胡倩倩　嚴(yán)浩　李盛

[摘要]目的：探討卵巢高分化黏液性癌（highly differentiated Ovarian mucinous carcinoma，HDOMC）患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表達(dá)水平及意義。方法：采用免疫組化法對40例正常卵巢組織、43例卵巢黏液性腫瘤（Ovarian mucinous tumor，OMT）、80例HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，并分析HDOMC患者中S100A14表達(dá)與MMP-2、MMP-9表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢組織、OMT、HDOMC患者中的表達(dá)水平呈遞增趨勢，且兩兩組間比較差異顯著（P<0.05）。Spearman相關(guān)分析：HDOMC患者中S100A14表達(dá)與MMP-2、MMP-9表達(dá)水平兩兩呈正相關(guān)（P<0.05）。MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平與HDOMC患者手術(shù)-病理分期（FIGO）、CA-125水平有關(guān)（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論：MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平升高與HDOMC發(fā)生、進(jìn)展、早期轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性，早期聯(lián)合篩查這些指標(biāo)對HDOMC病情演變及治療預(yù)后評估具有重要價值。

[關(guān)鍵詞]黏液性癌；表達(dá)水平；聯(lián)合篩查；病理分期；相關(guān)性

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是近年來臨床最常見的一種女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿，在疾病早期可無明顯癥狀，70%～80%患者發(fā)現(xiàn)時即己為晚期，死亡率極高。因此，近年來，臨床一直在尋找對早期卵巢癌監(jiān)測對其侵襲、轉(zhuǎn)移具有重要預(yù)測價值的標(biāo)志物。大量研究發(fā)現(xiàn)，MMPs在多種腫瘤組織中表達(dá)水平升高且與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性。MMP2、MMPO是目前臨床研究發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系最為密切的一組MMP成員；通過降低細(xì)胞外基質(zhì)水平促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。已有研究表明S100A14基因水平在多種腫瘤患者中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，S100A14以p53依賴方式對腫瘤患者M(jìn)MP-2表達(dá)水平進(jìn)行上調(diào)，促進(jìn)細(xì)胞侵襲，導(dǎo)致惡性腫瘤預(yù)后不良。本研究通過免疫組化法，探討MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表達(dá)水平及其監(jiān)測意義?，F(xiàn)報道如下。

1.資料和方法

1.1臨床資料

隨機(jī)選擇我院2010年7月至2014年8月收治的80例HDOMC患者，均經(jīng)手術(shù)切除病理證實(shí)為HDOMC。納入標(biāo)準(zhǔn)：病理類型為高分化黏液性癌；KPS評分>90分，預(yù)計生存時間>3個月；年齡25～76歲。入選患者平均（49.5±8.7）歲，F(xiàn)IGO分期：早期（Ⅰ～Ⅱ期）27例、晚期（Ⅲ～Ⅳ期）53例，術(shù)前均未采用過放化療治療，并排除合并其他惡性腫瘤者。選取同期40例因子宮肌瘤行子宮及附件全切的正常卵巢組織患者，43例OMT患者作為對照研究，年齡24-73歲，平均（47.8±8.6）歲。

1.2方法

S100A14兔多克隆抗體，MMP-2、MMP-9單抗以及sP試劑盒均由中杉金橋公司提供，批號分別為20141102、20150301、20150403、201/1204，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行染色，石蠟切片經(jīng)脫蠟、酒精水化、微波爐抗原熱修復(fù)。后經(jīng)DAB染色、蘇木精復(fù)染，最后采用中性樹膠進(jìn)行封閉。以實(shí)驗(yàn)前期檢查S100A14為陽性的HDOMC組織作陽性對照，以PBS代一抗作陰性對照。S100A14、MMP-2、MMP-9陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：顯微鏡下染色強(qiáng)度為胞漿和胞膜呈淺黃色至棕黃色，且典型分布于膜部分，排除完全脫片的無效標(biāo)本，所有切片均通過Apefio病理掃描，用Apefio Image Scope軟件分析蛋白表達(dá)量。每張切片隨取6～10個部位用于S100A14、MMP-2、MMP-9表達(dá)水平的檢測分析。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，組間采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料以n（%）表示，采用x2檢驗(yàn)；采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)，P<0.05則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1不同標(biāo)本組織MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平差異

MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢組織、OMT、HDOMC患者中的表達(dá)水平呈遞增趨勢，且兩兩組間比較差異顯著（P<0.05）。見表1。

2.2MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表達(dá)情況

MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平與HDOMC患者手術(shù)-病理分期（FIGO）、CA-125水平有關(guān)（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。見表2。

2.3HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析：HDOMC患者中S100A14表達(dá)與MMP-2、MMP-9表達(dá)水平兩兩呈正相關(guān)（r=0.773，P<0.05；r=0.653，P<0.05）。

3.討論

卵巢癌己成為近年來嚴(yán)重危害女性身心健康的殺手之一，其死亡率居于婦科惡性疾病之首，據(jù)調(diào)查統(tǒng)計，其5年存活率僅25%～30%。因此，臨床一直致力于尋求一種能夠靈敏地反映卵巢癌早期病變、演變的實(shí)驗(yàn)室客觀指標(biāo)，對早期癌變篩查、延長病人生命具有重要價值。本實(shí)驗(yàn)通過檢測MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC組織中表達(dá)，以探討這些指標(biāo)是否可作為HDOMC疾病篩查、演變以及預(yù)后地評估指標(biāo)。

侵襲、轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤治療失敗以及后期死亡的主要原因，多基因參與其中，是一個復(fù)雜的病理過程。有報道稱S100A14蛋白與腫瘤密切相關(guān)。己有研究證實(shí)，S100A14基因在多種腫瘤細(xì)胞的RNA上高表達(dá)，在乳腺、卵巢、宮頸以及子宮內(nèi)膜等婦科癌癥中表達(dá)水平上調(diào)，在結(jié)直腸癌、細(xì)胞癌中表達(dá)水平下調(diào)。目前臨床對于S100A14在HDOMC中的研究資料尚少。浸潤是個主動過程，細(xì)胞浸潤關(guān)鍵在于可水解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分及穿越基底膜。婦產(chǎn)科領(lǐng)域腫瘤疾病均發(fā)現(xiàn)MMPs異常表達(dá)，并且其水平高低和癌腫分期、預(yù)后存在密切相關(guān)性，可作為早期癌癥診斷的重要監(jiān)測指標(biāo)。MMP-2是MMPs家族成員之一，它通過降解ECM和穿越基底膜，破壞局部組織結(jié)構(gòu)，有利于癌細(xì)胞侵襲；MMP-2不但對基底膜糖蛋白、ECM成分起到降解作用，且對腫瘤新生血管的生產(chǎn)也具有重要促進(jìn)作用，為新生血管開辟道路。MMP-9是MMPs家族中分子量最大酶，主要降解破壞ECM成分中的Ⅳ、Ⅴ型膠原以及明膠。本研究結(jié)果顯示，MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC組織中表達(dá)明顯高于OMT及正常卵巢組織；MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平與HDOMC患者手術(shù)病理分期（FI-GO）、CA-125水平有關(guān)（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。這可能與樣本量少等主觀因素有關(guān)。由此推測，MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平可作為HDOMC的有效篩查指標(biāo)。

聯(lián)合多個基因，探討腫瘤發(fā)病機(jī)制和尋求靈敏度較高的腫瘤早期篩查指標(biāo)是當(dāng)前臨床研究的焦點(diǎn)、熱點(diǎn)。本研究在上述基礎(chǔ)上繼續(xù)探討MMP-2、MMP-9、S100A14之間的相關(guān)性，以揭示其在HDOMC疾病中的意義。Spearman相關(guān)分析顯示，HDOMC患者中S100A14表達(dá)與MMP-2、MMP-9表達(dá)水平兩兩呈正相關(guān)（P<0.05）。有研究證明，S100A14可激活乳腺癌中的信號通路，下調(diào)野生型p53基因，從而上調(diào)MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)，促進(jìn)癌細(xì)胞發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移。但其在OC中細(xì)胞信號機(jī)制，尚待進(jìn)一步研究。由實(shí)驗(yàn)推測，S100A14與MMP-2、MMP-9之間具有協(xié)同作用，S100A14可能通過上調(diào)MMP-2、MMP-9表達(dá)，促使癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)為遏制OC侵襲性生長提供了新的可能，以期改善病人預(yù)后。

綜上所述，MMP-2、MMP-9、S100A14表達(dá)水平升高與HDOMC發(fā)生、進(jìn)展、早期轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性，早期聯(lián)合篩查這些指標(biāo)對HDOMC病情演變及治療預(yù)后評估具有重要價值。