張國林

1.蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，江蘇蘇州 215000；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210000

藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制影響因素分析

張國林1,2

1.蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，江蘇蘇州 215000；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210000

藥品微生物檢驗(yàn)是藥品質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，也是保障公共用藥安全的重要途徑。微生物檢驗(yàn)結(jié)果是進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)調(diào)查、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和風(fēng)險(xiǎn)管理的重要參考指標(biāo)，也是改善過程控制效果的重要依據(jù)。該文從藥品微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)檢測(cè)方法、菌種與培養(yǎng)基、環(huán)境控制和儀器設(shè)備等方面闡述藥品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的影響因素。

微生物檢驗(yàn)；質(zhì)量控制；影響因素；風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；假陽性或假陰性

藥品微生物控制是藥品質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，微生物檢驗(yàn)結(jié)果是進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)調(diào)查、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和風(fēng)險(xiǎn)管理的重要參考指標(biāo)[1-2]。不同于理化檢驗(yàn)，微生物檢驗(yàn)屬于活體檢驗(yàn)，結(jié)果容易受到多種內(nèi)外因素的影響，如檢驗(yàn)環(huán)境、培養(yǎng)基質(zhì)量、菌種活力等。2015年版中國藥典（以下稱 “新版藥典”）已經(jīng)解決了與ICH協(xié)調(diào)案的協(xié)調(diào)問題，達(dá)到了一部、二部、三部通則的統(tǒng)一，實(shí)現(xiàn)了與國際標(biāo)準(zhǔn)的全面接軌，并強(qiáng)化了對(duì)藥品微生物檢驗(yàn)中操作關(guān)鍵點(diǎn)的控制[3]，而關(guān)鍵點(diǎn)的控制正是藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控的關(guān)鍵方面。在現(xiàn)代的GMP生產(chǎn)條件下，藥品微生物污染屬于小概率事件，且污染具有不均一性的特點(diǎn)，無法通過復(fù)試來確認(rèn)結(jié)論，故目前各國法規(guī)均要求對(duì)異常結(jié)果（out of specification，OOS）進(jìn)行有條件復(fù)試[4]。 因此，分析檢驗(yàn)異常結(jié)果的來源、控制影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素顯得十分重要。探索影響微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的相關(guān)因素，避免假陽性或假陰性的出現(xiàn)對(duì)提供準(zhǔn)確、可靠結(jié)論、進(jìn)行有效過程控制和風(fēng)險(xiǎn)管理具有重要的價(jià)值。該文從標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)檢測(cè)方法、菌種與培養(yǎng)基、環(huán)境控制和儀器設(shè)備等方面闡述藥品微生物檢驗(yàn)的影響因素。

1 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與方法

確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)與方法的現(xiàn)行有效是進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)工作的首要任務(wù)。目前國家食品藥品監(jiān)督管理總局也制定了《藥品標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》（目前為征求意見稿階段）來規(guī)范藥品標(biāo)準(zhǔn)的制定和修訂工作。藥品標(biāo)準(zhǔn)涉及國家標(biāo)準(zhǔn)、藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)、各省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理部門制定的地方藥材標(biāo)準(zhǔn)、中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)、醫(yī)療制劑標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及國外標(biāo)準(zhǔn)等。標(biāo)準(zhǔn)與方法既要強(qiáng)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性，也要統(tǒng)籌可操作性。新版藥典解決了與ICH協(xié)調(diào)案的協(xié)調(diào)問題，實(shí)現(xiàn)了與國際藥典的有效統(tǒng)一。同時(shí)，新版藥典對(duì)檢出控制菌的鑒定手段有了理念上的重大轉(zhuǎn)變，強(qiáng)調(diào)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)進(jìn)行微生物的鑒定。雖然未對(duì)方法進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)定，但對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制提出了更高的要求。藥品的生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)方法以及相關(guān)的質(zhì)量控制技術(shù)要求屬于藥品的通用技術(shù)要求，應(yīng)當(dāng)制定國家標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，對(duì)于已批準(zhǔn)上市生產(chǎn)的藥品國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)由國家藥品委員會(huì)對(duì)需要修訂的標(biāo)準(zhǔn)組織修訂。經(jīng)過多年的改進(jìn)，藥品微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)與方法在不斷完善，微生物限度及無菌檢查的方法學(xué)驗(yàn)證資料也在不斷充實(shí)，但在實(shí)際工作中仍碰到一些標(biāo)準(zhǔn)與方法在操作上的具體問題，舉例如下。

標(biāo)準(zhǔn)不明或不完善。在實(shí)際工作中曾接觸到乙醇的微生物限度檢查的委托檢驗(yàn)，但生產(chǎn)企業(yè)無法提供具體的用途與檢驗(yàn)檢測(cè)方法和標(biāo)準(zhǔn)，故在進(jìn)行控制菌檢驗(yàn)時(shí)將檢查項(xiàng)目確定為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌。進(jìn)行控制菌檢查時(shí)通常在供試液制備完成后應(yīng)進(jìn)行預(yù)增菌，然后進(jìn)行選擇性培養(yǎng)基分離與鑒定，但實(shí)際工作中相關(guān)企業(yè)提供的方法學(xué)驗(yàn)證資料中竟有采用平皿法進(jìn)行控制菌檢查的實(shí)例。另外，進(jìn)行中藥制劑的微生物限度檢驗(yàn)時(shí)通常需要根據(jù)工藝處方的“制法”以確認(rèn)是否進(jìn)行大腸菌群或耐膽鹽革蘭陰性菌和沙門菌（新版藥典）的檢查。通常情況下藥品標(biāo)準(zhǔn)里都包含“制法”，但部分品種中不包含此項(xiàng)。在無法及時(shí)獲得相關(guān)資料時(shí)，應(yīng)采用從嚴(yán)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)方法無法在特定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，新版藥典提供了藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，為微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室出于各種原因的如成本、生產(chǎn)量、快速簡(jiǎn)便及提高質(zhì)量等采用非藥典方法提供了依據(jù)。

樣品供試液均勻制備是取得準(zhǔn)確、可靠檢驗(yàn)結(jié)果的首要步驟。微生物限度檢查供試液制備的主要目的是將供試品中的微生物提取并盡量分散均勻。當(dāng)供試品無法制備成均一溶液時(shí)，在制備供試液進(jìn)行下一步檢查前應(yīng)用力震蕩，使供試品中的微生物盡量分散均勻。對(duì)水不溶性供試品供試液的制備需根據(jù)樣品的特性采取合理的方法。如貼膏劑供試品無法制備成均一溶液，通常將其黏貼面上貼一層多孔紗布劇烈震蕩，盡量分散后再進(jìn)一步試驗(yàn)；進(jìn)行敷料類供試品微生物限度檢查時(shí)應(yīng)在無菌條件下將供試品剪成盡量的小塊再進(jìn)行下一步操作。

進(jìn)行薄膜過濾法檢查時(shí)抑菌性的消除程度是影響檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素因素，故需要對(duì)沖洗量、沖洗次數(shù)及流速等進(jìn)行合理控制。合理的沖洗量一方面可以有效去除樣品的抑菌活性，同時(shí)也有利于對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確判定。采用薄膜過濾法進(jìn)行抗生素檢查是消除其抑菌活性的主要手段，但進(jìn)行脂肪乳檢查時(shí)則主要考慮的是利于結(jié)果觀察。該研究在進(jìn)行中長(zhǎng)鏈脂肪乳無菌檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)沖洗量相差100 mL時(shí)無菌濾筒中殘余中長(zhǎng)鏈脂肪乳對(duì)最終結(jié)果的觀察影響差異非常明顯。薄膜過濾法沖洗量也不宜過大或過濾壓力過大，以避免造成微生物的活性下降甚至死亡或破壞濾膜的完整性。沖洗液的流速要合理控制，尤其是顆粒較大容易堵塞過濾孔的供試品，如中長(zhǎng)鏈脂肪乳。若為增大過濾速度而增大蠕動(dòng)泵的速率，則可能造成濾膜穿孔而造成結(jié)果的無效。藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)同品種的批量檢驗(yàn)供試品建立針對(duì)品種的可執(zhí)行的SOP是有益的嘗試。

合理的陽性與陰性對(duì)照是保證檢驗(yàn)方法準(zhǔn)確和結(jié)果準(zhǔn)確的重要手段。陰性對(duì)照可以有效地排除供試品以外的因素對(duì)結(jié)果造成的影響，而陽性對(duì)照是確保所采用的方法適合特定品種檢驗(yàn)的需要。雖然目前美國藥典對(duì)無菌檢查的陽性對(duì)照無要求，但在目前接觸到的微生物檢查方法來看陽性對(duì)照是必須的。例如在進(jìn)行抗生素檢驗(yàn)后一旦溶解抗生素的容器清洗不徹底（雖然發(fā)生的概率極低），殘留的抗生素會(huì)影響下批次供試品中微生物的檢出。

2 潔凈操作環(huán)境

新版藥典對(duì)微生物檢查環(huán)境最終確定為“實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合無菌檢查/微生物限度檢查的要求”，與2010年版中國藥典的論述有了一定的變化。考慮到檢驗(yàn)環(huán)境應(yīng)不低于生產(chǎn)關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境的原則，為確保藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的權(quán)威性，藥檢機(jī)構(gòu)應(yīng)將無菌檢驗(yàn)的環(huán)境條件控制在B級(jí)背景的A級(jí)層流環(huán)境下，或采用無菌隔離器進(jìn)行檢驗(yàn)。

潔凈室設(shè)計(jì)、布局與性能確認(rèn)。微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和布局應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)設(shè)備的安裝、良好的微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，避免環(huán)境對(duì)樣本的污染以及菌種之間的交叉污染，并防止有害生物因子污染環(huán)境。通常微生物限度室、無菌室、抗生素檢定室及陽性操作室應(yīng)從空間上進(jìn)行分離，防止相互之間交叉污染?；谏锇踩慕嵌?，陽性室空調(diào)直排系統(tǒng)應(yīng)獨(dú)立設(shè)置，并維系與相鄰房間的負(fù)壓狀態(tài)。該研究在進(jìn)行轄區(qū)內(nèi)醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)潔凈環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)部分陽性潔凈室仍未設(shè)計(jì)為負(fù)壓，部分潔凈室雖然設(shè)計(jì)為負(fù)壓，但未選擇合適的負(fù)壓壓差表，造成壓差顯示不正確。潔凈區(qū)的墻壁、地面應(yīng)光滑、平整無裂縫，接口嚴(yán)密，無顆粒脫落。建筑材料應(yīng)利于清潔、消毒和滅菌，以減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。潔凈區(qū)高效過濾器的額定風(fēng)量與空調(diào)機(jī)組的性能相匹配，確保潔凈室內(nèi)懸浮粒子濃度保持在較低的水平。由于微生物通常附著于懸浮粒子上，空調(diào)凈化系統(tǒng)的優(yōu)劣也直接影響環(huán)境中微生物的控制效果。另外，除了陽性室應(yīng)維持負(fù)壓外，不同潔凈度的潔凈室之間應(yīng)保持合理的壓差梯度。

藥品微生物檢查潔凈區(qū)應(yīng)定期進(jìn)行清潔和消毒，并在日常使用過程中進(jìn)行潔凈環(huán)境、表面微生物等的監(jiān)測(cè)。由于潔凈環(huán)境與外部普通環(huán)境會(huì)有人員和物料的交流，通常無法保證絕對(duì)的無菌?，F(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)不同潔凈度級(jí)別的環(huán)境微生物限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了相應(yīng)的規(guī)定。國家標(biāo)準(zhǔn)通常為最低的要求，在日常的使用過程中要加強(qiáng)對(duì)潔凈區(qū)生物因子變化的趨勢(shì)性分析，并設(shè)立警戒限度和糾偏限度。在潔凈室風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)控制中，也要將統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法納入其中。統(tǒng)計(jì)學(xué)中通常將（x±2SD）設(shè)為警戒線，（x±3SD）設(shè)為行動(dòng)線（糾偏限）。 陳偉盛等[5]通過對(duì)潔凈環(huán)境的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)現(xiàn)了對(duì)潔凈室的污染評(píng)估和風(fēng)險(xiǎn)控制，并設(shè)立了實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)的警戒限。當(dāng)環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果超過警戒限度或糾偏限度時(shí)應(yīng)采取相應(yīng)的措施。同時(shí)，當(dāng)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果出現(xiàn)趨勢(shì)性變化時(shí)也應(yīng)分析原因并采取相應(yīng)的措施。雖然潔凈環(huán)境的控制能夠有效降低微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，但并不能完全排除。由于微生物污染發(fā)生的小概率性和不均一性特點(diǎn)，藥品微生物檢測(cè)過程中通常進(jìn)行有條件的復(fù)試。因此，強(qiáng)化檢出菌的鑒定與溯源、排除外部環(huán)境因素對(duì)結(jié)果的影響顯得十分必要。目前藥檢系統(tǒng)已經(jīng)開始逐步建立環(huán)境菌庫[1,6-10]，該研究也收集了近年來無菌檢查環(huán)境的微生物并初步建立的無菌檢查環(huán)境菌數(shù)據(jù)庫。

3 培養(yǎng)時(shí)間與計(jì)數(shù)

培養(yǎng)時(shí)間。藥品中微生物通常受到不同程度的損傷或抑制，活力相對(duì)較差，恢復(fù)生理狀態(tài)至長(zhǎng)成肉眼可見的菌落需要一定的時(shí)間。中國藥典中規(guī)定需氧菌總數(shù)需培養(yǎng)3～5 d，霉菌和酵母菌培養(yǎng)5～7 d觀察。因此，為了使樣品中的微生物充分生長(zhǎng)，需培養(yǎng)5d（需氧菌）或7 d（霉菌和酵母菌）。當(dāng)需要時(shí)，要適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。但部分微生物在計(jì)數(shù)平板上會(huì)呈現(xiàn)蔓延式生長(zhǎng)，影響最后的計(jì)數(shù)結(jié)果判定。為了避免蔓延生長(zhǎng)造成的計(jì)數(shù)誤差，通常需要逐日觀察。但應(yīng)當(dāng)注意的是霉菌培養(yǎng)過程中若要觀察，應(yīng)小心輕放，避免孢子分散后重新長(zhǎng)出菌落影響結(jié)果。新版藥典的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)采用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，其對(duì)細(xì)菌無明顯的抑制作用，但由于霉菌和酵母菌限度標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)較低，因此當(dāng)計(jì)數(shù)結(jié)果有異議時(shí)應(yīng)加驗(yàn)證量的抗生素重新進(jìn)行計(jì)數(shù)確認(rèn)。應(yīng)當(dāng)指出的是當(dāng)進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)應(yīng)在藥典規(guī)定的最短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)計(jì)數(shù)，即需氧菌總數(shù)培養(yǎng)3 d，霉菌和酵母菌培養(yǎng)5 d觀察。

微生物限度檢查通常采用不同稀釋級(jí)進(jìn)行分別計(jì)數(shù)并進(jìn)行結(jié)果分析。由于微生物在供試液中的分布特點(diǎn)導(dǎo)致其不同稀釋級(jí)的計(jì)數(shù)結(jié)果可能存在誤差，不完全一致。與以往藥典規(guī)定不同的是新版藥典要求取最高的平均菌落數(shù)進(jìn)行報(bào)告。但應(yīng)當(dāng)指出，不同稀釋級(jí)計(jì)數(shù)結(jié)果存在較大的差異性時(shí)應(yīng)首先分析造成的原因。例如當(dāng)樣品存在較強(qiáng)的抑菌性而未完全消除時(shí)，最終高稀釋級(jí)的菌落計(jì)數(shù)會(huì)明顯多于低稀釋級(jí)的菌落數(shù)，造成結(jié)果判定的錯(cuò)誤。新版藥典對(duì)通用的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為指數(shù)形式，如104 cfu可接受的最大標(biāo)準(zhǔn)為20 000 cfu。但對(duì)于品種項(xiàng)下的規(guī)定或限度標(biāo)準(zhǔn)中丸劑的3×104 cfu應(yīng)為具體數(shù)值。

4 復(fù)試與重試問題

在現(xiàn)代GMP的生產(chǎn)條件下，藥品受到微生物污染是高度隨機(jī)的小概率事件。同時(shí)，樣品微生物污染也是高度不均一的。因此，當(dāng)出現(xiàn)超標(biāo)結(jié)果或結(jié)果異常時(shí)需要展開回顧性的質(zhì)量調(diào)查。若可以排除外在的因素影響，則樣品不得復(fù)試。但是當(dāng)分析發(fā)現(xiàn)操作過程中影響結(jié)果的人員、試劑、環(huán)境、方法等不符合規(guī)定時(shí)應(yīng)進(jìn)行調(diào)查分析，確定是上述因素引起的結(jié)果異常而非樣品本身原因時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重試。

5 人員與儀器設(shè)備

隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，各種新型的儀器不斷出現(xiàn)，儀器在微生物檢驗(yàn)工作中的重要性越來越得到體現(xiàn)[2]。檢測(cè)工作要使用計(jì)量檢定合格的儀器設(shè)備。但在實(shí)際工作中可能出現(xiàn)計(jì)量部門無法進(jìn)行計(jì)量?jī)x器，如全自動(dòng)微生物生化鑒定分析儀。對(duì)計(jì)量部門當(dāng)前無法計(jì)量的儀器，可以采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)分析判定其準(zhǔn)確性，如全自動(dòng)微生物生化鑒定分析儀可以采用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行驗(yàn)證確認(rèn)。壓力滅菌器是培養(yǎng)基除菌的重要設(shè)備，也是影響檢驗(yàn)結(jié)果、保證生物安全的重要設(shè)備。但高壓滅菌器性能不佳或使用不當(dāng)會(huì)對(duì)結(jié)果造成誤差，如壓力滅菌器升溫緩慢會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基過熱造成過度滅菌，破壞培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力。人員素質(zhì)是微生物檢驗(yàn)質(zhì)量第一位的影響因素。從事微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)具備微生物相關(guān)的基礎(chǔ)理論知識(shí)和試驗(yàn)技能，應(yīng)具有醫(yī)藥學(xué)相關(guān)的理論知識(shí)，并不斷接受新理論、新方法的技能培訓(xùn)。由于微生物檢驗(yàn)工作的特殊性，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn)。對(duì)特定崗位人員從事新工作時(shí)需要進(jìn)行考核和授權(quán)，以確認(rèn)檢驗(yàn)人員能夠適應(yīng)新的崗位職責(zé)。同時(shí)，應(yīng)定期組織開展人員比對(duì)、能力驗(yàn)證、內(nèi)審及使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等以提高檢驗(yàn)人員的綜合素質(zhì)。對(duì)于人員的培訓(xùn)、考核等均應(yīng)記錄并歸檔。

6 培養(yǎng)基、菌種與生物安全

培養(yǎng)基是進(jìn)行微生物檢測(cè)與分析的物質(zhì)基礎(chǔ)，選擇合適的培養(yǎng)基品牌及制備和保存方法是提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的重要措施。但目前市售的培養(yǎng)基質(zhì)量參差不齊。培養(yǎng)基在使用前除進(jìn)行外觀驗(yàn)收（如顏色、是否結(jié)塊）外，應(yīng)進(jìn)行適用性檢查，以確認(rèn)滿足特定用途要求。目前中國食品藥品檢定研究院已提供大部分藥品對(duì)照培養(yǎng)基供培養(yǎng)基適用性檢查實(shí)驗(yàn)。但也有個(gè)別培養(yǎng)基未查詢到對(duì)照培養(yǎng)基的出售，如血平板。該研究認(rèn)為對(duì)無法獲得對(duì)照培養(yǎng)基的培養(yǎng)基適用性檢查時(shí)可以采用標(biāo)準(zhǔn)菌株或典型菌株進(jìn)行檢查，并可以與目前的主流品牌培養(yǎng)基或上批次在用進(jìn)行比較。鑒于培養(yǎng)基對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，培養(yǎng)基采購時(shí)應(yīng)嚴(yán)格供應(yīng)商資質(zhì)審核，一旦確定后盡量避免不斷更換。新到貨培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行外觀和技術(shù)性驗(yàn)收（可參考SN/T1538和ISO/TS11133），確保培養(yǎng)基的質(zhì)量。新版藥典中無菌檢查用的培養(yǎng)基由硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基并更為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和TSB培養(yǎng)基?？紤]到制藥用水中寡氧微生物的生長(zhǎng)環(huán)境，新版藥典對(duì)純化水檢測(cè)培養(yǎng)基定為R2A。某些特定的培養(yǎng)基應(yīng)采取適當(dāng)?shù)奶幚泶胧?，如糖發(fā)酵培養(yǎng)基分裝容器一般進(jìn)行預(yù)先滅菌；配置過程如需加熱助溶的應(yīng)避免過度加熱，防止顏色變深、瓊脂凝固力或pH值改變；有添加成分時(shí)應(yīng)按照使用說明書要求進(jìn)行操作，并注意充分混勻。適宜的pH值是微生物生長(zhǎng)所必須的條件，但培養(yǎng)基滅菌前后通常pH值會(huì)發(fā)生變化。因此，應(yīng)確保每批培養(yǎng)基滅菌后在25℃條件下pH達(dá)到規(guī)定。瓊脂培養(yǎng)基不得進(jìn)行反復(fù)融化，不得保存于0℃以下條件。另外，應(yīng)密切留意培養(yǎng)基可能的殘留或其他狀態(tài)，如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中的瓊脂可能會(huì)殘留結(jié)塊而影響無菌檢查最終結(jié)果的判斷。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定相應(yīng)的培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序，并對(duì)pH值、穩(wěn)定性、有效期及適用性試驗(yàn)等進(jìn)行常規(guī)監(jiān)控。標(biāo)準(zhǔn)菌株是微生物檢測(cè)過程中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)菌株性狀的典型與否直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)從認(rèn)可的國內(nèi)外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有有關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株（后者僅可作為工作菌株），并于適宜的條件下保存。同時(shí)，在標(biāo)準(zhǔn)菌株的保藏過程中應(yīng)定期對(duì)其進(jìn)行純度分析，并確保生物學(xué)性狀和特性的典型。工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代，以防止菌種發(fā)生變異風(fēng)險(xiǎn)。除了標(biāo)準(zhǔn)菌株外，環(huán)境中常見的污染菌株也可作為培養(yǎng)基適用性檢查的菌株，以利于目標(biāo)性污染菌的檢出。生物安全是微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)密切關(guān)注的問題。對(duì)于菌株（種）、陽性培養(yǎng)物應(yīng)采取適當(dāng)?shù)拇胧ǜ邏簻缇┖笤侔雌胀◤U棄物處理。同時(shí)，過期培養(yǎng)基也應(yīng)考慮基于生物安全的處理措施。

應(yīng)當(dāng)指出的是上述影響因素均屬于內(nèi)部質(zhì)量控制范疇，而在內(nèi)部質(zhì)量控制的基礎(chǔ)上也應(yīng)注意外部質(zhì)量控制的重要性。外部質(zhì)量控制也是藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控的重要方面，能力驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)是檢驗(yàn)檢測(cè)質(zhì)量保證的重要組分，也是對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢測(cè)能力綜合判斷和內(nèi)部質(zhì)量控制效果檢驗(yàn)的重要手段。能力驗(yàn)證是對(duì)人員、儀器設(shè)備、環(huán)境設(shè)施、試劑耗材等的全面考核，有利于實(shí)驗(yàn)室水平的提高和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的不斷改進(jìn)。

7 總結(jié)

藥品微生物控制是藥品質(zhì)量控制的重要方面，微生物的檢測(cè)結(jié)果是進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)管理的重要依據(jù)，也是加強(qiáng)生產(chǎn)及檢驗(yàn)過程控制的重要參考。該文從檢驗(yàn)檢測(cè)方法、標(biāo)準(zhǔn)與方法、菌種、培養(yǎng)基、環(huán)境和儀器設(shè)備等方面對(duì)其可能影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了綜合分析，對(duì)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制與提高提供了一定參考。但由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，影響藥品微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素還有很多。因此，要不斷探索影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素，加強(qiáng)實(shí)施實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部質(zhì)量控制，持續(xù)改進(jìn)，為微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性提供依據(jù)，為提高藥品質(zhì)量控制和監(jiān)管提供支持。

[1]丁勃,劉艷,孫銅,等.中藥口服液微生物污染溯源分析及污染風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)價(jià)與控制[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2016,47(10):1311-1315.

[2]劉銳萍,王峰,劉珊珊,等.食品、藥品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013,25(7):847-850.

[3]胡昌勤.藥品微生物控制現(xiàn)狀與展望[J].中國藥學(xué)雜志.2015,50(20):1747-1751.

[4]楊燕,孫夢(mèng)家,蔣波,等.藥品無菌檢查中污染微生物的鑒定與oos調(diào)查分析[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2017,47(12):1559-1563.

[5]陳偉盛,朱榮峰,關(guān)倩明.統(tǒng)計(jì)分析在潔凈室污染評(píng)估及風(fēng)險(xiǎn)分析中的應(yīng)用研究[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014,45(10):1004-1008.

[6]陳偉盛,關(guān)倩明,朱榮峰,等.藥品微生物限度檢查中微生物污染的鑒定和溯源分析[J].藥物分析雜志，2014,34(1):58-63.

[7]范一靈,蔣波,房蕊,等.藥品無菌檢查中微生物污染的鑒定和污染溯源分析[J].藥物分析雜志，2011,31(6):1067-1072.

[8]馮震,鐘瑋,劉冬玲,等.復(fù)方益肝靈制劑中檢出微生物的分型溯源與產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].藥物分析雜志，2015,35(12):2083-2088.

[9]戶美玲，陳佩，嚴(yán)東珍,等.建立潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫與無菌藥品gmp生產(chǎn)過程控制的探討[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2013,41(3):33-36.

[10]鄭小玲,王征南,王知堅(jiān),等.藥品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境菌庫的建立[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2015,32(7):847-850.

Analysis of Influence Factors of Laboratory Quality Control of Drug Microbiology Test

ZHANG Guo-lin1,2
1.Center for Drug Control and Testing,Suzhou,Jiangsu Province,215000 China;2.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing,Jiangsu Province,210000 China

The drug microbiology test is an important link of drug quality control and it is also the important way to ensure the public medication safety,and the microbiological test results are the important reference indexes of risk survey,risk evaluation and risk management and an important basis for improving the course control effect,and the paper elaborates the influence factors of drug microbiological test quality from the test standards,test and inspection method,strains and culture medium and environment control and instrument.

Microbiology test;Quality control;Influence factors;Risk evaluation;False positive or false negative

R95

A

1672-5654（2017）07（a）-0026-04

2017-04-09）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.19.026

蘇州市科技發(fā)展計(jì)劃 （應(yīng)用基礎(chǔ)研究-醫(yī)療衛(wèi)生）項(xiàng)目（SYSD201425）。

張國林（1983-），男，山東青州人，博士，副主任藥師，主要從事藥品質(zhì)量控制方面的工作。