,4-二硝基苯酚和干酵母發(fā)熱模型都是在1 h才有極顯著療效，然而細菌內(nèi)毒素模型是開始有極顯著療效，1～2 h就變?yōu)橛酗@著療效。在解熱4 h時，白虎湯都基本將溫度降到正常溫度，此時間點與白虎湯強度對比，效果順序為干酵母，2,4-二硝基苯酚，細菌內(nèi)毒素發(fā)熱實驗。

以上說明，知母能在發(fā)熱初始就開始起效，在大鼠高熱發(fā)熱模型中，解熱效果突出，1 h就發(fā)揮極顯著的療效，能達到理想的降熱效果，這可能與知母在白虎湯中清熱的作用有關(guān)。在大鼠低熱發(fā)熱模型中，也有很好的療效，給藥后就發(fā)揮極顯著療效，后來有顯著療效。而低熱一般為陰虛發(fā)熱，因此知母在此模型中可能發(fā)揮滋陰的作用。

5 結(jié)論

清代柯韻有“知母氣寒主降，苦以泄肺火”之論述，而張錫純論白虎湯用法，曰：“用知母者，取其涼潤滋陰之性”[10-16]，充分說明了知母的清熱滋陰之療效，實驗證明白虎湯對高熱癥狀的解熱效果良好,符合古方中白虎湯主治氣分實熱、臨床癥狀高熱的論斷，科學(xué)的探討了中醫(yī)配伍理論中白虎湯知母配伍意義，為科學(xué)闡述中醫(yī)配伍理論提供依據(jù)。

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Antipyretic Effect of Rhizoma Anemarrhenae of Baihu Decoction

MING Ji-yang1，LI Yang1，DING Yan1，WANG Zhi-bin1，KUANG Hai-xue1,WANG Qiu-hong2*

(1.Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Effective Substance Basis of Traditional Chinese Medicine andNatural Medicine，Key Laboratory of Basis and Application Research of North Medicine，Ministry of Education，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;2.Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)

Objective: To study the antipyretic effect of Baihu decoction of Rhizoma anemarrhenae. Methods: The rats were divided into blank group, model group, Baihu decoction group and Baihu decoction without Anemarrhena group. Observe the temperature changes, using dry yeast, 2,4- dinitrophenol and bacterial endotoxin fever model in rats. The antipyretic effect of each group was compared with that of Baihu decoction group with Anemarrhena and that of Baihu decoction group without Anemarrhena.Results: Compared with the model group, there were significant differences among three models of fever rats. The Baihu decoction group had a significant difference compared with Baihu decoction without Anemarrhena group, dry yeast and 2,4- dinitrophenol fever model after administration of 1 h with a significant difference,and the bacterial endotoxin hot model only had a significant difference in 0.5 h. Conclusion: The Baihu decoction has an antipyretic effect, and the compatibility of Anemarrhena, in the process of antipyretic, can have an effect in advance, increase the curative effect and finally achieve a good cooling effect,and it has an especially outstanding antipyretic effect on high fever.

Rhizoma Anemarrhena; Baihu decoction; Rat fever models

國家自然科學(xué)基金面上項目(No.81274103)

明繼陽(1982-)，女，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2014年級中藥化學(xué)專業(yè)博士研究生，主要從事中藥化學(xué)專業(yè)復(fù)方方向研究工作。

王秋紅*(1969-)，女,教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制研究，中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究和新藥開發(fā)工作。

2016-11-15

R285.5

A

1002-2406(2017)03-0047-04

修回日期：2016-11-27