韋曉星 楊麗珍 楊況甜 韋雪丹 黎宇

摘要：目的 探討標本溶血對重氮法測定膽紅素結果的影響。方法 選取健康者的血標本檢測溶血前和溶血后總膽紅素、直接和間接膽紅素的測定值。結果 溶血時標本的總膽紅素測定值與不溶血時的測定值無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；溶血時標本的直接和間接膽紅素測定值與不溶血時的測定值有顯著差異，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 嚴重溶血對直接和間接膽紅素的測定結果影響顯著。

關鍵詞：溶血；重氮法；測定；總膽紅素；直接膽紅素

Effect of Hemolysis on Heavy Nitrogen Determination of Bilirubin

WEI Xiao-xing1，YANG Li-zhen1，YANG Kuang-tian1，WEI Xue-dan1，LI Yu2

（1.Department of Blood Transfusion ，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China；2.Department of Clinical Laboratory，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China）

Abstract：Objective To study the effect of hemolysis on the results of the determination of bilirubin by the method of hemolysis. Methods The blood samples from healthy subjects were selected to detect the total bilirubin， direct and indirect bilirubin before and after hemolysis. Results The total bilirubin hemolysis specimens was no obvious change and determination of hemolysis value was not statistically significant （P>0.05）； hemolysis direct and indirect bilirubin were measured values were significantly different from those determined not hemolysis values were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Severe hemolysis has a significant influence on the results of direct and indirect bilirubin.

Key words：Hemolysis； Diazo method； Determination；Total bilirubin； Direct bilirubin

血清膽紅素是用于診斷肝膽疾病和鑒別黃疸性質的重要指標[1]。但在實際臨床標本檢測中，溶血已經成為影響其檢測結果準確性的重要原因之一。本文用人造溶血標本，對溶血前與溶血后標本進行檢測，意在分析溶血對膽紅素測定結果的影響。

1資料與方法

1.1一般材料 選取到我院體檢的健康成年人血清60例，要求體檢者肝腎功能在正常范圍內及各項指標基本正常，無相關疾病及藥物使用史。標本無黃疸、溶血或高脂血狀態(tài)。

1.2儀器和試劑 羅氏全自動生化分析儀D2400和P800及羅氏配套檢測總膽紅素、直接膽紅素試劑；離心機為湖南湘儀L-530低速臺式離心機。

1.3檢驗方法

1.3.1所選取標本以3000 r/min離心10 min分離血清，用羅氏全自動生化學分析儀檢測每份標本中總膽紅素、直接和間接膽紅素含量，并記錄好數(shù)據。

1.3.2用真空注射器反復抽打標本中的血液，使其發(fā)生溶血后離心分離血清，根據肉眼觀察溶血盡量為嚴重溶血程度。

1.3.3用羅氏全自動生化分析儀再次檢測溶血后的3組血清膽紅素含量，記錄好數(shù)據并進行對比分析。

以上所有檢驗操作嚴格按照廠家提供的說明書及科室制定的SOP文件執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組數(shù)據比較采用t檢驗。

2結果

溶血前標本的總膽紅素與溶血后的測定值無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而溶血后直接和間接膽紅素有顯著異常，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

3討論

在正常情況下，血清中的膽紅素大部分是由衰老紅細胞凋亡破壞所釋放的血紅蛋白分解代謝而來。釋放的血紅蛋白在肝、脾及骨髓等網狀內皮細胞中分解成珠蛋白和血紅素，后者由單核吞噬系統(tǒng)細胞微粒體血紅素加氧酶的催化，生成一種膽綠素的產物，膽綠素被還原酶還原成未結合膽紅素即間接膽紅素。在肝臟中，未結合膽紅素被肝細胞攝取后，在肝細胞滑面內質網中的酸葡萄糖醛酸基轉移酶的催化下，與葡萄糖醛酸結合生成結合膽紅素即直接膽紅素。當機體內發(fā)生溶血時，紅細胞被大量破壞，血液中非結合膽紅素形成增多，而結合膽紅素變化程度不大。

本文實驗結果表明標本溶血對總膽紅素的測定值無明顯影響，但對直接膽紅素和間接膽紅素的測定結果影響顯著。其主要原因為在血液標本發(fā)生嚴重溶血時，紅細胞的血紅素成分進入到血清，使得血清顏色變紅，背景變暗，阻礙了儀器比色的光路傳導和透射，降低了儀器光路接收器對檢測光線的接收識別的敏感性和識別力，導致直接膽紅素測定結果大大偏低，甚至出現(xiàn)負值。同時，總膽紅素測定值基本無變化，由于間接膽紅素不是直接測定項目，其結果為總膽紅素值減去直接膽紅素的值換算出來，因此間接膽紅素出現(xiàn)假性增加的結果。且隨著溶血程度的加重，偏離程度也會加深。再者，血清中的結合膽紅素可直接與重氮試劑反應生成偶氮膽紅素，而非結合膽紅素需要加速劑方可與重氮試劑反應生成偶氮膽紅素。溶血后大量的血紅蛋白可競爭性的抑制直接膽紅素與重氮試劑反應而生成的偶氮膽紅素減少，也還可以被亞硝酸氧化為高鐵血紅蛋白干擾吸光度的測定[2]，導致直接膽紅素測定結果低于真值。此外，當血液離體后，其生物活性依然存在，標本中單核吞噬系統(tǒng)仍然具有將血紅蛋白轉變?yōu)槲唇Y合膽紅素的能力[3]，使間接膽紅素升高。

綜上所述，標本溶血對膽紅素檢驗結果的影響較大。如何有效的減少溶血對膽紅素檢測的影響，除了相關醫(yī)護人員在標本采集、運送中避免溶血之外，檢驗人員要做好儀器的定標、質控及校準，在接收標本或上機操作中，如發(fā)現(xiàn)標本為溶血狀態(tài)，應當主動與臨床醫(yī)生聯(lián)系，結合臨床排除體內溶血的可能。若不是體內溶血，建議重新采集標本或備注標本溶血并做合理的誤差分析。只有相關醫(yī)務人員共同把關，才能確保標本檢測結果的質量，幫助臨床醫(yī)生更好的掌握患者的真實病情及指導用藥。

參考文獻：

[1]李懷玉.人為標本溶血對重氮法檢測膽紅素結果的影響[J].廣西醫(yī)學，2005，27（3）：369-370.

[2]陳美舟，蔡嘯.常見分析前因素對臨床生化日常檢驗項目的影響[J].內蒙古中醫(yī)藥，2012，7：92-93.

[3]科溫主編，胡金麟主譯.病理生理學手冊[M].第1版.北京：科學出版社，2002：585.

編輯/丁一