梁培松，王偉佳，王結(jié)珍，陳康

(中山大學(xué)附屬中山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，廣東中山 528403)

抗核小體抗體對(duì)兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷的應(yīng)用價(jià)值

梁培松，王偉佳，王結(jié)珍，陳康

(中山大學(xué)附屬中山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，廣東中山 528403)

目的 評(píng)價(jià)抗核小體抗體(AnuA)對(duì)兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡(JSLE)診斷的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取54例JSLE患者，28例非JSLE患者及26例健康人作為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)抗核抗體，免疫印跡法檢測(cè)抗核小體抗體、抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體及抗Sm抗體；同時(shí)收集臨床資料及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 AnuA對(duì)JSLE診斷的敏感性為77.78%，特異性為96.30%；AnuA并聯(lián)抗核抗體、抗dsDNA抗體及抗Sm抗體檢測(cè)診斷JSLE的敏感性高于單項(xiàng)檢測(cè)；AnuA與發(fā)熱、口腔/鼻咽部潰瘍、肺部損害、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、尿蛋白和補(bǔ)體C3正相關(guān)。結(jié)論 AnuA可作為診斷JSLE有價(jià)值的指導(dǎo)性血清標(biāo)志物，其聯(lián)合抗核抗體、抗dsDNA抗體及抗Sm抗體檢測(cè)更有利于JSLE疾病的診斷。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；抗核小體抗體；抗dsDNA抗體；抗Sm抗體

兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡(juvenile systemic lupus erythematosus, JSLE)是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)多樣，病程長(zhǎng)，復(fù)雜多變。JSLE典型病例容易診斷，但對(duì)于隱匿性起病、病程早、癥狀不典型病例往往診斷十分困難，容易漏診誤診。目前對(duì)SLE臨床診斷的主要手段是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血清中的自身抗體，如抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體，抗Sm抗體等。近年來(lái)有研究顯示抗核小體抗體(anti-nucleosome antibody, AnuA)比傳統(tǒng)的生物學(xué)標(biāo)志物更能反映SLE疾病的活動(dòng)情況，并建議作為常規(guī)監(jiān)測(cè)指標(biāo)[1]。為探討AnuA在JSLE的診斷價(jià)值，本研究對(duì)我院JSLE患者的自身抗體相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，并收集相關(guān)臨床資料進(jìn)行回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 所有病例均來(lái)自2014年6月至2016年6月中山市人民醫(yī)院門診及住院部。JSLE組54例，均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ARA)1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[2]；男女比例為1∶3.50，年齡(13±2.15)歲。對(duì)照組54例，包括結(jié)締組織病2例，白塞病2例，脊柱關(guān)節(jié)病5例，幼兒類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎3例，皮肌炎2例，硬皮病2例，單純過(guò)敏性紫癜3例，紫癜腎病3例，癲癇1例，急性蕁麻疹3例，藥物性紅斑狼瘡2例，體檢健康者26例；男女比例為1∶3.90，年齡(13±4.32)歲。各疾病均符合相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2 儀器及試劑 XE-2100全自動(dòng)血液分析儀(日本Sysmex公司)，cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Roche公司)，Wellscan MK3型酶聯(lián)儀(芬蘭Labsystems Dragon公司)?？购丝贵w(antinuclear antibody, ANA)定量檢測(cè)試劑盒(德國(guó)Aesku Diagnostics GmbH & Co. KG公司)，ANA譜檢測(cè)試劑盒、Tenfly Auto-A全自動(dòng)免疫印跡分析儀(深圳亞輝龍公司)，TEST1血沉儀(意大利ALIFAX公司)，Modular PPI全自動(dòng)模式血清檢驗(yàn)分析系統(tǒng)(Roche公司)，AX-4280尿液分析儀(日本ARKRAY公司)。

1.3 標(biāo)本采集 所有研究對(duì)象均于入院后開(kāi)展治療前抽取空腹靜脈血2 mL，EDTA-K2抗凝，40 min內(nèi)進(jìn)行血常規(guī)及血沉(ESR)檢測(cè)；另抽取非抗凝靜脈血6 mL，3 500 r/min離心10 min后留取血清，置于-70 ℃保存待檢。

1.4 ANA及ANA譜檢測(cè) 所有冷凍樣本均室溫復(fù)溶混勻后檢測(cè)，嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室建立的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程進(jìn)行。ANA檢測(cè)為ELISA法，在酶聯(lián)儀上檢測(cè)結(jié)果，參照試劑說(shuō)明書(shū)，>18 U/mL為陽(yáng)性。ANA譜檢測(cè)為免疫印跡法，檢測(cè)項(xiàng)目包括抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體(antihistone antibodies, AHA)、AnuA、抗Sm抗體等，在全自動(dòng)免疫印跡分析儀上檢測(cè)膜條上條帶顏色深淺，并進(jìn)行自動(dòng)判讀，樣本檢測(cè)帶讀數(shù)/質(zhì)控帶讀數(shù)>1為陽(yáng)性，≤1為陰性。

1.5 其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 在XE-2100全自動(dòng)血液分析儀上檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(<4.0×109/L判為減少)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(<1.0×109/L判為減少)、血小板計(jì)數(shù)(<100×109/L判為減少)。在TEST1血沉儀上檢測(cè)ESR(>28 mm/h判為增高)。在cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)胱抑素C(>1.25 mg/L判為增高)、尿酸(>420 μmol/L判為增高)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(>40 U/L判為增高)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(>40 U/L判為增高)。在Modular PPI全自動(dòng)模式血清檢驗(yàn)分析系統(tǒng)檢測(cè)補(bǔ)體C3(<0.9 g/L判為減少)、補(bǔ)體C4(<0.10 g/L判為減少)、IgG抗體(>6.0 g/L判為增高)、在AX-4280尿液分析儀上定性檢測(cè)血尿、尿蛋白。另收集患者入院就診時(shí)的臨床特征資料。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 19.0軟件進(jìn)行。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，用四格表分別計(jì)算抗體檢測(cè)的敏感性和特異性；相關(guān)性用Kendall計(jì)數(shù)資料相關(guān)分析法；用logistic回歸及ROC曲線分析AnuA單項(xiàng)及聯(lián)合其他抗體的診斷性能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 JSLE組與對(duì)照組AnuA檢測(cè)結(jié)果比較 54例SLE患者中42例(77.8%)AnuA陽(yáng)性；54例對(duì)照組中2例(3.7%)AnuA陽(yáng)性，分別為結(jié)締組織病和藥物性狼瘡患者各1例。2組間AnuA陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=57.895，P<0.05)。

2.2 AnuA與其他自身抗體單獨(dú)用于診斷JSLE的診斷效能 抗Sm抗體和抗dsDNA抗體有高的特異性，但敏感性低；而AnuA特異性高，同時(shí)有良好的敏感性。見(jiàn)表1。

表1 各自身抗體單獨(dú)在兒童SLE診斷中的診斷效能分析

2.3 AnuA并聯(lián)其他自身抗體用于診斷JSLE的診斷效能 AnuA聯(lián)合抗dsDNA抗體和抗Sm抗體同時(shí)檢測(cè)有較好的敏感性和特異性，分別為98.15%、96.30%；AnuA并聯(lián)ANA、抗dsDNA抗體和抗Sm抗體同時(shí)檢測(cè)的敏感性達(dá)100%。AnuA單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)的ROC曲線的曲線下面積(AUC)為0.86，均小于聯(lián)合其他指標(biāo)檢測(cè)；通過(guò)logistic回歸分析模型得到的AnuA+ANA+抗dsDNA抗體+抗Sm抗體聯(lián)合預(yù)測(cè)變量的ROC曲線的AUC為0.948，高于AnuA單項(xiàng)檢測(cè)及其他聯(lián)合模式。見(jiàn)表2。

表2 AnuA單項(xiàng)及并聯(lián)其他抗體診斷JSLE的評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4 AnuA與JSLE患者臨床特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性 AnuA與發(fā)熱、口腔/鼻咽部潰瘍、肺部損害、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、補(bǔ)體C3、尿蛋白有一定的相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)分別為0.401、0.273、0.31、0.405、0.410、0.294，P均<0.05)，與光過(guò)敏、皮疹、非瘢痕性脫發(fā)、關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)損害、漿膜腔積液、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞計(jì)數(shù)減少、血小板計(jì)數(shù)較少、血沉增高、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶增高、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移增高、尿酸增高、胱抑素C增高、IgG增高、C4減少、血尿陽(yáng)性無(wú)相關(guān)性。

3 討論

JSLE病情重，進(jìn)展快，臨床表現(xiàn)不典型，早期診斷較成人更困難，易發(fā)生誤診，且預(yù)后差[4]。本研究54例患兒中，確診時(shí)已有27例診斷為JSLE合并狼瘡性腎炎，3例診斷為JSLE合并狼瘡性腦病，3例診斷為JSLE合并狼瘡性肺炎；確診前有8例患兒被誤診，占14.81%。

近年有研究顯示，核小體作為SLE發(fā)病的又一重要靶抗原，其抗體在成人SLE中具有較高的敏感性和特異性，并與SLE疾病活動(dòng)性相關(guān)[5-6]。本研究發(fā)現(xiàn)，AnuA在診斷JSLE患者也有較好的敏感性(77.78%)和特異性(96.30%)，與國(guó)內(nèi)頡曉香等研究結(jié)果相接近，其敏感性與特異性分別為76.25%和98.21%[7]。另發(fā)現(xiàn)有4例SLE患者僅表現(xiàn)為AnuA陽(yáng)性，而抗Sm抗體、抗dsDNA抗體則為陰性，可見(jiàn)其在抗Sm抗體、抗dsDNA抗體陰性的患者中有較高的陽(yáng)性率；在曾經(jīng)誤診的8例患者中，有6例呈現(xiàn)AnuA陽(yáng)性。因此，對(duì)于AnuA陽(yáng)性患者應(yīng)注意JSLE的存在可能。

本研究結(jié)果顯示，抗Sm抗體、抗dsDNA抗體診斷SLE特異性高，但敏感性不高，不利于早期診斷；而ANA敏感性高，但特異性卻低；Anu A處于兩者之間。為了彌補(bǔ)相互間的不足，本研究對(duì)自身抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)聯(lián)合AnuA、抗Sm抗體、抗dsDNA、ANA 4個(gè)自身抗體時(shí)敏感性達(dá)100%；當(dāng)聯(lián)合AnuA、抗Sm抗體和抗dsDNA抗體時(shí)，兼有較高的敏感性和特異性，分別為98.15%、96.30%。通過(guò)logistic回歸分析模型得到AnuA+ANA+抗dsDNA抗體+抗Sm抗體聯(lián)合預(yù)測(cè)變量的ROC曲線的AUC為0.948，高于AnuA單項(xiàng)檢測(cè)及其他聯(lián)合模式，提示4項(xiàng)抗體聯(lián)合篩查JSLE優(yōu)于其他模式。

本研究發(fā)現(xiàn)AnuA與發(fā)熱、口腔/鼻咽部潰瘍、肺部損害、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、尿蛋白、補(bǔ)體C3相關(guān)。而頡曉香等[7-8]研究結(jié)果認(rèn)為AnuA與補(bǔ)體C3有相關(guān)性，同本研究一致；而其認(rèn)為AnuA與黏膜潰瘍、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、尿蛋白均無(wú)相關(guān)性，這與本研究結(jié)果不同，可能由于研究人群的疾病活動(dòng)度差異及使用的檢測(cè)方法不同所致。從研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)AnuA與多器官損害有一定的相關(guān)性，可能與JSLE患者細(xì)胞凋亡增加后，核小體釋放增多，免疫復(fù)合物增多，致免疫復(fù)合物大量結(jié)合補(bǔ)體，造成血清中補(bǔ)體水平消耗，從而使參與凋亡的細(xì)胞清除補(bǔ)體成分的能力降低，加重了SLE患者多器官、多系統(tǒng)的損害有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，在有肺部損害的JSLE患者中僅有1例AnuA為陰性，從側(cè)面反映當(dāng)AnuA為陽(yáng)性時(shí)，更易于發(fā)生肺部損害。目前仍少有SLE患者肺部損害的血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)，AnuA很可能成為一個(gè)肺部損害的重要指標(biāo)，但仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，AnuA診斷JSLE既有良好敏感性和特異性，尤其在抗Sm抗體、抗dsDNA抗體陰性的患者中有較高的陽(yáng)性率；聯(lián)合其他自身抗體同時(shí)檢測(cè)能極大地減少誤診和漏診的情況，因此其可作為診斷JSLE有價(jià)值的指導(dǎo)性的血清標(biāo)志物。

[1]Li T, Prokopec SD, Morrison S,etal. Anti-nucleosome antibodies outperform traditional biomarkers as longitudinal indicators of disease activity in systemic lupus erythematosus[J]. Rheumatology(Oxford), 2015, 54(3): 449-457.

[2]武建國(guó). SLE和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的新分類標(biāo)準(zhǔn)[J].臨床檢驗(yàn)雜志, 2013, 31(7): 481-483.

[3]胡品津, 謝燦茂. 內(nèi)科疾病鑒別診斷學(xué)(第6版)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2014.

[4]王彩霞，盧桂玲.兒童與成人系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床比較[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011, 17(1)：63-67.

[5]Abdel Gawad ER, Mansour AI, Abdel Aziz YA,etal. Role of anti-nucleosome antibodies in the diagnosis of systemic lupus erythematosus and as a marker for lupus nephropathy[J]. Egypt J Immunol, 2014, 21(1): 57-65.

[6]Saigal R, Goyal LK, Agrawal A,etal. Anti-nucleosome antibodies in patients with systemic lupus erythematosus:potential utility as a diagnostic tool and disease activity marker and its comparison with anti-dsDNA antibody[J].J Assoc Physicians India, 2013, 61(6): 372-377.

[7]頡曉香,茹晉麗,李小峰 . 抗核小體抗體對(duì)兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷價(jià)值及與疾病活動(dòng)度的相關(guān)性研究[J]. 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2012,16(9): 629-631.

[8]頡曉香, 茹晉麗, 靳雪琴,等. 抗核小體抗體聯(lián)合其他抗體檢測(cè)對(duì)兒童與成人系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床應(yīng)用價(jià)值的對(duì)比研究[J].中國(guó)藥物與臨床,2016,16(11): 1549-1551.

(本文編輯：劉群)

Diagnostic value of anti-nucleosome antibody for juvenile systemic lupus erythematosus

LIANGPEI-song,WANGWei-jia,WANGJie-zhen,CHENKang

(DepartmentofClinicalLaboratory，thePeople′sHospitalofZhongshanCity,AffiliatedofSunYat-senUniversity，Zhongshan528403，Guangdong，China)

Objective To evaluate the diagnostic value of anti-nucleosome antibody for juvenile systemic lupus erythematosus (JSLE). Methods Fifty-four patients with JSLE, 28 patients with non-JSLE and 26 healthy children were chosen in this study. antinuclear antibody(ANA), anti-nucleosome antibody (AnuA), anti-dsDNA antibody, anti-histone antibody (AHA) and anti-Sm antibody were detected by ELISA or western-blot method. The relevant clinical data were collected and analyzed. Results For diagnosis of JSLE, the sensitivity and specificity of AnuA was 77.78% and 96.30%. The sensitivity of AnuA combined with ANA, anti-dsDNA and anti-Sm was higher than that of single detection. AnuA usually associated with fever, oral/nasal pharyngeal ulcer, lung damage, lymphocyte absolute value, urine protein and C3 level. Conclusion AnuA can be used as a serum marker for JSLE diagnosis. The detection of AnuA combined with anti-dsDNA and anti-Sm should be more helpful for diagnosis of JSLE.

systemic lupus erythematosus; anti-nucleosome antibody; anti-dsDNA antibody; anti-Sm antibody

10.13602/j.cnki.jcls.2017.01.05

梁培松，1976年生，男，副主任技師，大學(xué)本科，從事臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。

王偉佳，主任技師，博士后，E-mail：xuelangchichao@163.com。

R446.6

A

2016-11-20)