劉波劉娜孔令靜張棟宦者威陳月鋒谷桂平楊俊青

（1，山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司 250022；2，山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

一例蛋鴨黃病毒病診治

劉波1劉娜1孔令靜1張棟2宦者威1陳月鋒1谷桂平1楊俊青1

（1，山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司 250022；2，山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250022）

為摸清臨邑某蛋鴨場(chǎng)出現(xiàn)產(chǎn)蛋下降和死亡的原因，對(duì)病死鴨進(jìn)行剖檢，采取病變臟器組織，應(yīng)用RT-PCR方法對(duì)4種病原進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示：所采樣品中，A型流感病毒、新城疫病毒、鴨瘟病毒均為陰性，黃病毒為陽(yáng)性。結(jié)合臨床癥狀、剖檢病變及檢測(cè)結(jié)果表明，引起此次鴨場(chǎng)發(fā)病的主要病原是黃病毒。

蛋鴨；產(chǎn)蛋下降；黃病毒；PT-PCR

自2010年春季以來(lái)，浙江、山東、江蘇、安徽等省份鴨飼養(yǎng)場(chǎng)爆發(fā)了一種以蛋鴨、種鴨產(chǎn)蛋急劇下降、采食減少或廢絕為特征的傳染病，產(chǎn)蛋率從90%降到10%以下[1]。我國(guó)研究人員對(duì)其病原進(jìn)行分離、形態(tài)學(xué)觀察、理化特性測(cè)定、RT-PCR檢測(cè)及序列分析明確該病原為黃病毒科的一個(gè)新成員[2]。該病原屬于黃病毒科黃病毒屬蚊媒病毒的恩塔亞病毒群，與坦布蘇病毒親緣關(guān)系最近，暫定為該病毒的一個(gè)分離株，故該病又稱(chēng)為鴨坦布蘇病毒病。本病流行范圍廣，發(fā)病急且發(fā)病率高，但死亡率較低，臨床應(yīng)用多種藥物均不能有效控制，給養(yǎng)鴨業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。下面就某蛋鴨場(chǎng)為例進(jìn)行綜合診斷及探討，為獸醫(yī)工作者診斷此病提供一定的依據(jù)。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2016年12月，臨邑某蛋鴨場(chǎng)養(yǎng)殖蛋鴨39000只，日齡130d，該鴨群出現(xiàn)不同程度的發(fā)病，產(chǎn)蛋量下降約3成。病鴨精神沉郁，采食量及飲水量均減少，零星死亡。部分患鴨不愿走路，反應(yīng)遲鈍，排綠色水樣稀糞。個(gè)別嚴(yán)重的病鴨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，站立不穩(wěn)，癱瘓。

2 剖檢變化

對(duì)病死鴨剖檢發(fā)現(xiàn)，病變主要為卵泡變性、出血、壞死（圖1)，肺出血，肝臟腫大，表面有大量出血點(diǎn) （圖2)，脾臟腫大、出血、壞死 （圖3)，小腸環(huán)狀腫脹 （圖4)，輸卵管無(wú)明顯眼觀病變，其他臟器無(wú)明顯的眼觀病變。

圖1 卵泡出血、變性、壞死圖

圖2 肺臟出血、卵泡出血、變性

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 材料與方法

3.1.1 試劑及儀器

A型流感病毒通用型熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒和新城疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自凱杰生物工程有限公司；鴨瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自生科尚儀有限公司；禽黃病毒核酸檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科前生物股份有限公司；Thermo高速冷凍離心機(jī)、生物安全柜、全自動(dòng)核酸提取儀、熒光PCR儀、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、移液器。

3.1.2 檢測(cè)方法及步驟

無(wú)菌采集病死鴨的卵泡、脾臟、肺臟和氣管等器官[3]。將臟器剪碎后，研磨并勻漿，反復(fù)凍融4次，置于4℃，8000r/min離心5min，取上清液0.3ml于離心管中，將離心管架插入全自動(dòng)核酸提取儀中，提取核酸，做模板備用。病毒核酸的擴(kuò)增按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。將A型流感病毒、新城疫病毒檢測(cè)管置于熒光PCR儀中，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增；將鴨瘟病毒檢測(cè)管置于熒光PCR儀中，進(jìn)行擴(kuò)增；將黃病毒檢測(cè)管按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增，電泳，最后進(jìn)行凝膠成像系統(tǒng)觀察。

圖3 脾臟腫大 (A:腫大B:正常)

圖4 小腸腫脹 （箭頭所指處）

3.2 結(jié)果與分析

3.2.1 A型流感病毒、新城疫病毒RT-PCR和鴨瘟病毒PCR檢測(cè)結(jié)果分析

A型流感病毒、新城疫病毒、鴨瘟病毒陽(yáng)性對(duì)照Ct值分別為9.54、14.81、18.55，均呈S型特異性曲線，陰性對(duì)照Ct值均為0，樣品Ct值均為0，如圖5、圖6所示，A型禽流感病毒、新城疫病毒、鴨瘟病毒檢測(cè)結(jié)果均呈陰性，表明樣品未感染上述3種病毒。

圖5 A型流感病毒和新城疫病毒熒光RT-PCR

圖6 鴨瘟病毒熒光PCR

圖7 黃病毒RT-PCR結(jié)果

3.2.2 黃病毒RT-PCR檢測(cè)結(jié)果分析

如圖7所示，樣品擴(kuò)增后在488bp處出現(xiàn)一條與陽(yáng)性對(duì)照大小一致的電泳條帶，這表明該樣品感染了黃病毒。

3.2.3 結(jié)果

結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化以及實(shí)驗(yàn)室病毒RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，可以明確該蛋鴨場(chǎng)的發(fā)病原因是由鴨黃病毒所引起的。

4 討論

（1)造成蛋鴨產(chǎn)蛋異常除了飼養(yǎng)管理和環(huán)境因素等誘因外，疾病感染是一個(gè)十分重要的影響因素[4]。有關(guān)引起種鴨和蛋鴨出現(xiàn)產(chǎn)蛋異常的病原報(bào)道日漸增多[5]，但該蛋鴨群A型流感病毒、新城疫病毒和鴨瘟病毒檢測(cè)均呈陰性，而黃病毒檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

（2)本病目前尚無(wú)有效治療方法和免疫預(yù)防制劑，對(duì)于發(fā)病鴨群可使用清熱解毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的的中草藥 （板藍(lán)根、穿心蓮、黃芪多糖等)，同時(shí)添加抗菌藥物控制繼發(fā)感染。徐可樹(shù)等報(bào)道，氧氟沙星配合干擾素對(duì)黃病毒增殖具有抑制作用[6]。

（3)在鴨群管理方面，改善鴨舍的飼養(yǎng)環(huán)境、降低飼養(yǎng)密度，保證鴨舍溫度、濕度和合理通風(fēng)，為其健康創(chuàng)造有利條件。加強(qiáng)生物安全措施，定期消毒，尤其是各種生產(chǎn)用具和運(yùn)輸車(chē)輛以及種蛋的消毒。做好鴨場(chǎng)的衛(wèi)生管理，墊料的消毒及處理、病死鴨的無(wú)害化處理等工作[7]。

[1]李玉峰,馬秀麗,于可響,等.一種從鴨新分離的黃病毒研究初報(bào)[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2011,42(6):885-891.

[2]唐維國(guó),施少華,傅光華,等.一例蛋鴨黃病毒病的診療[J].中國(guó)家禽,2012,34(2)：52-53.

[3]曹貞貞,張存,黃瑜,等.鴨出血性卵巢炎的初步研究[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2010,46(12):3-6.

[4]萬(wàn)春和,施少華,程龍飛,等.一種引起種(蛋)鴨產(chǎn)蛋驟降新病毒的分離與初步鑒定[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,25(6):663-666.

[5]黃瑜,李文楊,程龍飛,等.種（蛋）鴨產(chǎn)蛋異常研究[J].福建畜牧獸醫(yī),2001,23(3):8.

[6]徐可樹(shù),鄒麗.氧氟沙星疊氮胸苷單獨(dú)及與干擾素合用對(duì)黃病毒增殖的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2000,14(9):300.

[7]李玉峰.鴨黃病毒感染研究進(jìn)展[J].中國(guó)家禽,2011,33(17):30-32.