李軍漢，孫君志，李 恩，張仲陽(yáng)，蘇全生

運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路的影響

李軍漢1，2，孫君志1，李 恩3，張仲陽(yáng)1，蘇全生1

目的：觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路在非酒精性脂肪肝（NAFLD）中的變化，探討運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整對(duì)非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用及作用機(jī)理。方法：SD雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（20只）和模型組（50只）2組，對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)。第8周，對(duì)照組和模型組各取10只做肝臟病理切片。確定NAFLD模型成功后，模型組隨機(jī)分為4組：模型組（M）、運(yùn)動(dòng)組（EM）、飲食調(diào)整組（FM）和運(yùn)動(dòng)結(jié)合飲食調(diào)整組（EFM），每組各10只，對(duì)照組剩余10只大鼠編為C組。C組繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，M組和EM組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，F(xiàn)M組和EFM組由高脂飼料改為普通飼料喂養(yǎng)；EM組、EFM組給予有氧游泳運(yùn)動(dòng)干預(yù)，連續(xù)8周，直至第16周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。HE染色觀察肝臟病理形態(tài)，Western blot檢測(cè)PERK、eIF-2a和IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)，結(jié)果：（1）與C組比較，M組肝細(xì)胞脂肪變性加重，PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)增加；（2）與M組比較，各干預(yù)組肝細(xì)胞脂肪變性減輕，PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)降低；（3）M組、EM組、FM組、EFM組4組雙因素方差結(jié)果示：運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)具有主效應(yīng)，且二者具有交互作用。結(jié)論：運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整對(duì)NAFLD發(fā)展具有較好的干預(yù)作用，且二者聯(lián)合作用效果更佳，其機(jī)制可能與其降低PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；非酒精性脂肪肝；運(yùn)動(dòng)；飲食

非酒精性脂肪肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征的病理綜合征［1］。近年來(lái)，NAFLD發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人民健康，但其發(fā)生機(jī)制仍不清楚［2］。研究［3-4］報(bào)道，ERS在心血管、神經(jīng)元變性和糖尿病等疾病中起著重要作用。有關(guān)ERS相關(guān)蛋白在NAFLD中的作用機(jī)制，國(guó)內(nèi)外僅有少量文獻(xiàn)［5-6］報(bào)道。迄今為止，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路在NAFLD中的作用尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)大鼠NAFLD動(dòng)物模型，并采用運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整單獨(dú)或聯(lián)合干預(yù)，探討NAFLD發(fā)展中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用機(jī)制及運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整的干預(yù)作用及作用機(jī)理。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8周齡SD雄性大鼠70只，體重為196.16± 6.96克，SPF／VAF級(jí)，分籠飼養(yǎng)，自由飲食飲水，相對(duì)濕度45%-55%，室溫18-22℃，12小時(shí)光照和12小時(shí)熄燈模擬晝夜交替。

1.2分組與喂養(yǎng)

所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，隨機(jī)分為對(duì)照組（20只）和模型組（50只）兩組。對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)。8周后，兩組各隨機(jī)抽取10只做肝臟病理切片，確定NAFLD造模成功后，將模型組剩余大鼠隨機(jī)分為4組：模型組（M）、運(yùn)動(dòng)組（EM）、飲食調(diào)整組（FM）和運(yùn)動(dòng)結(jié)合飲食調(diào)整組（EFM），每組各10只，對(duì)照組剩余大鼠編為C組。C組繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，M組和EM組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，F(xiàn)M組和EFM組由高脂飼料改為普通飼料喂養(yǎng)；EM組、EFM組給予有氧游泳運(yùn)動(dòng)干預(yù)，連續(xù)8周，直至第16周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。高脂飼料［7］配方如下：基礎(chǔ)飼料71.8%、膽固醇2.0%、豬油18%、蛋黃粉8%、膽鹽0.2%。

1.3運(yùn)動(dòng)方法

運(yùn)動(dòng)方式參照文獻(xiàn)報(bào)道［8］，實(shí)驗(yàn)前，EM、EFM組先進(jìn)行3 d適應(yīng)性游泳練習(xí)，每次15 min，每次遞增10-20 min，每天1次，經(jīng)1周增加至60 min，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，各周都維持此運(yùn)動(dòng)量。正式運(yùn)動(dòng)期間每次60 min，每天1次，每周運(yùn)動(dòng)6 d。運(yùn)動(dòng)條件：長(zhǎng)150 cm×寬60 cm×高70 cm的游泳池，水深60 cm，超過(guò)大鼠身長(zhǎng)的2倍，水溫31±1℃。

1.4樣本采集與處理

大鼠禁食12h，稱(chēng)重后以4ml／kg的2%戊巴比妥鈉溶液腹腔內(nèi)注射麻醉，新潔爾滅消毒后以腹部正中切口打開(kāi)腹腔，迅速取出肝臟，在4℃生理鹽水中反復(fù)漂洗，取肝左葉中部1cm×1cm×1cm，在液氮中速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱儲(chǔ)存，用于Western bolt檢測(cè)。取肝右葉一部分用4%多聚甲醛固定，用于HE染色。

1.5測(cè)試指標(biāo)與方法

1.5.1HE染色觀察肝臟病理形態(tài)

常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色后，在光鏡下觀察肝臟病理變化，根據(jù)肝細(xì)胞脂肪變所占面積進(jìn)行評(píng)分［9］。

1.5.2Western blot檢測(cè)PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1蛋白表達(dá)

將50 mg的冰凍肝組織置于勻漿器中，用組織裂解液裂解 30 min后，12 000r／min，4℃離心30min，取上清，BCA法測(cè)定總蛋白含量。取組織勻漿采用10%SDS-PAGE電泳分離蛋白，4℃電轉(zhuǎn)印至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉1h，洗膜3次，每次10min。分別用兔單抗 PERK（1：2 000，abcam公司）、兔單抗eIF-2a（1：2 000，abcam公司）、兔單抗IRE-1（1：2000，abcam公司）、兔單抗XBP-1（1：1 000，abcam公司）和兔單抗β-actin（1：1 000，abcam公司）室溫孵育1h后，4℃過(guò)夜。TBST洗膜3次，每次10min，分別加入相應(yīng)的HRP結(jié)合的羊抗兔IgG（1：2000，abcam公司）室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，每次10min，DAB顯色，自來(lái)水沖洗，觀察結(jié)果并掃描，重復(fù)3次。

1.6數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 18.0進(jìn)行處理，組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），M組、EM組、FM組和EFM組4組比較采用雙因素方差分析（Univariate），P＜0.01為非常顯著性差異，P＜0.05為顯著性差異。

2　研究結(jié)果

2.1各組肝組織病理形態(tài)變化

HE染色結(jié)果顯示（見(jiàn)圖1）：C組所有大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞呈放射狀排列，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)少量脂肪性變；M組所有大鼠肝細(xì)胞脂肪變性顯著，胞漿內(nèi)充滿(mǎn)大量脂肪空泡，肝細(xì)胞排列紊亂，體積較正常增加，肝竇擴(kuò)張和淤血，肝小葉內(nèi)可見(jiàn)大量炎癥，匯管區(qū)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)或纖維組織增生；EM組、FM組、EFM組肝細(xì)胞脂肪變性程度位于C組和M組之間。肝細(xì)胞脂性變積分（見(jiàn)表1）結(jié)果顯示：與C組比較，其余各組肝細(xì)胞脂肪變程度積分升高明顯，具有非常顯著性差異（P＜0.01），各干預(yù)組肝細(xì)胞脂肪變程度積分較M組降低，具有顯著性差異（P＜0.05）。

圖1　各組肝臟HE染色病理變化（×200）Graph 1 Pathological changes in liver tissues in all groups by HE staining

表1　第16周各組大鼠肝細(xì)胞脂性變積分變化Table 1 Changes in integral values of rats’hepatocyte steatosis in all groups

2.2各組大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a通路蛋白表達(dá)變化

各組大鼠肝組織PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)（如圖2、表2）結(jié)果顯示：與C組比較，其余各組PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)升高，具有非常顯著性差異（P＜0.01）；與M組比較，各干預(yù)組PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)降低，具有非常顯著性差異（P＜0.01）。M組、EM組、FM組、EFM組4組雙因素方差分析結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)的影響具有主效應(yīng)（P＜0.01）；運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)的影響具有交互作用（P＜0.01）。

圖2　各組大鼠肝臟PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)變化Graph 2 Changes in protein expression of liver PERK，eIF-2a in all groups

表2　各組大鼠肝臟PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)變化（±s）Table 2 Changes in protein expression of liver PERK，eIF -2a in all groups（±s）

表2　各組大鼠肝臟PERK、eIF-2a蛋白表達(dá)變化（±s）Table 2 Changes in protein expression of liver PERK，eIF -2a in all groups（±s）

注：與C組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與M組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；M組、EM組、FM組與EFM組組間雙因素方差分析比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別　PERK　eIF-2a C組　0.244±0.047　0.666±0.076 M組　0.934±0.079**　2.222±0.181**EM組　0.617±0.067**△△＃?！?.010±0.098**△△＃＃FM組　0.735±0.074**△△＃?！?.151±0.172**△△＃＃EFM組　0.509±0.052**△△＃＃　0.870±0.071**△△＃＃

2.3各組大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)變化

各組大鼠肝組織IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)（如圖3、表3）結(jié)果顯示：與C組比較，其余各組IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)升高，具有非常顯著性差異（P＜0.01）；與M組比較，各干預(yù)組IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)降低，具有非常顯著性差異（P＜0.01）。M組、EM組、FM組、EFM組4組雙因素方差分析結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)的影響具有主效應(yīng)（P＜0.01）；運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)的影響具有交互作用（P＜0.01）。

圖3　各組大鼠肝臟IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)變化Graph 3 Changes in protein expression of liverIRE-1，XBP-1 in all groups

表3　各組大鼠肝臟IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)變化（±s）Table 3 Changes in protein expression of liverIRE-1，XBP -1 in all groups（±s）

表3　各組大鼠肝臟IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)變化（±s）Table 3 Changes in protein expression of liverIRE-1，XBP -1 in all groups（±s）

注：與C組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與M組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；M組、EM組、FM組與EFM組組間雙因素方差分析比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別　IRE-1　XBP-1 C組　0.358±0.038　0.325±0.037 M組　1.361±0.114**　1.333±0.111**EM組　0.646±0.066**△△＃?！?.726±0.079**△△＃＃FM組　0.707±0.077**△△＃?！?.855±0.088**△△＃＃EFM組　0.587±0.056**△△＃＃　0.684±0.064**△△＃＃

3　討論與分析

3.1內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路與NAFLD

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有蛋白質(zhì)合成、折疊、組裝、修飾等功能，是真核細(xì)胞中的重要細(xì)胞器。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）是指各種刺激導(dǎo)致大量未折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)聚集引發(fā)的反應(yīng)。目前，ERS研究較清楚的通路為UPR［10］。

UPR由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)的分子伴侶葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein78，GRP78）與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上RNA依賴(lài)的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PRKR-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）、激活轉(zhuǎn)錄因子（activating transcription factor，ATF6）和需肌醇酶（inositol requiring kinase，IRE-1）3種跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白介導(dǎo)［11］。在生理狀態(tài)下，GRP78與PERK、IRE-1和 ATF6結(jié)合，處于無(wú)活性狀態(tài)。ERS時(shí)，GRP78與PERK、IRE-1和ATF6解離，解離后的3種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白處于活化狀態(tài)，啟動(dòng)PERK／eIF-2a、IRE-1／XBP-1UPR和ATF6三條主要信號(hào)通路［12］。

有研究［13］證實(shí)，PERK／eIF-2a和IRE-I／XBP-1通路與脂肪肝的發(fā)生密切相關(guān)，ATF-6通路與持續(xù)ERS時(shí)晚期凋亡變化有關(guān)。故本研究著重探討PERK／eIF-2a和IRE-I／XBP-1通路在非酒精性脂肪肝中的作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路在NAFLD中的作用，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示：PERK、eIF-2a和IRE-1、XBP-1在生理狀態(tài)下也少量表達(dá)，與對(duì)照組比較，模型組PERK、eIF-2a和IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)升高，具有非常顯著性差異（P＜0.01），提示ERS通過(guò)PERK／eIF-2a和IRE-I／XBP-1通路參與高脂飲食誘導(dǎo)NAFLD的發(fā)展。

3.2運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整對(duì)NAFLD的干預(yù)作用

有氧運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整被公認(rèn)為是治療NAFLD最基本而有效的方法［14］。有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD的作用機(jī)制主要體現(xiàn)在降低肝臟脂肪堆積、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、降低胰島素受體活性、增加胰島素敏感性、抑制凋亡、減少氧化應(yīng)激和炎癥等方面。運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用機(jī)制尚未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，運(yùn)動(dòng)組肝臟PERK、eIF -2a和IRE-1、XBP-1蛋白表達(dá)降低，具有非常顯著性差異（P＜0.01），提示運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD的作用機(jī)制可能與其減少ERS，降低其PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)有關(guān)。

飲食調(diào)整對(duì)NAFLD的作用多見(jiàn)于臨床研究報(bào)道，其對(duì)NAFLD大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用機(jī)制尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，飲食調(diào)整組肝臟ERS介導(dǎo)PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)降低，具有非常顯著性差異（P＜0.01），提示飲食調(diào)整干預(yù)NAFLD的作用機(jī)制可能與其減少ERS，降低其PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)有關(guān)。

對(duì)于運(yùn)動(dòng)與飲食調(diào)整聯(lián)合干預(yù)對(duì)NAFLD治療的交互作用，國(guó)內(nèi)外有少量文獻(xiàn)報(bào)道。臨床隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)［15］發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)結(jié)合飲食調(diào)整對(duì)NAFLD患者肝臟病理組織學(xué)改變顯著。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，運(yùn)動(dòng)結(jié)合飲食調(diào)整組肝臟PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)顯著下降，提示運(yùn)動(dòng)結(jié)合飲食調(diào)整通過(guò)降低ERS PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)、減少ERS，從而對(duì)NAFLD發(fā)揮干預(yù)作用。雙因素方差分析結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)和飲食對(duì)NAFLD大鼠肝組織PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)的影響具交互作用，提示運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整聯(lián)合作用療效優(yōu)于單獨(dú)作用。

4　結(jié)論

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路參與NAFLD的發(fā)展。NAFLD形成后，采用運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整單獨(dú)或聯(lián)合干預(yù)，一定程度上可延緩NAFLD的發(fā)展，且二者聯(lián)合作用效果更顯著，其機(jī)制可能與運(yùn)動(dòng)和飲食調(diào)整可降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK／eIF-2a和IRE-1／XBP-1通路蛋白表達(dá)，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

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Objective：To observe the change of eIF-2a PERK／and IRE-1／XBP-1 pathway induced by endoplasmic reticulum stress in nonalcoholic fatty liver disease and explore the role of exercise and dietary modification and its mechanism.Methods：12 rats were randomly selected from 42 rats as the control group，the rest 30 rats were the model group.Control group was fed with ordinary diet，model group was fed with high-fat diet.At the 8th week of experiment，6 rats in control and model group were respectively chose for liver pathological to determine whether NAFLD model was successfully made.Model group were randomly divided into 4 groups：model group（M），exercise group（EM），diet modification group（FM）and exercise combined with diet modification group（EFM），each 6 rats.The remaining 6 rats of control group were as C group.Group C was continued to ordinary diet.Group M and EM were continued to high fat diet.Group FM and EFM were fed from high fat diet to ordinary diet.Group EM and EFM were intervened by aerobic swimming exercise for 8 weeks until the end of experiment.We observed the pathological changes in liver tissue by HE staining.Western blot was employed to explore the protein expression of eukaryotic initiation factor 2 α（eIF-2a）and protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase（PERK）and inositol-requiring Enzyme 1（IRE-1）and X-boxbinding Protein 1（XBP-1）.Results：（1）Compared to group C，hepatocyte steatosis is aggravating and protein expression of PERK／eIF-2a and IRE-1／XBP-1 pathway gene increased in M group；（2）Compared to group M，liver steatosis relived and protein expression of PERK／eIF-2a and IRE-1／XBP-1 pathway gene reduced in intervention groups；（3）The result of two-way anova in Group M and EM and FM and EFM showed that exercise and diet had a main effect on protein expression of PERK／eIF-2a and IRE-1／XBP-1 pathway gene and they had a interactive effect.Conclusions：Exercise and diet modification had an good effect on NAFLD and the effect of exercise combined with diet modification was better，which may be related to the decrease of protein expression of PERK／eIF-2a and IRE-1／XBP-1 pathway gene and reducing endoplasmic reticulum stress.

（編輯 孫君志）

The Effect of Exercise and Dietary Modification on PERK／eIF-2a and IRE-1／XBP-1 Pathway Induced by Endoplasmic Reticulum Stress in Nonalcoholic Fatty Liver Disease

LI Junhan1，2，SUN Junzhi1，LI En3，ZHANG Zhongyang1，SU Quansheng1

Endoplasmic Reticulum Stress；Non-alcoholic Fatty Liver Disease；Exercise；Diet Modification

G804.2 Document code：A Article ID：1001-9154（2016）06-0110-05

A

1001-9154（2016）06-0110-05

10.15942／j.jcsu.2016.06.00

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2012BAK21B01）；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)計(jì)劃項(xiàng)目（2015JY0155）；國(guó)家體育總局運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助基金（CTYY2015018）。

李軍漢，博士，講師，研究方向：運(yùn)動(dòng)生理學(xué)，E-mail：LLjunhao＠163.com。

1.成都體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)與健康學(xué)院，四川 成都610041；2.北京體育大學(xué)研究生院，北京100081；3.雅安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川雅安625018 1.School of Sports Medicine and Health，Chengdu Sport Institute，Chengdu Sichuan 610041；2.The Graduate College of Beijing Sport University，Beijing 100084；3.Ya’an Vocational Technical Institute，Ya’an Sichuan 625018

2016-03-20

2016-06-03