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        藤黃中藤黃酸和新藤黃酸的提取分離及藥理毒理研究

        2020-02-28 03:59:52成志平趙夢(mèng)中
        關(guān)鍵詞:藤黃提取物樹脂

        馬 靜,成志平,趙夢(mèng)中,閆 婧

        (包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,內(nèi)蒙古 包頭 014060)

        改進(jìn)從中藥藤黃中提取、分離新藤黃酸的工藝。將藤黃粉碎微波提取,濃縮的浸膏;加入石油醚淋洗,乙醇溶解過(guò)濾,經(jīng)模擬移動(dòng)床色譜分離;回收溶劑干燥得純度95%以上的藤黃酸及純度10%~20%的藤黃酸與純度30%~50%的新藤黃酸混合物兩種規(guī)格的產(chǎn)品。加入6倍的濃度為95%的乙醇,提取2次,每次1.5個(gè)小時(shí),并將實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn),加入驗(yàn)證結(jié)果一致,說(shuō)明此工藝穩(wěn)定可行。運(yùn)用改進(jìn)的工藝從藤黃中提取分離新藤黃酸是可行的,更利于工業(yè)化生產(chǎn)。

        中藥藤黃為藤黃科植物藤黃樹干切傷后分泌的膠樹脂。清涼,酸味,澀味,有毒。具有消腫毒、止血?dú)⑾x、除癬作用?;瘜W(xué)成分研究表明,藤黃主要含有以藤黃酸為代表的黃酮類化合物。

        1 儀 器

        電子天平(AL204-IC)METTLER TOLEDO;數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司 KQ-500DE);現(xiàn)場(chǎng)展示恒溫水浴鍋(金壇江南儀器廠HH);有機(jī)試劑回收設(shè)備;高性能液相;沒有活塞玻璃柱;循(SHZIIID)環(huán)水真空泵上海正式開始實(shí)驗(yàn)儀器科技有限公司有限公司。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀TSQ Quantum Ultra EMR(ThermoFisher)。

        2 一般資料

        2.1 藤黃酸與新藤黃酸的提取

        2.1.1 制備藤黃酸對(duì)照

        精確稱量藤黃酸6 mg標(biāo)準(zhǔn)品,將標(biāo)準(zhǔn)品置于量程為10 mL的容量瓶中,將分析純甲醇溶液加入定容溶液中,超聲溶解,制備含量為0.6 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。

        2.1.2 樣品溶液的制備

        精確稱量提取出的總藤黃酸酯提取物6 mg,置于容量瓶中,測(cè)量范圍為10 mL,加入純甲醇在恒體積和超聲波下溶解分析,過(guò)濾膜為0.45微米,所得濾液作為樣品溶液,備用。

        2.1.3 因素水平的確立

        取3個(gè)水平進(jìn)行考察,研究乙醇濃度、乙醇量、提取時(shí)間以及提取次數(shù)4次,各因素對(duì)藤黃提取物收取率的影響。

        2.1.4 提取與分離

        (1)提取:按照實(shí)驗(yàn)得出的優(yōu)化方法,準(zhǔn)確稱取10 g藤黃粉,放入500 mL的圓底燒瓶中,然后加入6倍量的濃度為95%的乙醇,并浸泡30分鐘水浴回流提取1.5小時(shí),重復(fù)一次,合并2次濾液,再在60℃減壓回收乙醇,放入低溫干燥的真空箱中得出干浸膏。

        (2)分離:上提取得出的干燥提取物,用濃度為0.1%的Na2CO3將其溶解,加入預(yù)處理的AB-8型大孔樹脂,樹脂的質(zhì)量與提取物的比例Wie18:1,然后浸泡過(guò)夜。然后用蒸餾水洗至洗脫液基本變無(wú)色,洗脫液用薄層色譜點(diǎn)板跟蹤,直到黃斑點(diǎn)變得極淡時(shí)停止洗脫。最后用濃縮的洗脫液加稀釋的濃鹽酸沉淀,抽濾的出黃色的結(jié)晶,低溫減壓干燥即可。

        3 討 論

        單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化從藤黃中提取總藤黃酸的工藝條件,并確定最優(yōu)提取工藝:乙酸乙酯回流提取用于橙黃色,液體材料的比例1:9,提取溫度為75℃,提取時(shí)間為2.5 h。本文采用大孔樹脂和硅膠柱層析法進(jìn)一步分離純化總藤黃酸,經(jīng)H譜和C譜檢測(cè),確定這兩種化合物分別為藤黃酸和新藤黃酸。

        4 藤黃酸和新藤黃酸藥理毒理分析

        在中醫(yī)學(xué)中藤黃的用藥歷史十分悠久,據(jù)中醫(yī)學(xué)記載,藤黃具有祛除癬、破血散結(jié)、攻毒消蝕潰瘍、驅(qū)蟲、攻毒消腫、治療跌打傷的作用?,F(xiàn)代藥理研究也表明,藤具有相同的抗腫瘤、抗炎和抗病毒活性。

        根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)了解藤黃酸及新藤黃酸的抗腫瘤作用,根據(jù)不同的細(xì)胞系,其功效會(huì)表現(xiàn)出不同的特點(diǎn),因此甘草酸等化學(xué)成分存在一定的差異。以藤黃酸與新藤黃酸對(duì)結(jié)腸癌及胃癌為例選擇不同濃度、不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行觀察24小時(shí),兩者半抑制濃度(IC50)分別是5.55和10.34 μg/mL,0.19和2.16 μg/mL;藤黃酸與新藤黃酸對(duì)結(jié)腸癌和胃癌48小時(shí)的抑制濃度依次為5.38和3.40 μg/mL,0.95和0.81 μg/mL,由此可見藤黃酸與新藤黃酸既有良好的藥理作用。

        雖然藤黃的藥理作用十分廣泛,但其毒性較大,臨床應(yīng)用有限。藤黃具有一定的毒性,其化學(xué)成分和含量一直是醫(yī)學(xué)研究的重要課題。根據(jù)以往大量的實(shí)驗(yàn)研究,藤黃酸和新藤黃酸的最大耐受量一般為400 mg/kg及600 mg/kg。由于藤黃酸和新藤黃酸溶解度的影響,對(duì)高濃度藤黃酸的研究受到限制。藤黃酸的毒性相對(duì)較快。

        研究表明藤黃酸與新藤黃酸在抗癌方面具有比較突出優(yōu)勢(shì),但是想要將藤黃酸全面的應(yīng)用到臨床治療中仍然需要對(duì)于其新衍生物進(jìn)行開發(fā)、藥動(dòng)學(xué)的研究還需要繼續(xù)深入和開展。上述的研究成果表明藤黃酸在藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的研究目前處在高速發(fā)展時(shí)期,而且具有極大的研究?jī)r(jià)值。目前,在藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上,開發(fā)出有效的劑型來(lái)解決藤黃酸水低溶性問(wèn)題,使之產(chǎn)生理想的藥效,同時(shí)減輕不良反應(yīng)是當(dāng)下藤黃酸進(jìn)研究必須突破的關(guān)鍵問(wèn)題。如何打破藤黃酸的毒性的限制,將其特有的抗癌作用充分發(fā)揮出來(lái),是今后藤黃研究項(xiàng)目的重要工作。

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