張金仿 王剛 蘇建榮

100050 北京，首都醫(yī)科大學附屬北京友誼醫(yī)院檢驗科

輪狀病毒(Rotavirus， RV)1973年由澳洲的露絲·畢夏普(Ruth Bishop)發(fā)現(xiàn)，為一種雙鏈核糖核酸病毒，由11個編碼結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP7)與非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-NSP6)的RNA節(jié)段組成，屬呼腸孤病毒科。G型由糖蛋白VP7定義，P型則由對于蛋白酶敏感的蛋白質(zhì)VP4定義[1]。

兒童在早期幾乎均被輪狀病毒感染，在2 歲前，多數(shù)兒童會遭受2 次以上的感染。首次感染癥狀較重，再次感染仍有約20%患兒需接受門診治療，其中約3%患兒會因脫水而住院治療[2]。盡管醫(yī)療水平不斷提高，輪狀病毒感染導致的患兒死亡并未明顯下降[3]。輪狀病毒仍是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體之一，感染病程一般為7 d，嘔吐2～3 d，腹瀉5～7 d，多數(shù)伴有發(fā)熱，嚴重患兒出現(xiàn)脫水。在全國范圍內(nèi)，每年仍有近1 000萬由輪狀病毒感染引起的嬰幼兒胃腸炎，約占同期胃腸感染性疾病嬰幼兒人數(shù)的25%[4]。

表2 2015年5月至2017年5月北京友誼醫(yī)院輪狀病毒毒株分型

注：無特殊說明括號內(nèi)為百分比, 括號外為分型例數(shù)

Note. If not otherwise specified, numbers in the parentheses are percentages, and those outside the parentheses are number of cases of a type

目前針對輪狀病毒感染無特效治療方法，接種疫苗仍為預防感染的有效手段，但近幾年輪狀病毒感染流行特征出現(xiàn)新變化，本文將首都醫(yī)科大學附屬北京友誼醫(yī)院2015年5月至2017年5月門診患兒A群輪狀病毒感染進行研究。

1 材料與方法

1.1標本來源由北京友誼醫(yī)院兒科門診檢驗師或醫(yī)生在征得患兒監(jiān)護人知情同意后，收集其糞便標本，1 813份腹瀉病例，其中男性1 075例，女性738例。通過全院HIS系統(tǒng)獲得患兒資料如姓名、性別、年齡、起病時間、臨床癥狀(嘔吐、腹瀉、發(fā)熱、暈厥等情況)、聯(lián)系方式、家庭住址等。腹瀉診斷標準采用WHO標準，即每日大便次數(shù)≥3次，糞便稀薄或含有膿血及黏液，或含有不消化的食物殘渣及肉眼或鏡檢可見的病理性內(nèi)容物等[5],本研究獲北京友誼醫(yī)院倫理委員會審查通過。

1.2糞便標本收集、保存和篩檢采用無菌便盒收集腹瀉患兒糞便標本、編號、4 ℃保存(不超過48 h)。采用A群輪狀病毒試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)有限公司)進行篩檢(嚴格按照說明書操作)。篩檢陽性原始標本重新編號凍存于-20 ℃冰箱，用于核酸提取。

1.3核酸提取與毒株分型原始糞便標本室溫解凍后取200 μl，采用核酸提取試劑盒提取病毒核酸(中國臺灣Geneaid公司)，提取方法按說明書進行。將得到的RNA上清液于-20 ℃冰箱保存。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法進行G/P分型，序列的選擇及檢測流程(SOP) 參照監(jiān)測方案及相關(guān)報道[6-8]。

1.4統(tǒng)計學方法采用Excel 2013軟件整理數(shù)據(jù)，用 SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計學處理及繪制圖表，二項分布方法計算陽性檢出率置信區(qū)間。使用Fisher確切概率法進行率的比較，P<0 .05為差異有統(tǒng)計學有意義。

2 結(jié)果

2.1基本檢出情況1 813份腹瀉標本A群輪狀病毒檢測陽性319例(占17.6%)，其中水樣便243份、稀便47份、粘液便26份。1～ 2 歲患兒陽性構(gòu)成比最高，為48.3%，6 月齡至12月齡次之，為21.9%。5歲以上患兒22例，5例陽性(22.7%)；最小檢出年齡為12 d，最大檢出年齡12歲(見表1)。

表1 2015年5月至2017年5月北京友誼醫(yī)院輪狀病毒感染腹瀉陽性檢出率Tab.1 The results of basic detection of rotavirus infection in Beijing Friendship Hospital 2015-2017

2.2基因分型319例A 群輪狀病毒陽性標本常見基因型依次為G9P[8]177例(55.5%)、G1P[8]72例(22.6%)、G3P[8]31(9.7%)；此外，本次研究中未分型標本10例(表2)。

2.3季節(jié)性分布2016年2月(46.8%)與2017年2月(47.2%)均為全年月檢出率最高月份，2015年9月檢出率最低，為0.8%。2015年，在感染性腹瀉高發(fā)的6～9月輪狀病毒檢出率明顯低于其他月份，而2016年同期檢出率均有不同程度的增長。月份檢出率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見圖1。

圖1 2015年5月至2017年5月輪狀病毒檢出率月分布Fig.1 The monthly distribution of rotavirus examination from 2015 to 2017

3 討論

輪狀病毒是世界范圍內(nèi)重癥腹瀉的主要病原之一[1]，嚴重危害人類健康[9]，在欠發(fā)達國家, 輪狀病毒腹瀉成為兒童死亡的主要原因[10]。本研究共收集北京友誼醫(yī)院兒科門診2015年5月至2017年5月腹瀉病例1 813例，檢出A群輪狀病毒感染陽性病例319例，占腹瀉患兒總數(shù)的17.6%，顯著低于1998—2001年同醫(yī)院5歲以下輪狀病毒感陽性率[11]。陽性率降低可能與輪狀病毒疫苗的使用及兒童監(jiān)護人衛(wèi)生意識的普遍提高有關(guān)。本研究結(jié)果亦略低于耿啟彬等[12]2014—2016年傳染病監(jiān)測中的結(jié)果。

新生兒從母體所獲得的抗體對預防感染有一定保護作用，但由于母傳抗體逐漸消退，6月嬰兒到2歲兒童輪狀病毒感染引起的腹瀉比例快速增加。本研究中1～2 歲兒童A群輪狀病毒檢出率最高，567例病例中154例陽性，檢出率達到27.2%。有研究認為隨著機體獲得性免疫的建立和完善，輪狀病毒腹瀉在2～5 歲兒童中比例逐漸降低，但本研究結(jié)果顯示6 月齡至12月齡組與2～3歲年齡組檢出率接近，分別為17.5%與16.7%，這與多數(shù)學者研究成果不一致[10-13]，其原因有待研究。本研究包含22例5歲以上兒童，陽性病例5例，檢出率達22.7%，其中最大檢出者12歲。

連續(xù)兩年的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)輪狀病毒感染性腹瀉在冬季高發(fā)，而在嬰幼兒感染性腹瀉高發(fā)的夏季檢出率最低。這種季節(jié)性分布特征在其他研究中也有所涉及[14-17]，在耿啟彬等[12]的報道中顯示輪狀病毒月檢出率最高月份為12月(45.4%)，本研究中顯示輪狀病毒感染的高峰均為2月份，月檢出率為47.2% 和46.8%，這些研究提示秋冬季兒童腹瀉輪狀病毒感染的可能性較高。研究中發(fā)現(xiàn)2017年春季的輪狀病毒的檢出率明顯高于前1年，可能是病毒基因型存在變異，這一現(xiàn)象的出現(xiàn)有待進一步研究。

根據(jù)Santos 和Hoshino[18]的研究，世界上近90% 的流行株為常見的的G 亞型和P[8]或P[4]，不同型別的輪狀病毒呈現(xiàn)區(qū)域高發(fā)的流行特征[19]，有學者發(fā)現(xiàn)近30%的感染與不常見的組合(如G8 P[6] 或G8 P[4 ]) 有關(guān)[16]。本研究中319例陽性標本A 群輪狀病毒常見的血清型依次為G9 P[8]177例(55.5%)，G1 P[8]72例(22.6%)，G3P[8]31例(9.7%)，與Zhang 等[20]的研究結(jié)果類似。本研究中未分型標本10例，提示G和P之外的其他型別已在中國出現(xiàn)和流行，與國內(nèi)文獻相符[21]。

本研究存在一定局限性。首先，由于患兒癥狀和醫(yī)生臨床判斷不同，并非全部就診腹瀉病例均進行了輪狀病毒檢測；此研究僅涉及門診患者，不包含住院病例；僅進行了A 群輪狀病毒檢測，亞型中僅檢測了G1、G2、G3、G4、G8、G9 和P[4]、P[6]、P[8]、P[9]、P[10]、P[11]等亞型。本研究未對PCR擴增產(chǎn)物進一步純化測序，未能對主要毒株基因型進行進化分析。

綜上所述，A群輪狀病毒是北京地區(qū)5 歲以下兒童腹瀉的常見病原體，G9P[8]為主要流行株，輪狀病毒腹瀉呈現(xiàn)明顯的時間流行特征。掌握輪狀病毒主要型別及各亞型在人群中流行的特征可以為疫苗的研制提供可靠數(shù)據(jù)。

[1] Dennehy PH. Rotavirus infection: a disease of the past?[J].Infect Dis Clin North Am，2015,29(4):617-635. doi:10.1016/j.idc.2015.07.002.

[2] Yu JX，Jing HQ，Lai SJ，et al． Etiology of diarrhea among children under the age five in China: results from a five-year surveillance[J]． J Infect，2015，71(1):19-27．doi: 10.1016/j.jinf.2015.03.001.

[3] Parashar UD，Hummelman EG，Bresee JS，et al． Global illness and deaths caused by rotavirus disease in children[J]． Emerg Infect Dis，2003，9(5): 565-572．doi:10.3201/eid0905.020562.

[4] Jin H, Wang B, Fang ZY，et al．hopital- based study of the conomicburden associated with rotavirus diarrhea in eastern China[J].Vaccine, 2011,29(7):7801-7806. doi:10.1016/j.vaccine.2011.07.104.

[5] WHO． The treatment of diarrhoea: A manual for physicians and other senior health workers．2005:1-44.

[6] Simmonds MK, Armah G, Asmah R, et al. New oligonucleotide primers for P-typing of rotavirus strains: Strategies for typing previously untypeable strains[J]. J Clin Virol. 2008,42(4):368-373. doi: 10.1016/j.jcv.2008.02.011.

[7] 國家科技重大專項傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺項目專項實施管理辦公室.腹瀉癥候群監(jiān)測方案(2012 版) [S].北京: 中國疾病預防控制中心，2011．

[8] 王鵬,原新慧,林謙, 等. 南京 2011-2013 年嬰幼兒腹瀉輪狀病毒分子流行病學研究[J]. 中華實驗和臨床病毒學雜志，2015,29(3):133-135. doi：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2015.03.005.

[9] Ahmadi E,Alizadeh-Navaei R,Rezai MS. Efficacy of probiotic use in acute rotavirus diarrhea in children: a systematic review and meta-analysis[J]． Caspian J Intern Med， 2015,6(4):187-195.

[10] Wang YH, Kobayashi ND,Zhou DJ, et al． Molecular epidemiologic analysis of group A rotaviruses in adults and children with diarrhea in Wuhan city,China,2000-2006[J]. Arch Virol, 2007,152(4):669-685.doi:10.1007/s00705-006-0904-y.

[11] 童志禮,馬莉,章菁, 等. 北京友誼醫(yī)院1998—2001 年輪狀病毒哨點監(jiān)測分析[J] 中華流行病學雜志,2003,24(12),1100-1103. doi:10.3760/j.issn:0254-6450.2003.12.010.

[12] 耿啟彬,賴圣杰,余建興, 等. 中國26 省(直轄市、自治區(qū)) 2011—2014 年5 歲以下兒童腹瀉病例輪狀病毒流行特征分析[J]. 疾病監(jiān)測,2016,31(6)，463-470. doi:10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.006.

[13] 蔣翠蓮,顧平清,葉莉莉, 等. 南京地區(qū)2011—2012年度門診嬰幼兒輪狀病毒腹瀉的分子流行病學研究[J].中國人獸共患病學報,2014,30(3),332-336. doi: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2015.03.005

[14] 趙嘉詠,申曉靖,夏勝利,等. 河南省哨點醫(yī)院5歲以下兒童腹瀉病例A組輪狀病毒感染情況、臨床特征及病原學研究[J]. 中華預防醫(yī)學雜志,2017,51(1),82-86.doi:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.01.016.

[15] Xu J,Yang Y, Sun JE, et al． Molecular epidemiology of rotavirus infections among children hospitalized for acute gastroenteritis in Shanghai,China,2001 through 2005[J]． J Clin Virol,2009,44(1):58- 61．doi:10.1002/jmv.21569.

[16] Duan ZJ,Liu N,Yang SH, et al. Hospital-based surveillance of rotavirus diarrhea in the people′s republic of China，August 2003—July 2007[J]． J Infect Dis， 2009,200(1 Suppl): 167-173． doi:10.1086/605039.

[17] Chen Y,Li ZJ,Han DS, et al． Viral agents associated with acute diarrhea among outpatient children in Southeastern China[J]． Pediatr Infect Dis J,2013,32(7):285-290．doi:10.1097/INF.0b013e31828c3de4.

[18] Santos N,Hoshino Y. Global distribution of rotavirus serotypes /genotypes and its implication for the development and implementation of an effective rotavirus vaccine[J]． Rev Med Virol,2005,15(1):29-56．doi:10.1002/rmv.448.

[19] Chieochansin T,Vutithanachot V,Phumpholsup T,et al． The prevalence and genotype diversity of Human Rotavirus A circulating in Thailand,2011-2014[J]． Infect Genet Evol,2016,37(1):129-136．doi:10.1016/j.meegid.2015.11.011.

[20] Zhang J,Liu HX,Lei J, et al. Active, Population-based surveillance for rotavirus gastroenteritis in Chinese children: Beijing municipality and Gansu province，China[J]． Pediatr Infect Dis J，2015，34(1): 40-46．doi:10.1097/INF.0000000000000505.

[21] Li DD，Liu N，Yu JM，et al. Molecular epidemiology of G9 rotavirus strains in children with diarrhoea hospitalized in Mainland China from January 2006 to December 2007 [J]．Vaccine，2009，27 (5 Suppl): 40-45．doi:10.1016/j.vaccine.2009.08.073.