李杰寶，喻曉程，田野

（湖北省武漢市第一醫(yī)院，湖北 武漢 430000）

果蠅EZH2與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的關(guān)系*

李杰寶，喻曉程，田野

（湖北省武漢市第一醫(yī)院，湖北 武漢 430000）

目的探討果蠅Zeste基因增強(qiáng)子人類同源物2（EZH2）與乳腺癌分子分型及臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 根據(jù)新型乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn)，將乳腺癌進(jìn)行分子分型；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)乳腺癌組織石蠟切片中EZH2的表達(dá)；采用χ2檢驗(yàn)分析EZH2表達(dá)與乳腺癌新型分子分型，以及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；采用Kaplan-Meier法分析EZH2表達(dá)與乳腺癌患者無(wú)病生存率（DFS）的關(guān)系。結(jié)果 13例管腔上皮A型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達(dá)（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例為EZH2高表達(dá)（50.00%）；7例人表皮生長(zhǎng)因子受體2過(guò)表達(dá)型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達(dá)（42.86%）；12例三陰性型乳腺癌患者中，10例為EZH2高表達(dá)（83.33%）。乳腺癌各分子亞型間EZH2表達(dá)的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EZH2高表達(dá)與EZH2低表達(dá)患者DFS比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 EZH2可能是預(yù)測(cè)乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)之一。

果蠅Zeste基因增強(qiáng)子人類同源物2；乳腺癌；分子分型；免疫組織化學(xué)

乳腺癌是女性高發(fā)的惡性腫瘤之一，其具有高度異質(zhì)性且近年來(lái)的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢(shì)，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[1]。新型乳腺癌分子分型根據(jù)乳腺癌患者腫瘤組織中的雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）和Ki67的表達(dá)差異，將乳腺癌分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過(guò)表達(dá)型和三陰性型[2-3]。果蠅Zeste基因增強(qiáng)子人類同源物 2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）是果蠅Enhancer of zeste基因的人類同源基因，作為多梳基因（polycoml group genes，PcG）家族的重要成員之一，其參與細(xì)胞分化，并與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4-5]。本研究根據(jù)新型乳腺癌分子分型將42例患者分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過(guò)表達(dá)型和三陰性型，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各分型乳腺癌組織石蠟切片中EZH2的表達(dá)，以探討EZH2與乳腺癌分子分型及臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 乳腺癌石蠟標(biāo)本收集

選取2004年5月-2008年10月在華中科技大學(xué)附屬醫(yī)院確診為乳腺癌并行手術(shù)治療的女性乳腺癌患者42例，其臨床、病理和隨訪資料完整，切除的乳腺癌石蠟標(biāo)本保存完好。實(shí)驗(yàn)所需兔抗人EZH2多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)GeneTex公司，鼠抗人Ki67單克隆抗體（即用型）、抗體稀釋液和生物素標(biāo)記二抗購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫組織化學(xué)法

將每例患者手術(shù)切除的乳腺癌組織石蠟樣本分別連續(xù)切片5張，其中1張進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅染色法染色，觀察乳腺癌的形態(tài)學(xué)；2張用于免疫組織化學(xué)法染色，觀察EZH2在乳腺癌組織、細(xì)胞中的表達(dá)情況；另2張備用。

1.3 免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果判斷

EZH2的免疫組織化學(xué)法結(jié)果主要為核染色，分別由2名不知道切片病理診斷結(jié)果的觀察者判斷切片的EZH2染色情況，無(wú)細(xì)胞核染色計(jì)1分，細(xì)胞核染色＜25%計(jì)2分，細(xì)胞核染色在25%～75%計(jì)3分，細(xì)胞核染色＞75%計(jì)4分[6]。3～4分為EZH2高表達(dá)，1～2分為EZH2低表達(dá)。

Ki67的免疫組織化學(xué)法結(jié)果為細(xì)胞核呈棕褐色著色。分別由2位不知道切片病理診斷結(jié)果的觀察者判斷切片的Ki67染色情況。隨機(jī)選取高倍鏡下10個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)的百分比，最后取10個(gè)高倍鏡視野百分?jǐn)?shù)的平均值。

新型乳腺癌分子分型：ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67＜14%為管腔上皮A型；ER+和/或PR+，Her-2+ 或ER+和/或PR+，Her-2-，Ki67≥14%為管腔上皮B型；ER-，PR-，Her-2+為Her-2過(guò)表達(dá)型；ER-，PR-，Her-2-為三陰性型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)；兩組生存率的比較采用Log-rank χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果

42例乳腺癌患者中，13例為管腔上皮A型（30.95%）；10例為管腔上皮B型（23.81%）；7例為Her-2過(guò)表達(dá)型（16.67%）；12例為三陰性型（28.57%）。在42例乳腺癌患者中，21例為EZH2高表達(dá)（50.00%）。

2.2 EZH2表達(dá)與乳腺癌分子分型的關(guān)系

13例管腔上皮 A型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達(dá)（23.08%）；10例管腔上皮B型乳腺癌患者中，5例為EZH2高表達(dá)（50.00%）；7例Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌患者中，3例為EZH2高表達(dá)（42.86%）；12例三陰性型乳腺癌患者中，10例為EZH2高表達(dá)（83.33%）。乳腺癌各分子亞型間EZH2的表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.240，P=0.020）。

2.3 EZH2表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

EZH2表達(dá)在患者年齡及患者絕經(jīng)狀態(tài)之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；EZH2表達(dá)的高低在腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及術(shù)后分期之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與EZH2低表達(dá)的乳腺癌患者比較，EZH2高表達(dá)的乳腺癌患者腫瘤生長(zhǎng)速度較快、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率較大、術(shù)后分期較晚。見(jiàn)附表。

2.4 EZH2表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系

42例乳腺癌患者隨訪＞5年，21例EZH2高表達(dá)的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；21例EZH2低表達(dá)的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。采用Kaplan-Meier法對(duì)42例乳腺癌患者進(jìn)行生存分析，對(duì)EZH2高表達(dá)和EZH2低表達(dá)患者的無(wú)病生存率（disease free survival，DFS）進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.041，P=0.008）。見(jiàn)附圖。

附表 乳腺癌患者臨床病理特征與EZH2高表達(dá)的關(guān)系例（%）

附圖 不同EZH2表達(dá)水平乳腺癌患者的DFS生存曲線

3 討論

乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤，具有高度異質(zhì)性以及較高的發(fā)生率，且其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，已成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[7]。GOLDHIRSCH等[3]確立新型的乳腺癌分子分型，根據(jù)乳腺癌患者腫瘤組織中的ER、PR、HER-2和Ki67的表達(dá)差異，將乳腺癌分為管腔上皮A型、管腔上皮B型、Her-2過(guò)表達(dá)型和三陰性型。劉佳等[8]通過(guò)檢測(cè)80例乳腺癌組織中ER、PR、HER-2、CK5/6、CK14、EGFR以及EZH2蛋白的表達(dá)，將乳腺癌分為腔型、HER-2（+）型、基底細(xì)胞樣型和正常乳腺樣型，其所占比例分別為61.25%、10.00%、25.00% 和3.75%，其中管腔上皮型在各分子亞型中的比例最高。WIECHMANN等[9]的研究中，管腔上皮型在乳腺癌各分子亞型中所占的比例最高且預(yù)后相對(duì)較好。本研究根據(jù)ST.Gallen的新型乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn)，將42例乳腺癌患者分為管腔上皮A型（30.95%）、管腔上皮B型（23.81%）、Her-2過(guò)表達(dá)型（16.67%）和三陰性型（28.57%）。其中由A型和B型組成的管腔上皮型所占比例最高，為53.76%，該結(jié)果與其他研究一致。

EZH2是果蠅Enhancer of zeste基因的人類同源基因，作為PcG基因家族的重要成員之一，其參與細(xì)胞分化，并與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。EZH2是一種轉(zhuǎn)錄阻遏因子，其高表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，與腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10]。RAAPHORST等[11]研究EZH2基因在正常乳腺組織、癌前病變?nèi)橄俳M織及浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示EZH2在正常乳腺組織中無(wú)表達(dá)，而在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌前病變?nèi)橄俳M織。姚凡等[12]通過(guò)對(duì)105例乳腺癌患者腫瘤組織的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其中69.50%乳腺癌組織中出現(xiàn)EZH2陽(yáng)性表達(dá)，且EZH2表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、術(shù)后分期、PR表達(dá)及c-erbB-2表達(dá)等無(wú)相關(guān)性。徐靜等[13]對(duì)82例乳腺癌患者的研究表明，出現(xiàn)EZH2陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌患者高達(dá)51.20%，EZH2陽(yáng)性表達(dá)患者的組織分化較差、腫瘤直徑較大且更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究旨在探討EZH2表達(dá)高低與乳腺癌分子分型及臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果表明在12例三陰性型患者中，EZH2高表達(dá)者 10例（83.33%），腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及不同術(shù)后分期EZH2高表達(dá)例數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示EZH2表達(dá)可能與乳腺癌的病情程度相關(guān)，病情越嚴(yán)重，EZH2高表達(dá)的可能性越大。且EZH2高表達(dá)的乳腺癌患者腫瘤生長(zhǎng)速度較快、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率較大、術(shù)后分期較晚，表明EZH2高表達(dá)可能會(huì)加快患者的病情發(fā)展，與其他研究結(jié)果一致。

已有研究表明，EZH2高表達(dá)患者比低表達(dá)患者的無(wú)病生存率更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，EZH2高表達(dá)患者比低表達(dá)患者的預(yù)后更差，其發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的概率更高[14]。本研究對(duì)42例乳腺癌患者隨訪≥5年，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，21例EZH2高表達(dá)的乳腺癌患者中，有6例死亡，2例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；21例EZH2低表達(dá)的乳腺癌患者中，有2例死亡，1例發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。表明EZH2高表達(dá)患者比低表達(dá)患者更易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，其與之前的研究報(bào)道一致。

綜上所述，EZH2高表達(dá)多發(fā)生在病情更為嚴(yán)重的三陰性型乳腺癌患者中，EZH2表達(dá)的高低在腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及術(shù)后分期之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且EZH2高表達(dá)的乳腺癌患者往往預(yù)后不良，總生存率較低。因此，EZH2可能是預(yù)測(cè)乳腺癌病情以及乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)之一。

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（李科編輯）

Correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2 with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer*

Jie-bao Li,Xiao-cheng Yu,Ye Tian
(The First Hospital of Wuhan,Wuhan,Hubei 430000,China)

ObjectiveTo investigate the correlations of enhancer ofDrosophilazeste homolog 2(EZH2) with molecular subtypes and clinicopathological parameters of breast cancer.Methods The breast cancers were classified into several molecular subtypes,according to the new standard of molecular classification of breast cancer.The expression ofEZH2 in paraffin sections ofbreastcancer tissues was tested through immunohistochemistry method.The correlations of EZH2 with clinicopathological parameters and new molecular subtypes of breast cancers were analyzed and compared through Chi-square test.The correlation between EZH2 and disease-free survival of the breast cancer patients was analyzed through Kaplan-Meier method. Results In the 13 cases of Luminal A subtype,3 cases had high EZH2 expression(23.08%).In the 10 cases of Luminal B subtype,5 cases had high EZH2 expression(50.00%).In the 7 cases of Her-2 over-expression subtype,there were 3 cases of high EZH2 expression(42.86%).In the 12 cases of triple-negative breast cancer subtype,there were 10 cases of high EZH2 expression (83.33%).Significant differences existed in the expression of EZH2 among the four groups of molecular subtypes of breast cancer(P＜0.05).There was significantdifferencein the disease-freesurvivalbetween the breastcancerpatientswith high EZH2 expression and those with low EZH2 expression(P＜0.05).Conclusions EZH2 might be one of the indexes to predict the prognosis of breast cancer.

enhancer of Drosophila zeste homolog 2;breast cancer;molecular subtype;immunohistochemistry

R737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.06.010

1005-8982（2017）06-0050-04

2016-08-09

湖北省2015年武漢市衛(wèi)計(jì)委臨床醫(yī)學(xué)課題（No：WX15B17）