王淑社

(清豐縣農(nóng)業(yè)畜牧局,河南清豐 457300)

豬鏈球菌病病原分離鑒定及防治

王淑社

(清豐縣農(nóng)業(yè)畜牧局,河南清豐 457300)

從20份疑似豬敗血型鏈球菌病和神經(jīng)型鏈球病的病料中分離到12株細菌,通過培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、染色特性、生化試驗及血清學試驗確定為C群獸醫(yī)鏈球菌7株,D群豬鏈球菌5株。藥敏試驗證明分離菌對先鋒霉素V、阿米卡星敏感,經(jīng)臨床應用效果良好。用分離菌株研制成二價氫氧化鋁膠滅活苗能有效地預防豬鏈球菌病,臨床應用免疫保護率可達90%以上。

豬鏈球菌病;分離;鑒定;藥敏試驗;氫氧化鋁膠滅活苗

豬鏈球菌?。⊿wine streptococcsis）是由多種鏈球菌感染引起的不同臨床癥狀的疾病，常見的有敗血癥型、腦膜炎型、化膿性淋巴結(jié)炎型、關(guān)節(jié)炎型。鏈球菌的抗原構(gòu)造比較復雜，有核蛋白抗原（P抗原），無群型的特異性；群特異性抗原（C抗原），具有群特異性；型特異性抗原，又稱表面抗原，具有型特異性。根據(jù)C抗原不同，用蘭氏（Lance field）血清學分類，可將鏈球菌分成A、B、C、D、E、F、G等19個血清群。引起豬鏈球菌病的病原多為C群的獸醫(yī)鏈球菌（S zooepidemicus）和類馬鏈球菌（S equisimilis），D群的豬鏈球菌（S suis），以及E、L、S、R等群。該病分布廣泛。除英、美、法、日外，俄羅斯、印度、丹麥等22個國家均有該病的報道。我國最早由吳碩顯在上海郊區(qū)發(fā)現(xiàn)該病的散發(fā)病例，1963年廣西部分地區(qū)開始流行，繼之蔓延廣東、四川、福建等我國大部分省市，流行范圍大，而且發(fā)病場發(fā)病率較高，特別是急性敗血型和腦膜炎型鏈球菌病，其病死率較高，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大損失。2005年筆者對懷疑發(fā)生急性敗血癥型和腦膜炎型鏈球菌的病豬采集病料，進行病原分離鑒定和防治試驗。

1 材料與方法

（1）病料：對于懷疑患敗血型鏈球菌的病豬，無菌采取心血、脾、肝；對于懷疑患腦膜炎型病豬，則以無菌操作采取腦脊髓液、腦組織。

（2）培養(yǎng)基：硫乙醇鹽肉湯、鮮血瓊脂平板、血清肉湯、各種生化培養(yǎng)基均為自制。

（3）藥敏紙片：抗菌藥物藥敏紙片購自北京天壇生物技術(shù)開發(fā)公司，-20℃保存。

（4）病原的分離培養(yǎng)：對于懷疑為敗血型鏈球菌的病豬，無菌采集心血，用硫乙醇鹽肉湯培養(yǎng)24h后，再接種于血液瓊脂平板；對于懷疑為腦膜炎型鏈球菌的病豬，用接種環(huán)鉤取腦脊髓液，直接畫線接種于血液瓊脂平板上進行分離培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征，并挑取可疑菌落進行涂片染色鏡檢、純培養(yǎng)及生化特性檢查。

（5）生化試驗：將待檢菌株分別接種于6.5%NaCl肉湯、pH9.6肉湯、0.1%美蘭牛乳、馬尿酸鈉等培養(yǎng)基做生長基水解試驗；接種于蔗糖、葡萄糖、乳糖、棉子糖、水揚苷、菊糖、蕈糖、山犁醇等發(fā)酵培養(yǎng)基做糖發(fā)酵試驗。

（6）菌株分群：采用進口蘭氏分群試劑盒。

（7）藥敏試驗：將分離菌株均勻涂布于鮮血瓊脂平板，貼上阿米卡星、卡那霉素V、慶大霉素、硫酸新霉素、先鋒霉素、環(huán)丙殺星、氟哌酸、卡那霉素、青霉素、四環(huán)素9種藥敏紙片，37℃培養(yǎng)24h，并用敏感藥物對發(fā)病豬進行治療。

（8）動物感染試驗：將分離菌株24 h鮮血瓊脂平板培養(yǎng)物用生理鹽水適當稀釋，配成懸濁液，腹腔注射5只健康小白鼠，接種量為0.2ml/只；另設健康小白鼠5只，注射同劑量的生理鹽水作對照。

（9）二價鋁膠滅活苗研制：將C群和D群菌株分別在血清肉湯中增菌培養(yǎng)，調(diào)整菌體濃度為30億/ml，經(jīng)甲醛滅活后加入20%氫氧化鋁膠，搖勻，并按常規(guī)方法進行無菌檢驗、安全檢驗和效力檢驗，合格后進行預防試驗。每頭豬無論大小均免疫2次，間隔15d，第1次5ml/頭，第2次10ml/頭。

2 結(jié)果與分析

（1）病料中鏈球菌的分離結(jié)果 從20份懷疑患敗血型鏈球菌病和神經(jīng)型鏈球菌病的病料中分離到12株細菌，分離率60%。分離菌在鮮血瓊脂上生長出濕潤、光滑、圓形的灰白色菌落，呈β溶血。經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，分離菌是陽性球菌，呈鏈狀排列。

（2）藥敏試驗結(jié)果 在9種抗生素中，抑菌作用最強的是阿米卡星和先鋒霉素V，其次為硫酸新霉素、慶大霉素、卡那霉素、氟哌酸，對青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙殺星不敏感。對50kg左右的發(fā)病豬，使用先鋒霉素V2瓶（即1g），肌肉注射，2次/d，連用3d，病豬痊愈。

（3）小白鼠感染試驗 小白鼠感染后6h開始死亡，12h后全部死亡。死后可見肝、脾、腎腫大，膀胱高度充血，胸腔積液，用心血及胸腔積液涂片，革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有大量單個、成對或短鏈的革蘭氏陽性球菌，對照組小鼠未見異常。

（4）二價鋁膠滅活苗的研制 研制的二價鋁膠滅活苗，按常規(guī)方法進行無菌檢驗、安全檢驗和效力檢驗均合格。經(jīng)臨床應用，免疫保護率可達90%以上。

3 小結(jié)與討論

（1）從懷疑患敗血型鏈球菌病和神經(jīng)型鏈球菌病的20份病料中分離到12株鏈球菌。經(jīng)生化試驗和蘭氏分群試劑盒分群，C群獸醫(yī)鏈球菌7株，D群豬鏈球菌5株。

（2）用市售鏈球菌疫苗免疫豬群常出現(xiàn)免疫失敗，爆發(fā)鏈球菌病。其主要原因是市售鏈球菌疫苗只含C群抗原，而敗血型鏈球菌病和腦炎型鏈球菌病是由C型獸醫(yī)鏈球菌和D群豬鏈球菌引起。筆者用本地分離的C群獸醫(yī)鏈球菌和D群豬鏈球菌研制成二價氫氧化鋁膠滅活苗，經(jīng)臨床試用預防效果良好。

（3）目前豬鏈球菌對常用抗生素產(chǎn)生了嚴重的耐藥性，而對一些新藥和以前未大量使用的藥物如先鋒霉素和阿米卡星則非常敏感，所以經(jīng)臨床應用取得了滿意的治療效果。

[1]白文彬，于康震.動物傳染病診斷學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：516-523.