陳 玉, 甘 飛,劉 慧，石 寬

(1 中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，武漢 430074；2 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

人面果果實(shí)化學(xué)成分的研究

陳 玉1, 甘 飛1,劉 慧1，石 寬2

(1 中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，武漢 430074；2 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

為研究人面果果實(shí)的化學(xué)成分，利用溶劑提取法，正、反相硅膠柱和半制備高效液相色譜進(jìn)行了分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定.結(jié)果表明：從人面果果實(shí)乙酸乙酯提取物分離得到的7個(gè)化合物，分別鑒定為檸檬酸 (1)、1-甲基檸檬酸 (2)、1,5-二甲基檸檬酸 (3)、3,4-二羥基苯甲酸 (4)、香豆酸 (5)、鄰苯二甲酸二丁酯 (6)、6-羥基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯酸 (7)，其中化合物2、3、7為首次從藤黃屬植物中分離得到.

人面果果實(shí)；化學(xué)成分；單萜

人面果(Garciniaxanthochymus)為藤黃科藤黃屬植物，在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上主要應(yīng)用于清熱解毒、治療痢疾和腹瀉等疾病[1].前期關(guān)于人面果化學(xué)成分的研究表明：人面果主要含有三萜、黃酮、口山酮、二苯甲酮類等化學(xué)成分[2-5]. 本課題組前期對(duì)人面果樹皮抗氧化活性成分進(jìn)行了深入和系統(tǒng)的研究，從樹皮乙酸乙酯提取物分離得到一系列具有異戊烯基取代的口山酮類化合物，其中包括27個(gè)新化合物[6-13].近期發(fā)現(xiàn)人面果果實(shí)乙酸乙酯提取物顯示了較好的α-葡萄糖苷酶抑制活性和很好的促HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗能力，具有一定的抗糖尿病活性[14].為了闡明人面果果實(shí)抗糖尿病物質(zhì)基礎(chǔ)，利用正相、反相硅膠柱色譜法，半制備高效液相色譜法等分離方法，從人面果果實(shí)乙酸乙酯提取物中分離獲得7個(gè)化合物，利用核磁技術(shù)和譜學(xué)方法鑒定其分別為檸檬酸 (1)、1-甲基檸檬酸 (2)、1,5-二甲基檸檬酸 (3)、3,4-二羥基苯甲酸 (4)、香豆酸 (5)、鄰苯二甲酸二丁酯 (6)、6-羥基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯酸 (7).

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

核磁共振波譜儀(Bruker AV-400MHz, Bruker AVANCEIII-500Hz全數(shù)字化超導(dǎo)核磁共振儀，布魯克公司)，高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型，美國戴安公司，VWD, DAD檢測(cè)器)，半制備型色譜柱(YMC-Pack ODS-A, 250 mm×10 mm, 5 μm)，柱色譜用硅膠(200～300目和300～400目，青島海洋化工廠).分析純?nèi)軇┯蓢幖瘓F(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，色譜純?nèi)軇┯刹┡d業(yè)有限公司生產(chǎn).

人面果果實(shí)采購于云南，由西雙版納民族醫(yī)藥研究所趙應(yīng)紅主任藥師鑒定為藤黃科藤黃屬人面果(Garciniaxanthochymus).

1.2 提取與分離

6.18 kg干燥人面果果實(shí)粉碎后用95%乙醇室溫浸泡3次，每次24 h，提取液真空抽濾后減壓旋蒸得乙醇提取物 (2.94 kg).乙醇提取物依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇 (分析純) 萃取得石油醚提取物 (267 g)，乙酸乙酯提取物 (711 g)，正丁醇提取物 (460 g).取乙酸乙酯提取物 (332 g) 經(jīng)正相硅膠柱 (200～300目) 層析分離，用石油醚-乙酸乙酯 (體積比19︰1→ 0︰1) 梯度洗脫，TLC檢測(cè)后合并相似組分，共收集到10個(gè)組分 (Fr.1～Fr.10).Fr.8重結(jié)晶得化合物1 (1.45 g) 和化合物2 (0.75 g).Fr.6重結(jié)晶得化合物3 (0.24 g).Fr.3 (13.31 g) 經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，共收集到10個(gè)組分 (Fr.3.A～Fr.3.J).Fr.3.A (0.3 g) 經(jīng)HPLC[φ(甲醇︰水)= 35︰65] 分離得到4 (14.1 mg)、5 (23.7 mg).Fr.3.F (1.16 g) 經(jīng)正相硅膠(300～400目)共收集得到7個(gè)組分 (Fr.3.F.a～Fr.3.F.g).Fr.3.F.c (0.35 g) 經(jīng)HPLC[φ(甲醇︰水)= 73︰27]分離得到6 (2.5 mg).Fr.3.B (145 mg) 經(jīng)HPLC[φ(甲醇︰水) = 52︰48]分離得到7 (4.7 mg).化合物1～7的結(jié)構(gòu)式見圖1.

圖1 化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compound 1-7

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，分子式為C6H8O7,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 2.86 (2H, d,J=15.6 Hz, -CH2-2a, 4a), 2.95 (2H, d,J=15.6 Hz, -CH2-2b, 4b);13C NMR (100 MHz, acetone-d6)δC:171.7 (C-1, 5), 43.2 (C-2, 4), 73.7 (C-3), 175.0 (3-COOH).化合物1數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，鑒定化合物1為檸檬酸.

化合物2：淡黃色粉末，分子式為C7H10O7,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 3.62 (3H, s, -OMe), 2.83～2.98 (4H, m, -CH2-2, 4);13C NMR (100 MHz, acetone-d6H)δC: 51.9 (-OMe), 170.9 (C-1 ), 43.6 (C-2), 73.6 (C-3), 43.2 (C-4), 171.7 (C-5), 174.9 (3-COOH).化合物2數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，鑒定化合物2為1-甲基檸檬酸.

化合物3：白色粉末，分子式為C8H12O7,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 3.62 (6H, s, -OMe×2), 2.86 (2H, d,J=15.6 Hz, -CH2-2a, 4a), 2.92 (2H, d,J=15.6 Hz, -CH2-2b, 4b);13C NMR (100 MHz, acetone-d6H)δC: 51.9 ( -OMe×2), 170.9 (C-1, 5 ), 43.5 (C-2, 4), 73.6 (C-3), 174.8 (3-COOH).化合物3數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，鑒定化合物3為1,5-二甲基檸檬酸.

化合物4：白色粉末，分子式為C7H6O4,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 7.60 (1H, dd,J=8.4, 1.6 Hz, H-6), 6.91 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 7.56 (1H, d,J=1.6 Hz, H-2), 鑒定化合物4為3, 4-二羥基苯甲酸.

化合物5：淡黃色粉末，分子式為C9H8O3,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 6.35 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8), 7.62 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7), 7.55 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2, 6), 6.90 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3, 5).化合物5數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，鑒定化合物5為香豆酸.

化合物6：黃色粉末，分子式為C16H22O4,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 7.74 (2H, dd,J=3.6, 5.6 Hz, H-3, 6), 7.65 (2H, dd,J=3.6, 5.6 Hz, H-4, 5), 4.27 (4H, t,J=6.6 Hz, -CH2-2′, 2″), 1.71 (4H, m, -CH2-3′, 3″), 1.46 (4H, m, -CH2-4′, 4″ ), 0.95 (6H, t,J=7.4 Hz, -CH3-5′, 5″);13C NMR (100 MHz, acetone-d6)δC:133.5 (C-1, 2), 129.7 (C-3, 6), 132.1 (C-4, 5), 168.1 (C-1′, 1″), 66.0 (C-2′, 2″), 31.4 (C-3′, 3″), 19.9 (C-4′, 4″), 14.1 (C-5′, 5″).化合物6數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，鑒定化合物6為鄰苯二甲酸二丁酯.

化合物7：黃色粉末，分子式為C10H16O3,1H NMR (400 MHz, acetone-d6)δH: 6.77～ 6.81 (1H, m, H-3), 2.16～2.34 (2H, m, -CH2-4), 1.59～1.64(2H, m, -CH2-5), 5.94 (1H, dd,J=10.8, 17.6 Hz, H-7), 5.25 (1H, dd,J=2.0, 17.6 Hz, H-8a), 5.00 (1H, dd,J=2.0, 10.8 Hz, H-8b), 1.79(3H, s, -CH3-9), 1.26 (3H, s, -CH3-10);13C NMR (125 MHz, acetone-d6H)δC:169.2 (C-1), 128.1 (C-2), 143.6 (C-3), 24.3 (C-4), 41.7 (C-5), 72.7 (C-6), 146.5 (C-7), 111.8 (C-8), 12.4 (C-9), 28.5 (C-10).化合物7數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，鑒定化合物7為6-羥基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯酸.

3 結(jié)語

對(duì)人面果果實(shí)的系統(tǒng)分離，得到7種化合物，分別鑒定為檸檬酸 (1)、1-甲基檸檬酸 (2)、1,5-二甲基檸檬酸 (3)、3,4-二羥基苯甲酸 (4)、香豆酸 (5)、鄰苯二甲酸二丁酯 (6)、6-羥基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯 (7).化合物2、3、7為首次從人面果植物中分離，可為傣藥人面果后期的研究工作提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù).

[1] 林艷芳, 依 專, 趙應(yīng)紅.中國傣醫(yī)藥彩色圖譜[M].昆明:云南民族出版社, 2003: 5.

[2] 楊 虹, 叢曉東.藤黃屬植物化學(xué)成分與藥理活性[J].國外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè)), 1999, 14(6): 238-342.

[3] 王朝元, 田世婷, 陳 玉.人面果口山酮抗糖尿病活性的篩選[J].中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2015, 34(2): 23-27.

[4] Trisuwan K, Boonyaketgoson S, Rukachaisirikul V, et al.Oxygenated xanthones and biflavanoids from the twigs ofGarciniaxanthchymus[J].Tetrahedron Lett, 2014, 55(26): 3600-3602.

[5] Baggett S, Protiva P, Mazzola E P, et al.Bioactive Benzophenones fromGarciniaxanthochymusFruits[J].J Nat Prod, 2005, 68(3): 354-360.

[6] Zhong F F, Chen Y, Yang G Z, et al.Xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymus[J].Chin Chem Lett, 2007, 18(7): 849-851.

[7] 鐘芳芳, 陳 玉, 宋發(fā)軍, 等.大葉藤黃中三個(gè)新口 山酮類成分[J].藥學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 43(9): 938-941.

[8] Zhong F F, Chen Y, Yang G Z.Chemical constituents from the bark ofGarciniaxanthochymusand their 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical-scavenging activities[J].Helv Chim Acta, 2008,91(9): 1695-1703.

[9] Chen Y, Zhong F F, He H W, et al.Structure elucidation and NMR spectral assignment of five new xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymus[J].Magn Reson Chem, 2008, 46(12): 1180-1184.

[10] Zhong F F, Chen Y, Wang P, et al.Xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymusand their DPPH radical-scavenging activity[J].Chin J Chem, 2009, 27(1): 74-80.

[11] Chen Y, Fan H, Yang G Z, et al.Prenylated xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymusand their 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical scavenging activities[J].Molecules, 2010, 15(10): 7438-7449.

[12] Chen Y, Yang G Z, Zhong F F.Two new prenylated xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymus[J].Bull Korean Chem Soc, 2010, 31(11): 3418-3420.

[13] Chen Y, Fan H, Yang G Z, et al.Two unusual xanthones from the bark ofGarciniaxanthochymus[J].Helv Chim Acta, 2011, 94 (4): 662-668.

[14] 付 蒙, 胡 鑫, 徐 婧, 等.人面果葉子、根部、果實(shí)提取物體外抗糖尿病活性成分研究 [J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2014, 26 (2): 255-259.

[15] Xiao C, Dai H, Liu H, et al.Revealing the metabonomic variation of rosemary extracts using1H NMR spectroscopy and multivariate data analysis[J].J Agr Food Chem, 2008, 56(21): 10142-10153.

[16] Han Y N, Choo Y, Lee Y C, et al.Monoamine oxidase B inhibitors from the fruits ofOpuntiaficus-indicavar.saboten[J].Arch Pharm Res, 2001, 24(1): 51-54.

[17] Guo H, Naser S A, Ghobrial G, et al.Synthesis and biological evaluation of new citrate-based siderophores as potential probes for the mechanism of iron uptake in mycobacteria[J].J Med Chem, 2002, 45(10): 2056-2063.

[18] Chiang Y M,Liu H K,Lo J M,et al.Cytotoxic constituents of the leaves ofCalocedrusformosana[J].J Chin Chem Soc-Taip, 2003, 50(1): 161-166.

[19] 楊光忠, 何思文.藤黃化學(xué)成分的研究[J].中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2013, 32(2): 63-65.

[20] Gao H Y, Wang H Y, Li G Y, et al.Constituents from Zhuyeqing Liquor and their inhibitory effects on nitric oxide production[J].Phytochem Lett, 2014, 7(2): 150-155.

Study on the Chemical Constituents of Garcinia xanthochymus Fruits

Chen Yu1, Gan Fei1, Liu Hui1, Shi Kuan2

(1 College of Chemistry and Materials Science，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China;2 College of Pharmacy，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China)

To study the chemical constituents of the fruits ofGarciniaxanthochymus, the chemical constituents were isolated and purified by solvent extraction method, the normal and reverse phase silica gel column chromatography and semi-preparative HPLC. The structures were elucidated on the basis of chemical and spectroscopic analysis. Seven compounds were isolated from the ethyl acetate extract ofG.xanthochymusfruits and were identified as citric acid (1), 1-monomethyl citrate (2), 1,5-dimethyl citrate (3), 3,4-dihydroxybenzoic acid (4), trans-p-coumaric acid (5), dibutyl phthalate (6), 6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoic acid (7). Among these compounds 2, 3, 7 were isolated from the genusGarciniafor the first time.

Garciniaxanthochymus; chemical constituents; monoterpene

2016-04-05

陳 玉(1970-), 女,副教授,博士,研究方向:天然藥物化學(xué), E-mail: chenyuwh888@126.com

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31370379)

R914.4

A

1672-4321(2016)04-0009-03