林海青

[摘 要]目的：當(dāng)歸與川芎中阿魏酸含量測(cè)定所用色譜條件的整合及成本節(jié)約。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱Diamonsil C18 （250×4.6 mm，5 μm）：流動(dòng)相為甲醇-水（33：67）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)321 nm，測(cè)定當(dāng)歸中阿魏酸的含量。結(jié)果：確定可以用甲醇替代乙腈來(lái)測(cè)定當(dāng)歸中的阿魏酸含量，使檢驗(yàn)結(jié)果不受影響的前提下節(jié)約檢驗(yàn)成本，提高工作效率。結(jié)論：用甲醇代替乙腈檢驗(yàn)當(dāng)歸中阿魏酸的含量是可行的，可以節(jié)約檢驗(yàn)成本及檢驗(yàn)時(shí)間。

[關(guān)鍵詞]當(dāng)歸；阿魏酸；高效液相色譜法

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）29-0131-01

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)利用高效液相色譜法在川芎的色譜條件下測(cè)定當(dāng)歸中阿魏酸的含量，把當(dāng)歸流動(dòng)相中的有機(jī)相乙腈變換為價(jià)格相對(duì)便宜的甲醇，從而節(jié)約了檢驗(yàn)成本，并可以使川芎與當(dāng)歸同時(shí)檢驗(yàn)，節(jié)約時(shí)間和流動(dòng)相成本。

1 儀器與試藥

粉碎機(jī)（浙江瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；超聲波清洗儀（KQ-300B，昆山市超聲儀器有限公司，功率250W，頻率33kHz）；Agilent-1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫有限責(zé)任公司），等。

當(dāng)歸藥材取自本公司原料倉(cāng)庫(kù)；

阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：110733-200611）；由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純（河北四友卓越科技有限公司401792）；其余試劑為分析純，水為純凈水。

2 對(duì)照品及供試品的制備

2.1 對(duì)照品的制備

精確稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品適量，分別用70%甲醇溶解，制成每1mL含阿魏酸12.0μg的溶液。

2.2 供試品的制備

取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上層清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsilC18（250×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（33：67）；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)321nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：5μL。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000。

3.2 線性關(guān)系考察

精確量取對(duì)照品溶液1mL，共四份，用70%甲醇分別稀釋一定倍數(shù)，制成一系列不同濃度的對(duì)照溶液（6.45μg·min-1，12.90μg·min-1，21.50μg·min-1，28.67μg·min-1，35.84μg·min-1）依次注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，每份進(jìn)針3次，取平均值。以溶液濃度與峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。阿魏酸線性方程與相關(guān)系數(shù)分別為：Y=267306X-58832，R2=0.9996。結(jié)果表明阿魏酸在6.45ug·min-1～35.84ug·min-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

3.3 精密度試驗(yàn)

吸取同一濃度的阿魏酸溶液（12.90ug·min-1），在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，RSD值為0.48%，精密度良好。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品溶液，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD值為0.52%。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在上述色譜條件下，分別在2、4、8、16、24h測(cè)定，記錄峰面積，每份進(jìn)針3次，取平均值，計(jì)算RSD為0.37%。

3.6 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的當(dāng)歸0.1g三份，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按照上述提取方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣，計(jì)算回收率。

3.7 測(cè)定結(jié)果

取上述供試品溶液及阿魏酸對(duì)照品溶液，注入高效色譜儀，典型HPLC圖見(jiàn)附圖1-圖2，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

4 不同HPLC色譜條件測(cè)定結(jié)果比較

取上述供試品溶液，按藥典[1]色譜條件進(jìn)高效液相，HPLC圖見(jiàn)附圖3-圖4。

5 方法驗(yàn)證

取三個(gè)批號(hào)的當(dāng)歸藥材分別在3.1項(xiàng)下及藥典項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)HPLC，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

6 討論

本試驗(yàn)嘗試過(guò)完全利用川芎流動(dòng)相比例（甲醇-1%醋酸溶液=30：70）測(cè)定當(dāng)歸中阿魏酸含量，進(jìn)行高效液相測(cè)定，但相比甲醇比例33%，阿魏酸保留時(shí)間較長(zhǎng)（約33min），不利于高效率的檢驗(yàn)；因此提高甲醇比例為33%，縮短保留時(shí)間，同時(shí)柱效基本不受影響。但是如果當(dāng)歸與川芎同時(shí)取樣檢驗(yàn)，也可以利用川芎流動(dòng)相進(jìn)行統(tǒng)一檢驗(yàn)，既便于綜合評(píng)價(jià)，又相對(duì)縮短工作時(shí)間，提高工作效率，并降低檢驗(yàn)成本。

從附圖1-圖4可以看出，相對(duì)于藥典方法，本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，同樣能夠達(dá)到較好的分離效果，只是存在分析保留時(shí)間偏長(zhǎng)的問(wèn)題，有待于進(jìn)一步的試驗(yàn)探索。另外，本實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證僅采用了三個(gè)批次的當(dāng)歸，批次數(shù)目有限，還需要大量的驗(yàn)證工作。

本試驗(yàn)創(chuàng)新點(diǎn)在于流動(dòng)相采用價(jià)格低廉的甲醇代替了價(jià)格較貴的乙腈，比較2010年版《中國(guó)藥典》方法經(jīng)濟(jì)，實(shí)惠，并在必要時(shí)可以同時(shí)測(cè)定川芎和當(dāng)歸中阿魏酸的含量，利于質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：141.