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        中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞增殖分化影響的研究進展

        2017-01-13 07:02:21李文濤
        關(guān)鍵詞:星形膠質(zhì)腦缺血

        高 晗,李文濤

        ·綜述與進展·

        中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞增殖分化影響的研究進展

        高 晗,李文濤

        目前中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞增殖分化的研究較多,研究方法分為體內(nèi)試驗和體外試驗,神經(jīng)干細胞主要分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞(多為星形膠質(zhì)細胞,對少突膠質(zhì)細胞的研究較少)。其促進增殖分化的中藥類型主要有:滋陰、益氣、補腎、活血、清熱解毒等。雖然已發(fā)現(xiàn)許多中藥對神經(jīng)干細胞的增殖分化有調(diào)節(jié)作用,包括中藥單體、單味藥、中藥復(fù)方、中藥制劑等,但是目前對神經(jīng)干細胞的研究仍然比較局限,還需要進一步研究。對2010年以來中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞的增殖分化作用以及相關(guān)機制進行綜述。

        神經(jīng)干細胞;中醫(yī)藥;增殖;分化

        神經(jīng)干細胞(NSCs)是指一類具有自我更新能力和多向分化潛能的細胞,能分化成為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞等眾多神經(jīng)細胞。它的自我更新和多向分化潛能,為治療神經(jīng)性疾病帶來了希望,如何結(jié)合中醫(yī)藥來誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞的增殖分化成為近年來研究的熱點,也為中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究提供了一個新的結(jié)合點。

        1965年, Altman等[1]首次在新生大鼠的海馬齒狀回發(fā)現(xiàn)新生的顆粒細胞, 為神經(jīng)細胞發(fā)生提供了解剖學(xué)證據(jù)。1992年, Reynolds等[2]首先利用神經(jīng)球特殊培養(yǎng)條件, 先后從胎鼠和成鼠紋狀體分離得到神經(jīng)干細胞, 為中樞神經(jīng)性的重建和神經(jīng)的再生提供了一個新的思路,打破了傳統(tǒng)觀念所認為的神經(jīng)損傷后不能再生,只能由星形膠質(zhì)細胞增生,瘢痕組織代替缺失的神經(jīng)元觀念。之后眾多研究證明多種成年哺乳動物腦內(nèi)都存在神經(jīng)干細胞。繼中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)成功分離到NSCs后,1996年Weiss等[3]首次報道成功從成年哺乳動物脊髓內(nèi)分離到了NSCs,隨后,人們先后在大腦、骨組織、軟骨、肺等組織中檢測出由骨髓基質(zhì)誘導(dǎo)分化出成熟神經(jīng)細胞。 NSCs的增殖方式分為對稱性分裂和非對稱分裂。一個NSCs經(jīng)過一次分裂形成兩個完全相同的子細胞,即所謂的增殖性對稱分裂,主要發(fā)生在胚胎神經(jīng)管形成期NSCs數(shù)量急劇增加時;一個NSCs經(jīng)過一次分裂產(chǎn)生兩個不同的子細胞,分別為NSCs和神經(jīng)前體細胞(NPC),后者可在外界刺激因子的作用下可進一步分化,最終分化為各種神經(jīng)細胞,包括神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞等,即非對稱分裂。因此,在神經(jīng)干細胞的增殖過程中給予中藥干預(yù),可以誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞的增殖分化。本文從中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞的增殖作用和分化作用兩個方面進行綜述。

        1 中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞增殖的影響

        1.1 體內(nèi)試驗 陳聘婷等[4]研究丹龍醒腦方對腦缺血再灌注大鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)丹龍醒腦方能改善神經(jīng)缺損癥狀,促進腦缺血后海馬區(qū)和側(cè)腦室室管膜下區(qū) NSCs 增殖,其機制可能與通過上調(diào)缺血再灌注后 Frizzled1、Dvl1 、c-jun 、 c-myc、Hes1和Hes5表達水平,從而促進 Wnt/β-catenin 信號通路下游靶基因 Cyclin D1有關(guān)的表達水平和激活Notch 信號通路有關(guān)[4-6]。

        劉莉[7]研究發(fā)現(xiàn)補陽還五湯可促進局灶性腦缺血后大鼠BrdU表達,并通過調(diào)控CyclinDl、CDK2的表達使神經(jīng)細胞增殖,從而誘導(dǎo)神經(jīng)再生作用,起到神經(jīng)保護作用。俞天虹等[8]研究補陽還五湯中用不同劑量的黃芪對腦缺血后大鼠室管膜下區(qū)NSCs增殖的影響,發(fā)現(xiàn)大劑量黃芪組方的補陽還五湯能顯著促進腦缺血后室下區(qū)NSCs增殖和神經(jīng)功能恢復(fù),以黃芪劑量為120 g 的效果最佳。補陽還五湯能促進中腦功脈閉塞(MCAO)大鼠缺血側(cè) NSCs 遷移,其機制可能是通過上調(diào) SDF-1蛋白的表達水平實現(xiàn)的[9]。

        王倩等[10]研究發(fā)現(xiàn)地黃飲子能促進腦缺血后大鼠神經(jīng)功能恢復(fù),減輕腦水腫,減少腦梗死面積,并升高SDF-1蛋白含量,通過SDF-1/CXCR4信號通路進一步促進海馬區(qū)NSCs增殖,并遷移至缺血損傷區(qū)域分化成神經(jīng)元,修復(fù)缺血區(qū)損傷。

        胡躍強等[11]發(fā)現(xiàn)清熱化瘀方可以促進腦缺血再灌注大鼠缺血半暗帶Nestin與BrdU的表達,且在14 d BrdU陽性細胞數(shù)達到高峰,說明清熱化瘀方可以促進腦缺血大鼠神經(jīng)干細胞的增殖。

        陳巖等[12]觀察丹參酮對腦缺血大鼠室管膜下區(qū)(SVZ)神經(jīng)干細胞增殖的影響發(fā)現(xiàn),丹參酮預(yù)處理能顯著增加腦缺血模型大鼠 SVZ 區(qū)神經(jīng)干細胞的數(shù)量,并維持腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)能力。張毅等[13]研究發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA對腦出血大鼠灶周Nestin、Neun表達具有促進作用,說明丹參酮ⅡA 可誘導(dǎo)腦出血大鼠灶周NSCs增殖并向神經(jīng)元分化。

        李蓉等[14]研究黃芩苷對全腦缺血/再灌注大鼠海馬NSCs增殖的影響,發(fā)現(xiàn)黃芩苷可以使神經(jīng)干細胞增殖,其促進機制可能與上調(diào)全腦缺血后海馬源性生長因子(BDNF)蛋白的表達有關(guān)。

        1.2 體外試驗 林慧敏等[15]發(fā)現(xiàn)毛蕊花糖苷能夠明顯促進成年小鼠腦室下區(qū)神經(jīng)干細胞增殖,其機制可能與化合物激活A(yù)kt 通路有關(guān)。

        萬鳳等[16]研究表明在中風(fēng)等腦損傷情況下,人參皂苷能夠作用于神經(jīng)干細胞巢內(nèi)的星形膠質(zhì)細胞,使星形膠質(zhì)細胞HIF-1α表達上調(diào),啟動下游血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的分泌增加,通過旁分泌的形式作用于NSCs,促進NSCs增殖和分化,從而達到修復(fù)腦損傷的目的。

        辛風(fēng)霞等[17]用CCK-8法檢測黃芪有效組分對NSCs增殖的影響,結(jié)果顯示濃度為0.002 mg/mL的黃芪甲苷、0.02 mg/mL黃芪黃酮對體外培養(yǎng)的NSCs有明顯的增殖作用,且隨著培養(yǎng)時間的延長,BRDU的陽性表達增加,而黃芪多糖對體外培養(yǎng)的NSCs無明顯增殖作用。柴麗娟等[18]培養(yǎng)胎鼠NSCs,BRDU檢測表明黃芪甲苷可誘導(dǎo)NSCs的增殖, 其機制可能與上調(diào)細胞增殖相關(guān)的基因Hes1、Hes5、cyclinD1表達而起作用。而劉柏炎等[19]用WST法檢測細胞增殖情況發(fā)現(xiàn),多個濃度的黃芪甲苷對體外神經(jīng)干細胞的增殖作用并不明顯,且高濃度黃芪甲苷可使培養(yǎng)液中細胞碎片增加,增殖減慢,與上述結(jié)果相悖,可能與不同的實驗方法有關(guān)。

        王凱等[20]通過CCK-8法測定益腎化濁方含藥腦脊液對胎鼠NSCs增殖的影響,結(jié)果顯示益腎化濁方可促進NSCs增殖(在24 h和48 h時OD值增高,72 h時與正常組無明顯差異)。

        陳旭東等[21]研究表明一定程度的缺氧可刺激NSC增殖和向神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化,并導(dǎo)致神經(jīng)元的減少,而當(dāng)歸注射液可減弱由缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)干細胞的增殖和向膠質(zhì)細胞分化的能力,并可緩解神經(jīng)元的減少。

        劉俊琦等[22]將人參總皂苷作用于腦微血管內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞,發(fā)現(xiàn)其可增加中風(fēng)后NSCs向神經(jīng)元定向分化并促進其成熟,可能與人參總皂苷調(diào)控腦微血管內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞VEGF分泌,改善NSCs微環(huán)境有關(guān)。鄭友生等[23]研究表明人參皂苷Rg1可以促進NSCs的生存和增殖,且在2 μmol/L濃度下可以增加NSCs中神經(jīng)球的數(shù)量,在80 mg/kg劑量下大鼠腦組織BRDU表達明顯增加。

        2 中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞分化的影響

        目前所研究的中醫(yī)藥對NSCs分化的影響主要是分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞。腦缺血損傷可以使腦內(nèi)星形膠質(zhì)細胞活化,可以延長低氧條件下細胞存活時間,通過分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子保護受損神經(jīng)細胞,但星形膠質(zhì)細胞的過度膠質(zhì)化會介導(dǎo)加重炎癥反應(yīng),影響受損神經(jīng)元的修復(fù)和功能恢復(fù)。星形膠質(zhì)細胞是如何調(diào)控來發(fā)揮作用,仍需要進一步的研究。

        肖周華[24]研究發(fā)現(xiàn)補陽還五湯具有促缺氧損傷NSCs分化的作用,且更趨向于向神經(jīng)元的分化 ,Wnt1和Wnt3a可能參與了促分化的過程。王凱等[20]體外實驗觀察益腎化濁方含藥腦脊液對NSCs分化的影響,結(jié)果顯示益腎化濁方含藥腦脊液可調(diào)控NSCs向神經(jīng)元分化,抑制其向星形膠質(zhì)細胞分化,該作用可能與抑制JAK2/STAT3通路相關(guān)[25]。 韋云飛等[26]研究發(fā)現(xiàn)黃芪注射液能促進腦缺血大鼠腦組織巢蛋白表達,并促進NSCs分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞,且以神經(jīng)膠質(zhì)細胞為主。Jahanshahi 等[27]研究銀杏提取物對大鼠海馬區(qū)星形膠質(zhì)細胞影響,發(fā)現(xiàn)銀杏提取物對大鼠的預(yù)處理和治療可以減緩由東莨菪堿導(dǎo)致的海馬區(qū)星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量減少,從而對海馬區(qū)星形膠質(zhì)細胞起到保護作用。Matrisciano 等[28]發(fā)現(xiàn)黃芩素能促進NSCs向神經(jīng)元定向分化,其作用機制與調(diào)節(jié)Stat3磷酸化和bHLH信號通路有關(guān)。

        3 影響神經(jīng)干細胞增殖分化中藥的種類

        目前在對神經(jīng)干細胞增殖分化中醫(yī)藥研究中,主要有中藥提取物(如黃芪甲苷、黃芩苷、丹參酮、人參皂苷)、單味藥(如人參、麥冬、黃芪、當(dāng)歸)、中藥復(fù)方(如補陽還五湯、地黃飲子、丹龍醒腦方)及中藥制劑(如復(fù)方丹參注射液、黃芪注射液)。 對神經(jīng)干細胞增殖分化的藥物中,主要分為以下幾類:滋陰、益氣、補腎、活血、清熱解毒等。 曲鐵兵等[29]研究表明補陽還五湯能促進腦缺血大鼠室下區(qū)NSCs增殖、分化和神經(jīng)功能恢復(fù),拆方后分別研究補氣藥和活血藥發(fā)現(xiàn),補氣藥黃芪能促進室下區(qū)NSCs增殖、分化和神經(jīng)功能恢復(fù),但活血藥對神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)功能恢復(fù)無影響,補陽還五湯全方組作用好于補氣組。這些結(jié)果表明,方中補氣藥和活血藥配伍對腦缺血后神經(jīng)發(fā)生有協(xié)同作用,其機制可能與上調(diào) BDNF和 VEGF 蛋白有關(guān)。 胡國恒等[30]總結(jié)補腎中藥對神經(jīng)干細胞的增殖分化的影響,發(fā)現(xiàn)補腎方藥如地黃飲子、六味地黃丸、復(fù)健片、何首烏、龜板和淫羊藿等能夠促進NSCs的增殖與分化,從而保護神經(jīng)系統(tǒng)和促使受損神經(jīng)系統(tǒng)的恢復(fù)。吉云鵬[31]發(fā)現(xiàn)補腎法可改善腎虛大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙、海馬齒狀回(DG)區(qū)細胞超微結(jié)構(gòu)及組織形態(tài)學(xué)病變,促進腎虛大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)干細胞增殖,其作用機制可能是上調(diào)腎虛大鼠海馬DG區(qū)細胞Wntl表達,激活經(jīng)典Wnt信號通路,從而促進海馬神經(jīng)干細胞增殖。 韓輝等[32]通過觀察益氣養(yǎng)陰活血藥物對體外培養(yǎng)腦缺血/再灌注合并高糖培養(yǎng)條件下大鼠神經(jīng)干細胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)腦缺血/再灌注后NSCs增殖顯著增加,細胞活力下降;高糖可抑制NSCs的增殖,降低細胞活力;益氣養(yǎng)陰活血藥物血清可促進NSCs的增殖,提高其活力。

        4 總 結(jié)

        神經(jīng)干細胞的增殖分化能力為神經(jīng)退行性疾病的治療提供了新方向,而如何利用中醫(yī)藥調(diào)控神經(jīng)干細胞的增殖分化成為目前研究的熱點。研究方法分為體內(nèi)實驗和體外實驗,神經(jīng)干細胞主要分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞(多為星形膠質(zhì)細胞,對少突膠質(zhì)細胞的研究較少)。其促進增殖分化的中藥類型主要有:滋陰、益氣、補腎、活血、清熱解毒等。但是目前對神經(jīng)干細胞的研究仍然比較局限,對促進神經(jīng)干細胞增殖分化藥物的研究還很少,且不同實驗小組對相同藥物的研究結(jié)果有差異,可能與不同實驗方法有關(guān)。

        中藥治療有多環(huán)節(jié)、多靶點的作用,在促進神經(jīng)干細胞增殖、向病變部位遷移、分化、修復(fù)神經(jīng)元的缺失和功能損傷過程中發(fā)揮了重要作用,其機制仍需進一步研究。

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        (本文編輯王雅潔)

        上海市科委自然科學(xué)基金(No.15ZR1438800)

        上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中醫(yī)醫(yī)院(上海 200071)

        李文濤,E-mail:lwt1132@163.com

        信息:高晗,李文濤.中醫(yī)藥對神經(jīng)干細胞增殖分化影響的研究進展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2017,15(12):1461-1464.

        R329.2

        A

        10.3969/j.issn.1672-1349.2017.12.011

        1672-1349(2017)12-1461-04

        2016-09-12)

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