李傳利，王延群，郭淼

(1.淄博礦業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東淄博 255120；2.濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科，濟(jì)南 250000；3.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧錦州 121001)

嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-1、類風(fēng)濕因子和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度的相關(guān)性分析

李傳利1，王延群2，郭淼3

(1.淄博礦業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東淄博 255120；2.濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科，濟(jì)南 250000；3.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧錦州 121001)

目的 研究嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-1(Eotaxin-1)、類風(fēng)濕因子(RF)和抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度的相關(guān)性。方法 將淄博礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院2014年12月至2015年12月就診的早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者58名，同時(shí)期非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者46名，健康人對(duì)照者53名納入本研究。收集其腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)和DAS28評(píng)分評(píng)價(jià)RA的活動(dòng)度。免疫透射比濁法檢測(cè)其血清RF水平，ELISA檢測(cè)Eotaxin-1和抗CCP抗體的水平，不同組間因子水平的比較采用方差分析，其水平與臨床評(píng)分的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。結(jié)果 RA組Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體的水平分別為(96.02±21.07) pg/mL、(183.42±87.45) U/mL、(119.09±62.30) RU/mL，較非RA組和健康人對(duì)照組均高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。RA患者血清Eotaxin-1水平與其腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)和DAS28評(píng)分有顯著相關(guān)性(P<0.01)；抗CCP抗體的水平與其壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)和DAS28評(píng)分有相關(guān)性；RF僅與DAS28評(píng)分有相關(guān)性。結(jié)論 RA患者血清Eotaxin-1和抗CCP抗體的水平與患者的疾病活動(dòng)度相關(guān)，有望發(fā)展成為監(jiān)測(cè)RA疾病活動(dòng)度的新的血清學(xué)指標(biāo)。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-1；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)；壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)主要表現(xiàn)為慢性持續(xù)的關(guān)節(jié)炎癥，發(fā)病早期即可出現(xiàn)關(guān)節(jié)侵害和骨侵蝕，并伴有高水平的自身抗體和系統(tǒng)性炎癥[1-2]。近年來(lái)，雖然RA的治療手段有了一系列進(jìn)展，但其病因及病理過(guò)程仍不清楚，RA一旦發(fā)生，疾病進(jìn)展迅速,影響患者的生存質(zhì)量。因此，對(duì)于RA 的疾病進(jìn)展的監(jiān)測(cè)，對(duì)其治療和預(yù)后有著重要意義。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-1(Eotaxin-1)作為趨化因子家族的一員，被發(fā)現(xiàn)在RA患者血清中水平升高。本研究采用腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)(swollen joint count,SJC)、壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)(tender joint count,TJC)和DAS28評(píng)分評(píng)價(jià)RA的活動(dòng)度，通過(guò)分析RA患者血清Eotaxin-1、類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor, RF)和抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide, CCP)抗體與以上臨床評(píng)分的相關(guān)性，探究這3個(gè)指標(biāo)對(duì)RA的疾病活動(dòng)度的監(jiān)測(cè)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2014年12月至2015年12月于淄博礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院就診的58名早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者(RA組)、46名非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者(非RA組)以及53名體檢健康者(健康人對(duì)照組)納入本研究。RA組所有患者均符合2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，且根據(jù)EULAR 2003年會(huì)議，以病程2年內(nèi)為RA早期。其中，女性42名，男性16名，年齡(47.6±11.7)歲，病程為(11.3±7.5)個(gè)月。非RA組患者包括反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎15例，腰椎間盤(pán)突出6例，非RA彌漫性結(jié)締組織病16例，骨關(guān)節(jié)炎9例。非RA組女性34名，男性12名，年齡(44.2±10.3)歲。健康人對(duì)照組女性40名，男性13名，年齡(48.1±12.5)歲。3組人群性別和年齡比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)于參加本研究項(xiàng)目均知情同意。

1.2 疾病活動(dòng)程度評(píng)分方法 由同一名風(fēng)濕免疫科醫(yī)生按照簡(jiǎn)化的28個(gè)關(guān)節(jié)部位(雙肩、肘、腕、膝、掌指、近端指間關(guān)節(jié))進(jìn)行輕壓觸診，分別記錄有腫脹和壓痛的關(guān)節(jié)個(gè)數(shù)。根據(jù)SJC、TJC和血沉(ESR)數(shù)值計(jì)算出DAS28，以DAS28評(píng)分評(píng)價(jià)疾病的活動(dòng)程度。

1.3 標(biāo)本采集 空腹采集靜脈血2～4 mL，1 h內(nèi)分離血清，2 h內(nèi)完成RF的檢測(cè)。剩余血清分裝至EP管中，每管120 μL，-80 ℃凍存，用于Eotaxin-1和抗CCP抗體的檢測(cè)。

1.4 主要儀器和試劑 RF檢測(cè)試劑盒(日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社),Eotaxin-1檢測(cè)試劑盒(美國(guó)R&D公司)，抗CCP抗體試劑盒(上?？菩律锕?；7600-110全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)，酶聯(lián)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)。

1.5 方法 RF采用免疫透射比濁法檢測(cè)，RF≥20 U/mL判為陽(yáng)性。血清Eotaxin-1和抗CCP抗體的濃度用ELISA檢測(cè)，均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線孔、陰性對(duì)照孔和空白孔。根據(jù)每板的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度?？笴CP抗體≥25 RU/mL判為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行。3組計(jì)量資料比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，各指標(biāo)間進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平 RA組患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平均高于非RA組和健康人對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平

注：*，與對(duì)應(yīng)非RA組及健康人對(duì)照組數(shù)據(jù)比較，P均<0.01；△，與對(duì)應(yīng)健康人對(duì)照組比較，P均<0.01。

2.2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體與臨床SJC、TJC和DAS28評(píng)分的相關(guān)性 RA患者SJC、TJC和DAS28評(píng)分的中位數(shù)分別為6.35、9.77、3.12。其血清Eotaxin-1的濃度與其SJC、TJC和DAS28評(píng)分呈顯著相關(guān)。RF水平僅與DAS28評(píng)分相關(guān)?？笴CP抗體與TJC和DAS28評(píng)分均相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平與臨床腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)和DAS28評(píng)分的相關(guān)性

項(xiàng)目SJCrPTJCrPDAS28評(píng)分rPEotaxin-1(pg/mL)0.482<0.010.508<0.010.806<0.01RF(U/mL)0.0290.8130.1240.3550.2680.042抗CCP抗體(RU/mL)0.1070.4250.2630.0460.486<0.01

3 討論

Eotaxin-1又稱CCL11，是嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子家族中的一員，由成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞等一系列組織和炎癥細(xì)胞分泌產(chǎn)生，對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞有較強(qiáng)的趨化作用[3]。其受體為CCR3，廣泛表達(dá)在T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞表面。

Zhebrun等[4]發(fā)現(xiàn)，在RA的病理過(guò)程中血清Eotaxin-1濃度升高，這與本研究結(jié)果一致。其原因很可能是IL-1β對(duì)血清Eotaxin-1的調(diào)節(jié)作用。目前，IL-1β參與到RA的病理過(guò)程已被廣泛接受[5]，而成纖維細(xì)胞是Eotaxin-1重要的細(xì)胞來(lái)源[6]。研究發(fā)現(xiàn)IL-1β可以促進(jìn)RA的病理過(guò)程中的成纖維細(xì)胞釋放Eotaxin-1[7]。

上調(diào)的Eotaxin-1結(jié)合關(guān)節(jié)組織細(xì)胞的CCR3受體，產(chǎn)生一系列的促炎癥反應(yīng)。作為具有較高特異性的嗜酸性粒細(xì)胞的趨化因子，Eotaxin-1誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞移行、浸潤(rùn)到關(guān)節(jié)組織內(nèi)并活化，釋放大量的炎性因子，引發(fā)關(guān)節(jié)的滲出增加、腫脹、疼痛等臨床癥狀。此外，Eotaxin-1還可以活化肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞[8]，釋放的白三烯、花生四烯酸等炎性介質(zhì)會(huì)進(jìn)一步損傷關(guān)節(jié)組織細(xì)胞，加重關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)。

最新的研究表明，在RA患者的血清和病變的關(guān)節(jié)滑膜液中，Eotaxin-1的濃度均升高，且升高的Eotaxin-1會(huì)進(jìn)一步上調(diào)關(guān)節(jié)內(nèi)成纖維樣滑膜細(xì)胞的Eotaxin-1受體CCR3的表達(dá)，而這無(wú)疑放大了Eotaxin-1/CCR3系統(tǒng)在RA中的促炎效應(yīng)[7]。此外，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)在破骨細(xì)胞表面也表達(dá)CCR3受體[9-10]，Eotaxin-1很可能通過(guò)結(jié)合其表面的CCR3受體而激活破骨細(xì)胞，從而進(jìn)一步促進(jìn)RA的疾病活動(dòng)。

目前，國(guó)外有研究已經(jīng)關(guān)注到升高的血清Eotaxin-1水平對(duì)RA發(fā)作和活動(dòng)度的提示作用。瑞典學(xué)者Kokkonen等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者表現(xiàn)出臨床癥狀之前，其血清Eotaxin-1水平已經(jīng)開(kāi)始升高，且這種升高對(duì)其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有可靠的預(yù)測(cè)作用。此外，隨著疾病的進(jìn)展，血清Eotaxin-1水平會(huì)進(jìn)一步升高[11]。此結(jié)果提示Eotaxin-1水平很可能對(duì)RA的疾病活動(dòng)度有預(yù)測(cè)作用，與本文得出的結(jié)果一致。

抗CCP抗體作為RA診斷的血清學(xué)指標(biāo)已廣泛應(yīng)用于臨床，目前大部分研究認(rèn)為，其水平與RA的疾病活動(dòng)不存在相關(guān)性。然而，也有研究表明，抗CCP抗體的水平與RA中的諸多炎性因子(如IL-1β、IL-4、IL-17等)的水平相關(guān)，而這些炎性因子直接或間接發(fā)揮著促炎性作用，參與到RA的疾病發(fā)展中[11]。本研究發(fā)現(xiàn)抗CCP抗體水平與TJC和DAS28評(píng)分有相關(guān)性。要得出確切結(jié)論還需要大量的基礎(chǔ)和臨床研究。

綜上所述，血清Eotaxin-1水平與RA的疾病活動(dòng)度存在相關(guān)性。因此，RA患者的血清Eotaxin-1水平很可能作為監(jiān)測(cè)RA活動(dòng)度的新的血清學(xué)指標(biāo)，為RA的診療提供新的研究視角和實(shí)踐方向。

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(本文編輯：劉群)

Correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide antibody with the activity of rheumatoid arthritis

LIChuan-li1,WANGYan-qun2,GUOMiao3

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,ZiboMiningGroupCo.,LTD.CentralHospital,Zibo255120,Shandong; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,JinanMilitaryGeneralHospital,Jinan250000,Shandong; 3.DepartmentofLaboratoryMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofJinzhouMedicalUniversity,Jinzhou121001,Liaoning,China)

Objective To investigate the correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor (RF) and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibody with the activity of rheumatoid arthritis (RA). Methods A total of 58 patients with early RA, 46 patients without RA and 53 healthy controls from our hospital during December 2014 and December 2015 were enrolled in our study. The activity of RA was evaluated by the swollen joint count (SJC), tender joint count (TJC) and DAS28 score. The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody were detected by ELISA and serum RF levels were determined by the immunological turbidimetry. The comparisons of serum Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF levels between different groups were performed with ANOVA and their correlations with SJC, TJC and DAS28 score were analyzed by Spearman rank correlation. Results The levels of Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF in RA patients were (96.02±21.07) pg/mL, (183.42±87.45) U/mL and (119.09±62.30) RU/mL, respectively, which were significantly higher than those in the patients without RA and healthy controls (P<0.01). The levels of serum Eotaxin-1 in RA patients were significantly related to TJC, SJC and DAS28 score (P<0.01), while the levels of anti-CCP antibody were related to TJC and DAS28 score. The levels of RF were only related to DAS28 score. Conclusion The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody in RA patients are significantly correlated with the activity of RA, which may be new serum markers to monitor the activity of RA.

rheumatoid arthritis; Eotaxin-1; anti-cyclic citrullinated peptide antibody; swollen joint count; tender joint count

10.13602/j.cnki.jcls.2017.01.07

李傳利，1985年生，男，主管技師，大學(xué)本科，從事免疫學(xué)檢驗(yàn)工作，E-mail:lichuanli972@126.com。

R446.6

A

2016-10-21)