趙文惠，曾誠(chéng)，古麗努爾·塔西鐵木爾，高曉黎

(新疆醫(yī)科大學(xué)，烏魯木齊830011)

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黃體酮乳膏劑經(jīng)皮給藥在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

趙文惠，曾誠(chéng)，古麗努爾·塔西鐵木爾，高曉黎

(新疆醫(yī)科大學(xué)，烏魯木齊830011)

目的 觀察黃體酮乳膏劑經(jīng)皮給藥在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和生物利用度變化，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法 選擇健康無(wú)卵巢的Wistar大鼠6只，隨機(jī)分為口服組和經(jīng)皮組，每組3只。兩組均行雙周期雙交叉試驗(yàn)：分別單次給予黃體酮膠囊(灌胃)、黃體酮乳膏劑(貼覆)各50 mg/kg?？诜M用藥前，用藥后0、5、10、20、30 min及1、2、4、6、8、10、12、24、48、72 h眼眶取血0.4 mL；經(jīng)皮組用藥前，用藥后0、0.5、2、4、8、16、24、32、40、48、56、64、72 h眼眶取血0.4 mL。末次取血后停藥至少2周，兩組交叉給藥，同首次給藥途徑相同時(shí)間再次取血。采用ELISA法檢測(cè)黃體酮血藥濃度，DAS藥動(dòng)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，比較兩種劑型的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及生物利用度。結(jié)果 經(jīng)皮組、口服組AUC0～72 h分別為(1 131.43±369.10)、(161.44±94.63) μg/L×h，AUC0～∞分別為(2 364.05±289.25)、(180.90±12.78) μg/L×h，tmax分別為(14.67±3.87)、(1.12±0.31) h，Cmax分別為(49.92±8.41)、(33.56±15.68) μg/L，t1/2ke分別為(63.11±114.81)、(18.71±8.18) h，二者比較P均<0.05。黃體酮乳膏劑的生物利用度是黃體酮膠囊的353.7%。結(jié)論 黃體酮乳膏劑經(jīng)皮給藥具有明顯的長(zhǎng)效、緩釋特征，有望成為安全、長(zhǎng)效且使用方便的制劑。

黃體酮乳膏劑；藥代動(dòng)學(xué)；生物利用度；大鼠

黃體酮是卵巢黃體分泌的天然孕激素，為甾體類激素，水溶性較差，體內(nèi)吸收差。目前，黃體酮主要?jiǎng)┬陀锌诜苿┖图∪庾⑸渲苿？诜苿┓煤蟠嬖谑走^(guò)效應(yīng)，且半衰期極短，生物利用度較低[1～4]；肌肉注射制劑屬油溶制劑，注射時(shí)刺激性大，注射部位易出現(xiàn)紅腫和硬塊。為避免黃體酮口服后肝臟的首過(guò)效應(yīng)并減少其胃腸道滅活，本課題組將黃體酮制成經(jīng)皮吸收的乳膏劑[5～7]。2008年4月～2012年12月，我們觀察了黃體酮口服給藥和經(jīng)皮給藥在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及生物利用度?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雌性Wistar大鼠6只，體質(zhì)量250～320 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(新)2003-0001。實(shí)驗(yàn)儀器：2-16K臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)Sigma公司；model550酶標(biāo)儀，美國(guó)Bio-Rad公司；TGL-16B型高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；AB135-S電子天平、FE20型pH計(jì)，梅特勒-托利多國(guó)際股份有限公司；DK-S22型電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；KQ3200超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。黃體酮對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：100027-201209；甲醇(色譜純)，德國(guó)Sigma公司；孕酮ELISA試劑盒，美國(guó)ADL公司；黃體酮膠囊，浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：20141018。黃體酮乳膏，本課題組自制，黃體酮含量為2%。

1.2 動(dòng)物分組及處理 所有大鼠為避免內(nèi)源性黃體酮干擾，實(shí)驗(yàn)前2周摘除雙側(cè)卵巢。隨機(jī)將大鼠分為口服組、經(jīng)皮組，每組3只。兩組均行雙周期雙交叉試驗(yàn)。試驗(yàn)前禁食12 h、不禁水，口服組一次性給予黃體酮膠囊50 mg/kg(將1粒黃體酮膠囊內(nèi)容物溶于辛葵酸甘油酯中，配成5 mg/mL溶液)灌胃；經(jīng)皮組用剃毛器剃除腹部鼠毛(面積5 cm×4 cm)，取黃體酮乳膏5.0 g涂布在稱量紙上，貼敷于腹部皮膚(給藥量相當(dāng)于50 mg/kg)，用彈性繃帶沿大鼠頭尾縱向制作緊身衣，用寬膠帶在腰部橫向固定，保留24 h揭除，用溫水擦去殘留藥物。停藥至少2周，兩組交叉給藥，方法同前。

1.3 黃體酮血藥濃度及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)檢測(cè) 口服組用藥前，用藥后0、5、10、20、30 min及1、2、4、6、8、10、12、24、48、72 h眼眶取血0.4 mL；經(jīng)皮組用藥前，用藥后0、0.5、2、4、8、16、24、32、40、48、56、64、72 h眼眶取血0.4 mL。交叉給藥后同首次給藥途徑相同時(shí)間取血。所有血樣靜置1～2 h，5 000 r/min離心10 min，分離血清，參照文獻(xiàn)[8，9]方法檢測(cè)黃體酮血藥濃度，繪制血藥濃度-時(shí)間曲線，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，包括72 h血藥濃度時(shí)間曲線下面積(AUC0～72 h)、血藥濃度時(shí)間曲線下面積(AUC0～∞)、藥物濃度達(dá)峰時(shí)間(Tmax)、藥物濃度達(dá)峰濃度(Cmax)、半衰期(t1/2ke)及相對(duì)生物利用度。相對(duì)生物利用度=AUC黃體酮乳膏劑/AUC黃體酮膠囊×100%。

2 結(jié)果

2.1 兩組黃體酮血藥濃度-時(shí)間曲線變化 見(jiàn)圖1、2。

2.2 兩組黃體酮藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較 兩組黃體酮藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。黃體酮乳膏劑的生物利用度為黃體酮膠囊的353.7%。

圖1 口服組黃體酮血藥濃度-時(shí)間曲線(n=6)

圖2 經(jīng)皮組黃體酮血藥濃度-時(shí)間曲線(n=6)

表1 兩組黃體酮藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較±s)

注：與口服組比較，*P<0.05。

3 討論

天然黃體酮溶解度低，體內(nèi)吸收差，且口服后肝臟對(duì)藥物的首過(guò)效應(yīng)強(qiáng)，肝臟毒性明顯，臨床應(yīng)用效果較差[10，11]。目前已在國(guó)內(nèi)外上市的黃體酮膠丸采用微粉化技術(shù)，減小了藥物粒徑，但其藥物生物利用度仍不理想，需口服微粉化黃體酮100～300 mg才能發(fā)揮療效[8]。近年有研究發(fā)現(xiàn)，黃體酮可透過(guò)人體皮膚到達(dá)體內(nèi)[9，12]。與其他給藥途徑相比，經(jīng)皮給藥可避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)和胃腸道破壞，使某些半衰期較短的藥物療效顯著提高，并能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持恒定的釋藥速率，維持穩(wěn)定、持久的血藥濃度[13，14]。

本課題組前期研制的黃體酮乳膏劑為水包油型乳膏，添加透皮吸收促進(jìn)劑、增溶劑、抗氧劑等。前期研究證實(shí)，該乳膏劑具有對(duì)油水親和力好、皮膚穿透性好、藥物釋放快、滯留時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。但未對(duì)其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行研究。本研究黃體酮血藥濃度-時(shí)間曲線顯示，口服組用藥1 h左右達(dá)到黃體酮最大血藥濃度，隨后快速下降；而經(jīng)皮組用藥14.7 h左右達(dá)到黃體酮最大血藥濃度，并逐漸緩慢下降。證實(shí)黃體酮乳膏劑體內(nèi)滯留時(shí)間明顯長(zhǎng)于黃體酮膠囊，且其最大血藥濃度明顯高于黃體酮膠囊；藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果顯示，經(jīng)皮組Tmax和t1/2ke明顯長(zhǎng)于口服組，說(shuō)明黃體酮乳膏劑經(jīng)皮給藥可延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間，延長(zhǎng)半衰期，增加藥物在體內(nèi)的血藥濃度。本研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)皮組去除黃體酮乳膏劑24 h內(nèi)仍可維持一定的血藥濃度，說(shuō)明黃體酮乳膏劑的皮膚儲(chǔ)庫(kù)效應(yīng)強(qiáng)，藥物釋放和經(jīng)皮滲透持久穩(wěn)定。黃體酮乳膏劑的生物利用度為黃體酮膠囊的353.7%，說(shuō)明經(jīng)皮給藥可避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)，提高藥物的生物利用度。

總之，黃體酮乳膏劑經(jīng)皮給藥可避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)和胃腸道滅活，具有明顯的長(zhǎng)效緩釋特征，為該新制劑的臨床開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。但本研究結(jié)果受采血時(shí)間、血樣分析方法等多種因素的影響，需在今后的研究中加以校正。

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烏魯木齊高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)創(chuàng)新基金(CX10208W)；新疆維吾爾自治區(qū)高?？蒲杏?jì)劃科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(20130521170359015)。

高曉黎(E-mail： xli_g@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.40.010

R944

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1002-266X(2016)40-0035-03

2015-06-17)