朱曉明

（遼寧省葫蘆島市動物疫病預(yù)防控制中心125000）

淺析影響ELISA 實(shí)驗結(jié)果因素

朱曉明

（遼寧省葫蘆島市動物疫病預(yù)防控制中心125000）

ELISA是實(shí)驗室檢測抗體最常用的檢測方法，具有靈敏性高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，不需要特殊儀器設(shè)備就可以完成檢測工作。目前大部分實(shí)驗室檢測都使用廠家生產(chǎn)的成品ELISA試劑盒，看似簡單的操作，其中存在著復(fù)雜的反應(yīng)，很多因素都會影響ELISA的實(shí)驗結(jié)果。下面就對影響ELISA實(shí)驗結(jié)果的因素進(jìn)行總結(jié)。

1 樣品

樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實(shí)驗結(jié)果。可以用ELISA來檢測的樣品很多，根據(jù)檢測項目不同可以是血清、全血、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣品，應(yīng)避免溶血，溶血可能會增加非特異性顯色，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。血清樣品的反復(fù)凍融會使血清中的抗體效價下降，所以需要多次檢測的血清樣品，如在5d內(nèi)檢測完，可4℃保存，如需長時間檢測，可進(jìn)行分裝凍存。樣品如被細(xì)菌污染腐敗，可能會導(dǎo)致假陽性。

2 溫度和時間

抗原和抗體反應(yīng)需要適宜的溫度和反應(yīng)時間，溫度和時間是ELISA反應(yīng)中最重要的條件。溫度控制主要在試劑盒使用前一定要提前半小時左右取出，恢復(fù)至工作溫度，恒溫箱要提前打開，設(shè)定到反應(yīng)溫度，以保證反應(yīng)速度。在溫度保證的前提下，時間的控制至關(guān)重要，尤其是底物顯色的時間控制，顯色時間不足或過長會導(dǎo)致實(shí)驗不成立，無法對檢測結(jié)果進(jìn)行判斷。

3 人員操作

ELISA成品試劑盒為檢測工作提供了方便，按照說明書進(jìn)行操作就可以完成實(shí)驗，但人為操作時候很多細(xì)節(jié)也會導(dǎo)致實(shí)驗誤差。

3.1 包被

一些ELISA反應(yīng)板需要自行進(jìn)行包被處理，沒有進(jìn)行包被，或包被液使用與檢測項目不同都會使實(shí)驗失敗。包被時，未進(jìn)行震蕩，孔底未被包被液全部覆蓋會導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。

3.2 反應(yīng)液稀釋

稀釋液使用錯誤或稀釋比例不正確會導(dǎo)致實(shí)驗失敗或結(jié)果不準(zhǔn)確。

3.3 洗板

人工洗板時，棄去洗滌液時方法不當(dāng)，易使各孔液體相互流入，導(dǎo)致假陽性；洗滌液使用量和洗滌次數(shù)過少導(dǎo)致洗滌不徹底，洗板后未拍板或拍不干凈都會影響實(shí)驗結(jié)果。

3.4 其他

封板膜封閉不嚴(yán)或開啟時孔內(nèi)液體蒸發(fā)、震出可導(dǎo)致各孔相互污染；操作時接觸到ELISA板底導(dǎo)致透光度改變，影響酶標(biāo)儀測量結(jié)果；加樣時未注意移液器吸頭堵塞或漏氣導(dǎo)致加液量不準(zhǔn)確；加不同試劑時未更換吸頭等。

4 設(shè)備

儀器設(shè)備是ELISA實(shí)驗的基礎(chǔ)，常用的相關(guān)儀器設(shè)備包括移液器、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)和恒溫箱等。所有設(shè)備都需要進(jìn)行檢驗校準(zhǔn)，保證準(zhǔn)確性和精確度。移液器的使用要盡可能選擇所需加液量接近最大量程，并正確使用，減少實(shí)驗誤差；酶標(biāo)儀要提前開機(jī)預(yù)熱，保證光源穩(wěn)定；洗板機(jī)要檢查加液孔是否通暢，保證加液量；恒溫箱要提前開機(jī)，開、關(guān)門要快速，保證反應(yīng)溫度。

5 試劑

試劑盒要根據(jù)要求進(jìn)行保存，并保證在有效期內(nèi)使用，使用前應(yīng)平衡到室溫。新購入的試劑盒要進(jìn)行校驗，檢查實(shí)驗是否成立，不同的試劑盒或不同批號的試劑不可混用。