張慶昆

摘 要：目的：建立注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法研究注射用炎琥寧中有關(guān)物質(zhì)的含量；色譜柱條件為ODS HYPERSIL-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.05%的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值在2.50±0.05范圍內(nèi)）-甲醇（330∶650）作為流動(dòng)相；在251nm的波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)；設(shè)定流速為1.0mL/min。結(jié)果：注射用炎琥寧與各已知雜質(zhì)及其他講解產(chǎn)物可明顯的分離開(kāi)，且系統(tǒng)適用性良好，表明該法用于注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定是可行的。結(jié)論：該法在對(duì)炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的檢查上簡(jiǎn)便操作，專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度較高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)含量的檢查。

關(guān)鍵詞：炎琥寧；有關(guān)物質(zhì)；檢查方法

高效液相色譜法1985年被《中國(guó)藥典》收錄，是藥物分析中常用的一種檢測(cè)分析方法，其以均勻規(guī)則的顆粒（通常直徑在10μm以下）作為固定相，以流動(dòng)相作為載體通過(guò)高壓輸液泵輸送，利用不同組分被流動(dòng)相攜帶時(shí)對(duì)應(yīng)的移動(dòng)的速度不同，而將各組分進(jìn)行分離和檢測(cè)。注射用炎琥寧是將穿心蓮內(nèi)酯從草本植物穿心蓮中提取出來(lái)，經(jīng)部分合成后制成穿心蓮內(nèi)酯半酯單鉀鹽，該成分生物活性較高，投加適量的輔料后制成的凍干制劑，該藥為抗病毒藥，可增強(qiáng)機(jī)體的抗菌的能力，清熱解毒、鎮(zhèn)靜消炎作用明顯，臨床上主要用于病毒性肺炎、扁桃體炎、病毒性上呼吸道感染、急性細(xì)菌性痢疾等癥狀的抗病毒治療[1]。雜質(zhì)的存在給藥物的實(shí)際療效和穩(wěn)定性帶來(lái)了影響，甚至危害人體健康，造成藥物的不良反應(yīng)。筆者通過(guò)高效液相色譜法（HPLC）對(duì)該藥品中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查，對(duì)注射用炎琥寧的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效的控制?，F(xiàn)做如下報(bào)道：

1.儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260 Infinity液相色譜系統(tǒng)（自動(dòng)進(jìn)樣器，并具有動(dòng)態(tài)載樣和清洗功能），安裝了安捷倫實(shí)驗(yàn)室顧問(wèn)軟件，配套全新光學(xué)設(shè)計(jì)的UV檢測(cè)器、ODS HYPERSIL-C18色譜柱；

1.2 試劑與藥品

注射用炎琥寧（哈爾濱珍寶制藥有限公司；樣品批號(hào)：20160107、20160108、20160109）及其對(duì)照品（批號(hào)1503208，純度為99.5%）；試驗(yàn)用水為超純水，甲醇為色譜純，其余所用分析試劑均為分析純。

2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件[2]

CAPCELL PAK UG80-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以1.0mL/min的穩(wěn)定速度作為流動(dòng)相0.05%的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值在2.50±0.05范圍內(nèi)）-甲醇（330∶650）的流速，甲醇（深圳市科天化玻儀器有限公司，色譜純）；25℃柱溫下，以20μL作為每批進(jìn)樣量，在251nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)。

2.2儲(chǔ)備液的制備

2.2.1制備供試品儲(chǔ)備液

精密稱(chēng)取100mg注射用炎琥寧放至500mL容量瓶中，用流動(dòng)相0.05%的磷酸二氫鉀溶液-甲醇（330∶650）將其全部溶解并稀釋至對(duì)應(yīng)刻度定容，搖勻后得到1mL溶液中含0.20mg注射用炎琥寧的溶液作為供試品儲(chǔ)備溶液。

2.2.2制備對(duì)照品溶液

精密量取供試品溶液5mL，至500mL容量瓶中，加入上述流動(dòng)相稀釋至對(duì)應(yīng)刻度，搖勻后作為對(duì)照品溶液。

2.3線(xiàn)性關(guān)系及精密度試驗(yàn)[3]

將對(duì)照品減壓干燥12h，獲得脫水的穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯對(duì)照品，精密稱(chēng)定適量該對(duì)照品，按2.2.1方法進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e制成濃度為20、40、80、100、200、300mg/L的對(duì)照品溶液品，將以上不同濃度的對(duì)照品溶液在“2.1”條件下分別抽取20μL進(jìn)樣，將濃度與其對(duì)應(yīng)的峰面積進(jìn)行線(xiàn)性回歸計(jì)算，得出方程：A=0.0874X+0.4034（r=0.99999，n=9），20～300μg/mL范圍內(nèi)穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯濃度與對(duì)應(yīng)的峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。精密量取在“線(xiàn)性關(guān)系”內(nèi)同一濃度的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，RSD為0.19%，表明精密度良好，詳見(jiàn)表1。

2.4樣品有關(guān)含量測(cè)定及限度[4]

在3批供試品儲(chǔ)備液中各選取3支共9個(gè)樣品，稀釋為80mg/L的供試品溶液，同樣在“2.1”的指定條件下進(jìn)樣20μL，根據(jù)對(duì)應(yīng)的峰面積，帶入線(xiàn)性回歸方程得出分析結(jié)果，詳見(jiàn)表2。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取單批次（批號(hào)20160108）注射用炎琥寧供試品儲(chǔ)儲(chǔ)備液，按以上方法，單獨(dú)測(cè)定6份，每份注射用炎琥寧含量（%）分別為98.07、98.18、97.04、98.15、97.26、97.23，平均97.66mg/g，RSD為0.58%，有良好的重復(fù)性。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]

取線(xiàn)性關(guān)系下的注射用炎琥寧供試品溶液，用流動(dòng)相稀釋成高、中、低（100，10，1.0mg/L）3個(gè)濃度，陰涼條件下保存，在0～8h內(nèi)，每隔2h液相色譜儀進(jìn)樣分析，以峰面積變化考察樣品穩(wěn)定性，RSD為0.45%。說(shuō)明本品在8h內(nèi)穩(wěn)定較好。

3.討論

有關(guān)文獻(xiàn)提供線(xiàn)索指出以醋酸鹽-乙腈系統(tǒng)、乙腈-0.01mol/L磷酸鹽系統(tǒng)為流動(dòng)相時(shí)，檢測(cè)所得峰會(huì)受到其他雜峰干擾，分離效果不盡如人意，根據(jù)不斷的實(shí)驗(yàn)調(diào)整，選取0.05%的磷酸二氫鉀溶液（pH 2.50±0.05）-甲醇（330∶650）為流動(dòng)相，峰形有良好的對(duì)稱(chēng)性且與其他峰形明顯分開(kāi)[6-8]。

本次檢測(cè)結(jié)果顯示，高效液相色譜法在測(cè)定注射用炎琥寧含量的領(lǐng)域很有可行性，通過(guò)多次比較試驗(yàn)，優(yōu)化了部分檢測(cè)方法，提高其質(zhì)量檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，該方法在控制藥品質(zhì)量方面很有幫助，且對(duì)樣品檢測(cè)條件無(wú)特殊要求要求，儀器及操作條件很容易滿(mǎn)足，操作方便，且有良好的重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性[9-10]。本實(shí)驗(yàn)方法研究可作為注射用炎琥寧含量的檢驗(yàn)的參考，并期待隨著技力量平和科技水平的不斷發(fā)展，該方法能有進(jìn)一步的突破，為人類(lèi)創(chuàng)造更好的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。

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