◎ 宋鳳艷，周超君

（韓山師范學(xué)院生命科學(xué)與食品科技學(xué)院，廣東 潮州 521041）

蜂蜜中蛋白質(zhì)及氨基酸含量的測(cè)定

◎ 宋鳳艷，周超君

（韓山師范學(xué)院生命科學(xué)與食品科技學(xué)院，廣東 潮州 521041）

分別采用考馬斯亮藍(lán)法和茚三酮顯色法測(cè)定6個(gè)蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)和氨基酸含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，100 g蜂蜜樣品中，蛋白質(zhì)和氨基酸的含量分別為0.044～0.391 g和0.031～0.055 g，表明不同蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)和氨基酸的含量各不相同。蜂蜜樣品中蛋白質(zhì)和氨基酸測(cè)定時(shí)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.666%～6.447%和0.601%～1.306%，平行樣品間的測(cè)定誤差較小。

蜂蜜；氨基酸；蛋白質(zhì)；茚三酮；考馬斯亮藍(lán)

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物結(jié)合后釀造而成[1]。蜂蜜富含糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、有機(jī)酸、花粉和微量元素等[2]。本文測(cè)定部分蜂蜜樣品的蛋白質(zhì)及氨基酸含量，分析蜂蜜的產(chǎn)品質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蜂蜜成品：野菊花蜜（樣品1，浙江衢州），山野百花蜜（樣品2浙江衢州），龍眼蜜（樣品3，廣東潮州），荔枝蜜（樣品4，廣東潮州），冬蜜1（樣品5，廣東潮州），冬蜜2（樣品6，廣東潮州）。均購(gòu)自蜂場(chǎng)或店鋪。

1.2 主要試劑

牛血清白蛋白（AR），考馬斯亮藍(lán)G-250（AR），95%乙醇（AR），磷酸（AR），茚三酮（AR），氯化亞錫（AR），磷酸二氫鉀（AR），磷酸氫二鈉（AR），谷氨酸（AR）。

1.3 主要儀器

751紫外分光光度計(jì)，HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，90-3型雙向定時(shí)恒溫磁力攪拌器。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

（1）繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。吸取1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.1 mL，分別置于6支試管中，各加水至0.1 mL，再加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液（考馬斯亮藍(lán)G-250 100 mg溶于50 mL的95%乙醇，加入85%磷酸100 mL，蒸餾水定容到1 000 mL），室溫放置2 min，測(cè)定吸光度值（595 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并求回歸方程[3]。

（2）測(cè)定蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)含量。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，蜂蜜樣品6 g溶于蒸餾水并定容為25 mL。準(zhǔn)確吸取樣品溶液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作及測(cè)定。

1.5 蜂蜜樣品中氨基酸含量的測(cè)定

茚三酮顯色法[4]。

（1）繪制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。吸取200 μg/mL氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水補(bǔ)充容積為4.0 mL，再加入茚三酮溶液（茚三酮1 g溶于35 mL熱水，加入40 mg氯化亞錫，溶解后過(guò)濾，濾液置冷暗處過(guò)夜，加水定容為50 mL）和磷酸鹽緩沖溶液（pH8.04）各1 mL，混勻后水浴加熱15 min，迅速冷卻至室溫，再加水至25 mL。溶液靜置15 min后測(cè)定吸光度值（570 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并求回歸方程。

（2）測(cè)定蜂蜜樣品中的氨基酸含量。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取蜂蜜樣品6 g，蒸餾水溶解后定容到25 mL，吸取樣品溶液4 mL，其余操作如繪制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖1所示。曲線(xiàn)回歸方程為y=0.006x，R2=0.999 1。

圖1 蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

2.2 蜂蜜樣品中蛋白質(zhì)的含量

蜂蜜各樣品中的蛋白質(zhì)含量，見(jiàn)表1。

表1 六個(gè)蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)含量表

幾個(gè)被測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的含量在0.044～0.391 g/100 g，不同樣品間蛋白質(zhì)含量差距較大。各樣品測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.666%～6.447%，實(shí)驗(yàn)總體重復(fù)性良好，各平行樣品間誤差較小。

以氨基酸含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖2所示。曲線(xiàn)回歸方程為：

圖2 氨基酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

2.3 蜂蜜樣品中氨基酸的含量

根據(jù)蜂蜜樣品中氨基酸的吸光度值測(cè)定結(jié)果，計(jì)算得到各樣品中的氨基酸含量，見(jiàn)表2。樣品中的氨基酸含量在0.030 8～0.055 3 g/100 g，各樣品測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.601 0%～1.305 9%，平行樣品間的誤差很小。

表2 六個(gè)蜂蜜樣品中的氨基酸含量表

3 結(jié)語(yǔ)

從測(cè)定結(jié)果可知，考馬斯亮藍(lán)法和茚三酮顯色法分別測(cè)定蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)和氨基酸含量，方法的精密度較高。蜂蜜樣品中蛋白質(zhì)和氨基酸的含量有一定的差別[5]。作為出口蜂蜜品種，龍眼蜜和荔枝蜜中的蛋白質(zhì)含量相對(duì)較高，兩個(gè)冬蜜樣品中的含量稍低，但氨基酸的含量則相反。野菊花蜜和山野百花蜜中的蛋白質(zhì)及氨基酸的含量都極低。

[1]馮繼讓.國(guó)家《蜂蜜》標(biāo)準(zhǔn)解讀[J].蜜蜂雜志，2011（1）：8-11.

[2]李欽龍.不同蜂蜜中蛋白質(zhì)的差異性研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2012.

[3]劉學(xué)仁，羅新鵬，查 敏，等.蜂蜜質(zhì)量分析的研究進(jìn)展[J].中藥材，2012（7）：1175-1180.

[4]呂憲禹.蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)方案與應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[5]楊遠(yuǎn)帆，倪 輝，吳黎明.茚三酮法測(cè)定蜂蜜及果葡糖漿中的氨基酸含量[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2013（2）：171-175.

The Content Determination of Protein and Amino acid in Honey

Song Fengyan, Zhou Chaojun
(College of Life Science and Food Technology of Hanshan Normal University, Chaozhou 521041, China)

The methods pf Bradford and Ninhydrin colorimetric were chosen to determine the contents of protein and amino acid of six samples of honeys. Results showed that the contents of protein and amino acid in 100g honey samples were 0.044～0.391 g and 0.031～0.055 g, the contents of them in six honey samples were different from each other. The relative standard deviations was 0.666%～6.447% for protein test and 0.601%～1.306% for amino acid test. All deviations among the parallel samples were small.

Honey; Amino acids; Proteins; Ninhydrin; Coomassie brilliant blue

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.20.037

S896.1