亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        小鼠肝組織DNA的提取及鑒定綜合性實(shí)驗(yàn)在生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)中的實(shí)施

        2017-03-11 03:58:36李彩虹馬衛(wèi)列張志珍
        衛(wèi)生職業(yè)教育 2017年22期
        關(guān)鍵詞:分子生物學(xué)離心管生物化學(xué)

        丁 航,李彩虹,馬衛(wèi)列,張志珍

        (廣東醫(yī)科大學(xué),廣東 東莞 528000)

        小鼠肝組織DNA的提取及鑒定綜合性實(shí)驗(yàn)在生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)中的實(shí)施

        丁 航,李彩虹,馬衛(wèi)列,張志珍*

        (廣東醫(yī)科大學(xué),廣東 東莞 528000)

        生物化學(xué)與分子生物學(xué)是醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)重要的基礎(chǔ)課程,實(shí)驗(yàn)教學(xué)尤其是綜合性實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)學(xué)生綜合技能的培養(yǎng)至關(guān)重要。從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路、組織實(shí)施、實(shí)施效果、教學(xué)體會(huì)等方面闡述小鼠肝組織DNA的提取及鑒定綜合性實(shí)驗(yàn)在生物化學(xué)與分子生物學(xué)教學(xué)中的實(shí)施,并分析教學(xué)中存在的問(wèn)題,提出相應(yīng)的對(duì)策,為有關(guān)院校進(jìn)行相關(guān)的綜合性實(shí)驗(yàn)教學(xué)提供參考。

        小鼠肝組織DNA;綜合性實(shí)驗(yàn);生物化學(xué)與分子生物學(xué)

        生物化學(xué)與分子生物學(xué)是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)密切聯(lián)系的學(xué)科,實(shí)驗(yàn)課是其教學(xué)的重要組成部分,是提高學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)操作技能的主要手段,是培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立分析問(wèn)題、解決問(wèn)題能力的重要教學(xué)途徑之一,是學(xué)生后續(xù)專(zhuān)業(yè)技能學(xué)習(xí)與提高的必要基礎(chǔ)。為了幫助學(xué)生更好地理解生物化學(xué)與分子生物學(xué)的理論知識(shí),通過(guò)開(kāi)展小鼠肝組織DNA的提取及鑒定綜合性實(shí)驗(yàn),幫助學(xué)生克服對(duì)生物化學(xué)與分子生物學(xué)的抽象、畏難情緒,認(rèn)識(shí)到生物化學(xué)與分子生物學(xué)不再神秘,可以自如駕馭[1]。這樣不僅利于提高生物化學(xué)與分子生物學(xué)的教學(xué)質(zhì)量,而且能鍛煉學(xué)生綜合技能的運(yùn)用能力。

        1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理

        真核細(xì)胞中,DNA以核蛋白形式存在于細(xì)胞核中。提取質(zhì)量較好的DNA產(chǎn)品應(yīng)該遵循兩個(gè)基本原則:一是要將DNA與蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、糖類(lèi)和RNA等充分分離;二是在操作過(guò)程中盡量避免DNA斷裂,保持其分子的完整性。

        在各種動(dòng)物組織DNA提取方法中,最常用的經(jīng)典方法是酚/氯仿抽提法。本實(shí)驗(yàn)在小鼠肝組織DNA抽提過(guò)程中加入十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulphate,SDS),可破壞細(xì)胞膜、核膜,并使組織蛋白與DNA分子分離;加入乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA),可抑制脫氧核糖核酸酶活性,減少DNA分子降解。釋放出來(lái)的DNA用酚/氯仿抽提,除去蛋白質(zhì),然后用氯仿抽提,以除去DNA溶液中微量酚的污染,最后用無(wú)水乙醇使DNA沉淀析出,得到目的產(chǎn)物。

        DNA的特征吸收峰位于260 nm處,測(cè)定出A260nm數(shù)值后,利用公式可推算出不同形式DNA樣品的濃度。分離提取DNA時(shí)主要的雜質(zhì)之一是蛋白質(zhì),其特征吸收峰位于280 nm,同時(shí)測(cè)定出DNA樣品的A260nm值及A280nm值后,計(jì)算出A260nm/A280nm的值,大致可以判定產(chǎn)品的組成情況。

        2 實(shí)驗(yàn)課程的內(nèi)容

        2.1 肝勻漿的制備

        斷頸法處死小鼠,立即取出肝臟,用冷生理鹽水洗去表面附著的血液,濾紙吸干多余水分,稍剪碎,放入玻璃勻漿器中,加入10 mL冷TE緩沖液,一手持勻漿管將下端插入待勻漿樣品中,另一手將搗管垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,得到組織勻漿液。

        2.2 提取DNA

        (1)取0.2 mL勻漿液置于1.5 mL離心管中,加入10%SDS溶液0.2 mL,顛倒混勻,室溫放置5分鐘,溶液變黏稠。(2)取飽和酚0.25 mL,氯仿/異戊醇0.25 mL,加入上述溶液中,顛倒混勻,室溫放置5分鐘(其間不斷搖動(dòng)離心管以保持溶液呈乳狀),在4℃以12 000 r/min離心10分鐘。(3)取出離心管,小心吸取上層溶液,將其置入一支新的1.5 mL離心管中,加入0.5 mL氯仿/異戊醇,顛倒混勻,室溫放置5分鐘,在4℃以12 000 r/min離心5分鐘。(4)取出離心管,小心吸取上層溶液(記住溶液體積,可分多次吸取,避免吸到沉淀部分),將其置入一支新的1.5 mL離心管中。加入0.3倍上清液體積的10 mol/L NH4Ac溶液及2.5倍上清液體積的無(wú)水乙醇后,顛倒混勻,即可觀察到纖維狀DNA沉淀析出。在4℃以12 000 r/min離心5分鐘,小心倒去上層溶液,將離心管甩干,靜置5分鐘使乙醇揮發(fā)。加入1.0 mL TE緩沖液溶解DNA。

        2.3 DNA的測(cè)定

        將溶解的DNA樣品轉(zhuǎn)移到干凈試管中,加入3.0 mL TE緩沖液,混勻。以TE緩沖液為空白溶液調(diào)零,在紫外分光光度計(jì)上分別測(cè)定DNA溶液的A260nm值和A280nm值。

        3 實(shí)施的效果

        3.1 鞏固并拓展了所學(xué)知識(shí),熟悉了實(shí)驗(yàn)基本原理和操作過(guò)程

        由于生物化學(xué)與分子生物學(xué)這門(mén)課程的理論知識(shí)較為抽象,復(fù)雜難懂,學(xué)生在預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中,需要查閱書(shū)本,上網(wǎng)觀看課程實(shí)驗(yàn)視頻或者在網(wǎng)上查找資料,以便更好地整理、融合、消化、理解實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟和注意事項(xiàng)等,使生物化學(xué)的理論得到更加形象的驗(yàn)證。同時(shí),幫助學(xué)生更清晰地認(rèn)識(shí)和更好地掌握這個(gè)實(shí)驗(yàn)所涉及的知識(shí)點(diǎn)。這正是每個(gè)綜合性實(shí)驗(yàn)所要達(dá)到的目的。

        3.2 調(diào)動(dòng)了學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性和主動(dòng)性

        本綜合性實(shí)驗(yàn)改變了傳統(tǒng)的“實(shí)驗(yàn)課教師講學(xué)生聽(tīng),學(xué)生再按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)機(jī)械地完成實(shí)驗(yàn)操作”的模式,這次實(shí)驗(yàn)課前,教師已要求學(xué)生預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn),要對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉僮鞒绦蚝鸵笥兴私?,查閱資料,開(kāi)拓思路,帶著問(wèn)題在實(shí)驗(yàn)課上動(dòng)手操作[2]。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中或在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的專(zhuān)題實(shí)驗(yàn)報(bào)告中,學(xué)生可以隨時(shí)提出自己對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程設(shè)計(jì)的想法。如此安排,對(duì)于調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性和主動(dòng)性很有幫助。在實(shí)驗(yàn)中環(huán)環(huán)相扣,往往上一個(gè)小實(shí)驗(yàn)的結(jié)果就是下一個(gè)小實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的前提,肝組織的研磨必須充分,這樣才能得到較高純度的DNA,進(jìn)而進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。這種實(shí)驗(yàn)安排促使學(xué)生必須認(rèn)真仔細(xì)地對(duì)待每一步操作,以獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若沒(méi)有獲得理想的結(jié)果,就要自己查找原因,促使學(xué)生成為整個(gè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的主體。

        3.3 加強(qiáng)了學(xué)生動(dòng)手能力

        在以前傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式中,學(xué)生根據(jù)講義上所寫(xiě)的實(shí)驗(yàn)步驟和教師課堂講解進(jìn)行機(jī)械性操作,操作較為簡(jiǎn)單[3]。就本次綜合性實(shí)驗(yàn)而言,從殺鼠取肝、研磨、提取DNA到DNA含量測(cè)定,學(xué)生都需要格外小心,要全神貫注地操作,稍不注意就有可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,在此過(guò)程中,大大提高了學(xué)生的動(dòng)手能力。

        3.4 增強(qiáng)了團(tuán)隊(duì)意識(shí)

        隨著現(xiàn)代科技的飛速發(fā)展,科學(xué)研究越來(lái)越重視團(tuán)隊(duì)合作,單靠一個(gè)人的力量很難事事通曉、面面俱到,因此,教師應(yīng)該有意識(shí)地培養(yǎng)學(xué)生與他人合作、交流、溝通的能力。在本次綜合性實(shí)驗(yàn)中,幾乎每一步都需要學(xué)生互相合作,這是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。因此,本實(shí)驗(yàn)有效地增強(qiáng)了學(xué)生的團(tuán)隊(duì)意識(shí)。

        DNA的提取是生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)技術(shù),提取的DNA的純度及結(jié)構(gòu)完整性是進(jìn)行基因工程各項(xiàng)研究所必需的條件。目前應(yīng)用較為廣泛的有親子鑒定、法醫(yī)鑒定、基因重組及疾病檢測(cè)等。另外,在基因工程研究中,常常需要提取分離基因組DNA,可用于構(gòu)建基因組文庫(kù)、Southern雜交及PCR分離基因等。通過(guò)本實(shí)驗(yàn),可以使學(xué)生對(duì)DNA的提取有所了解、對(duì)DNA的提取研究有一個(gè)整體概念,從而提高學(xué)生的綜合能力,使他們所學(xué)知識(shí)更完整并得到升華。

        [1]王寧,陳園園,李仲,等.淺談醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的改革與探索[J].教育教學(xué)論壇,2016(28):272-273.

        [2]徐宋瑤,薛昕,鄧?guó)P,等.醫(yī)藥類(lèi)院校生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的探索與研究[J].繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育,2017,31(2):20-21.

        [3]王輝.病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)改革及實(shí)踐[J].科技文匯,2016(11):77-78.

        G424.31

        B

        1671-1246(2017)22-0074-02

        廣東醫(yī)科大學(xué)教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程項(xiàng)目(JG1403)

        (*

        張志珍)

        猜你喜歡
        分子生物學(xué)離心管生物化學(xué)
        生物化學(xué)線上線下混合式教學(xué)效果分析
        云南化工(2020年11期)2021-01-14 00:51:16
        魔方型離心管架的設(shè)計(jì)及研發(fā)
        科技視界(2020年26期)2020-09-24 03:25:06
        離心管架研究現(xiàn)狀及魔尺型離心管架的設(shè)計(jì)
        科技視界(2020年17期)2020-07-30 14:03:27
        燃燒條件演示實(shí)驗(yàn)的新設(shè)計(jì)
        本科生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教學(xué)改革初探
        ABO亞型Bel06的分子生物學(xué)鑒定
        成軍:從HCV入手,探索脂類(lèi)代謝分子生物學(xué)新機(jī)制
        習(xí)得性無(wú)助感與生物化學(xué)教學(xué)改革研究
        PBL教學(xué)在生物化學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用
        網(wǎng)絡(luò)教學(xué)在高職高專(zhuān)生物化學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用
        成人免费a级毛片| 综合人妻久久一区二区精品| 爱爱免费视频一区二区三区| www国产亚洲精品久久麻豆| 欧美饥渴熟妇高潮喷水水| 国产成人精品免费久久久久| 又爽又猛又大又湿的视频| 蜜桃传媒一区二区亚洲av婷婷| 黑人上司粗大拔不出来电影| 国产nv精品你懂得| 熟女丝袜美腿亚洲一区二区三区| 亚洲综合自拍偷拍一区| 国产午夜福利不卡在线观看| 久热这里只有精品99国产| 日韩精品久久不卡中文字幕| 亚洲综合一区二区三区天美传媒| 一区二区三区国产| 欧美成人中文字幕| 精品国精品自拍自在线| 亚洲欧美中文日韩在线v日本| 亚洲av永久无码天堂网毛片| 亚洲AV成人无码久久精品四虎| 日韩成人高清不卡av| 放荡的美妇在线播放| 亚洲 暴爽 av人人爽日日碰| 精品无码成人片一区二区| 麻豆成人久久精品一区| 永久免费人禽av在线观看| 另类免费视频在线视频二区| 偷拍av一区二区三区| 99久久国产精品网站| 海角国精产品一区一区三区糖心| 亚洲av在线播放观看| 国产在线精品观看一区二区三区| 亚洲精品久久7777777| 欧美人与动人物牲交免费观看| 国产毛片三区二区一区| 久久久极品少妇刺激呻吟网站| 男女下面进入的视频| 精品日韩欧美| 亚洲av色图一区二区三区|