紀(jì) 娟，裴來(lái)良，王 斌，程 卉，胡海霞，王效山，周 安

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，安徽 合肥 230038；2.安徽省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031）

紫外分光光度法測(cè)定藤黃藥材中總藤黃酸含量

紀(jì) 娟1，2，裴來(lái)良2，3，王 斌1，2，程 卉1，胡海霞2，3，王效山2，3，周 安1，2

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，安徽 合肥 230038；2.安徽省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031）

目的 建立藤黃藥材中總藤黃酸含量的測(cè)定方法。方法 采用紫外分光光度法，以新藤黃酸為對(duì)照品，在360nm處對(duì)藤黃樣品中的總藤黃酸進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果 新藤黃酸濃度在5.304～26.520mg／L范圍內(nèi)，與吸收度的線性關(guān)系良好（r＝0.999 5），平均加樣回收率為98.53%（RSD＝0.21%，n＝9）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于藤黃藥材的質(zhì)量控制。

藤黃藥材；新藤黃酸；藤黃酸；紫外分光光度法

藤黃系藤黃科植物藤黃（Garciniahanburyi Hook.f.）所分泌出的干燥樹(shù)脂，性寒、味酸、辛、澀、有毒，具破血散結(jié)、解毒、止血、殺蟲(chóng)之功效，用于治療瘰癘、癰疸、癤腫等頑疾[1]。藤黃總酸制劑（包括注射劑和片劑）試用于臨床上治療多種惡性腫瘤，獲得一定療效[2]。藤黃中主要成分為藤黃酸、新藤黃酸為代表的橋環(huán)類(lèi)化合物，迄今為止，已從藤黃藥材中分離得到數(shù)十種橋環(huán)類(lèi)化合物[3－4]，該類(lèi)化合物是藤黃抗腫瘤藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。藤黃提取物及其單體成分藤黃酸（圖1）、新藤黃酸（圖2）具有顯著的抗腫瘤活性[5－7]，且毒性低。

圖1 藤黃酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式 圖2 新藤黃酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式

目前藤黃中橋環(huán)類(lèi)化合物的分析方法主要有薄層色譜法[8]、高效液相色譜法[9]、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[10]等，薄層色譜法和高效液相色譜法在測(cè)定總藤黃酸時(shí)一般只針對(duì)一種或幾種指標(biāo)性成分定量，不能反映藥材中總藤黃酸的含量。陳優(yōu)生等[11]采用二氯氧鋯顯色后比色法測(cè)定總藤黃酸含量，然而顯色反應(yīng)易受溫度和光照等諸多因素影響，造成穩(wěn)定性不理想。為了有效地控制藤黃藥材中總藤黃酸的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)擬根據(jù)藤黃中橋環(huán)類(lèi)化合物在360nm左右均有紫外吸收特點(diǎn)，采用紫外分光光度法對(duì)藤黃中總藤黃酸進(jìn)行了測(cè)定，為藤黃藥材的質(zhì)量控制及開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

UV-2550型紫外分光光度計(jì)：日本島津公司；KQ-3000VDB超聲波清洗器：江蘇省昆山超聲儀器有限公司；BP2110電子分析天平：德國(guó)Sartorius。

3批不同的藤黃藥材由本課題組購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng)（批號(hào)分別為20091136、20100528、20100702），均經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院彭華勝教授鑒定；新藤黃酸對(duì)照品由安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物研究所提取分離，其純度經(jīng)高效液相色譜面積歸一化法測(cè)定其純度為99.9%；其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 新藤黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備：精密稱(chēng)取干燥至恒質(zhì)量的新藤黃酸對(duì)照品26.52mg置于100 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得265.2g／ml對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.2 供試品溶液的制備：將藤黃藥材粉碎，過(guò)40目篩，干燥至恒質(zhì)量。取藤黃粉末30mg，精密稱(chēng)定，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲提取10min，放冷至室溫，補(bǔ)足甲醇至刻度。精密移取1ml置于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得供試品溶液。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 將“2.1.1”項(xiàng)下新藤黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液用甲醇稀釋10倍和“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液一起用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，測(cè)得對(duì)照品和供試品在200～500nm范圍內(nèi)的吸收光譜（見(jiàn)圖3）。圖3表明，藤黃藥材和新藤黃酸對(duì)照品在360 nm波長(zhǎng)處均有強(qiáng)吸收，故采用360nm處吸收波長(zhǎng)測(cè)定總藤黃酸含量。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取265.2g／ml新藤黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液10ml置100ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密移取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml稀釋液于10ml容量瓶中，分別標(biāo)記為1、2、3、4、5號(hào)溶液，用甲醇稀釋至刻度，得濃度為5.30、10.61、15.91、21.22、26.52g／ml系列溶液。以甲醇為空白，測(cè)定各系列溶液在360nm下的吸光度。以新藤黃酸濃度（c）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：A＝0.024 88c-0.000 36，r＝0.999 5（n＝3）。結(jié)果表明，新藤黃酸對(duì)照品溶液吸收度與濃度在5.30～26.52g／ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖2 新藤黃酸對(duì)照品（A）和藤黃藥材供試品（B）的紫外吸收光譜圖

2.4 精密度測(cè)定 將“2.3”項(xiàng)下1、3、5號(hào)新藤黃酸對(duì)照品溶液作為低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度，分別測(cè)其吸光度，各自連續(xù)測(cè)5次，考察儀器精密度，結(jié)果RSD值均低于0.4%，說(shuō)明該方法精密度良好，符合含量分析要求。

2.5 穩(wěn)定性測(cè)定 精密稱(chēng)取一批藤黃藥材粉末10.44、19.96、30.40mg，按“2.1.2”項(xiàng)下方法操作得藤黃藥材低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度溶液，于室溫中放置0、1、3、5、7、9h，分別測(cè)定吸光度，考察樣品穩(wěn)定性。見(jiàn)表1。結(jié)果表明藤黃供試品液在9h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 藤黃供試品液穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

2.6 重復(fù)性測(cè)定 精密稱(chēng)取質(zhì)量分別為30.86、29.68、29.60、29.04、30.28、29.82mg同一批藤黃藥材（批號(hào)20100528）6份，按“2.1.2”項(xiàng)下同法制備樣品溶液，在波長(zhǎng)360nm處測(cè)定吸光度，按照“2.3”項(xiàng)線性方程計(jì)算總藤黃酸含量，考查重復(fù)性，結(jié)果平均含量為70.2%，RSD為1.6%（n＝6）。結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率測(cè)定 精密稱(chēng)取已知含量藤黃藥材19.96mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲提取10min，放冷至室溫，補(bǔ)足甲醇至刻度。從中精密移取1.0ml溶液，同樣移取9次，分別置于9個(gè)10ml容量瓶。將9個(gè)容量瓶平均分為3組，分別加入新藤黃酸對(duì)照品溶液（26.52 g／ml）4.5、5.5、6.5ml，加甲醇定容。分別測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率，RSD值為0.21%。見(jiàn)表2。結(jié)果表明該方法具有較好的加樣回收率。

2.8 含量測(cè)定 取3批藤黃藥材（批號(hào)20091136）粉末各適量，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，根據(jù)線性回歸方程得出樣品的總藤黃酸含量。見(jiàn)表3。結(jié)果表明3批藤黃藥材的總藤黃酸含量相對(duì)較高。

表2 加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n＝9）

3 討論

在藥材提取過(guò)程中，分別考察了提取5、10、15、20min對(duì)總藤黃酸含量提取的影響，發(fā)現(xiàn)提取10 min后含量變化不大，所以選擇10min作為提取總藤黃酸的時(shí)間。早期藤黃藥材質(zhì)量控制研究多以薄層色譜及高效液相色譜為主，操作繁瑣，選取指標(biāo)往往難以代表整個(gè)藤黃藥材中總藤黃酸含量。本課題組前期通過(guò)高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用分析了藤黃中橋環(huán)類(lèi)化合物，獲得了相應(yīng)化合物的最大紫外吸收和分子量信息，結(jié)果表明藤黃中橋環(huán)類(lèi)化合物在波長(zhǎng)360nm處均有最大紫外吸收[10]。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)該類(lèi)化合物紫外吸收特點(diǎn)，采用紫外分光光度法建立了藤黃中總藤黃酸含量的測(cè)定方法，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，此方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可作為藤黃藥材中總藤黃酸含量測(cè)定方法。

表3 藤黃樣品中總藤黃酸含量測(cè)定（n＝3）

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Determination of Total Gambogic Acid in Gamboge by Ultraviolet Spectrophotometry

JIJuan1，2，PEILai-liang2，3，WANGBin1，2，CHENGHui1，HUHai-xia2，3，WANGXiao-shan2，3，ZHOUAn1，2
（1.ExperimentalResearchCenter，AnhuiUniversityofChineseMedicine，AnhuiHefei230038，China；2.Key LaboratoryofChineseMedicineResearchandDevelopmentinAnhuiProvince，AnhuiHefei230031，China；
3.SchoolofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine，AnhuiHefei230031，China）

Objective To establish a method for determining the content of total gambogic acid in gamboge.Methods With gambogenic acid as a reference substance，ultraviolet spectrophotometry was adopted to determine the content of total gambogic acid in gamboge sample at a wavelength of 360nm.Results The concentration of gambogenic acid showed a good linear relationship with optical density within 5.304-26.520mg／L （r＝0.999 5），and the average recovery rate was 98.53% （RSD＝0.21%，n＝9）.Conclusion The determination method is simple，accurate，and repeatable and can be used for the quality control of gamboge.

gamboge；gambogenic acid；gambogic acid；ultraviolet spectrophotometry

R927.2

A

10.3969／j.issn.2095-7246.2014.02.032

紀(jì)娟（1989-），女，碩士研究生

周安，anzhou0901＠163.com

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