栗志遠(yuǎn)，王新紅，周 鐸，張曉冬

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·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

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狗牙花總生物堿的鎮(zhèn)痛作用和精神依賴性的實(shí)驗(yàn)研究

栗志遠(yuǎn)，王新紅，周 鐸，張曉冬

目的 觀察狗牙花總生物堿(Ervatamiayunnansis)的鎮(zhèn)痛作用和精神依賴性。方法 選擇昆明種雌性小鼠72只，其中小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)32只，條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)40只，按數(shù)字表法隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、嗎啡組、狗牙花總生物堿低劑量組(5 mg/kg)及高劑量組(20 mg/kg)組。分別采用小鼠熱板法和條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)觀察狗牙花總生物堿鎮(zhèn)痛作用和精神依賴性。結(jié)果 腹腔注射5、20 mg/kg狗牙花總生物堿后小鼠熱板反應(yīng)潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.05或<0.01)；狗牙花總生物堿5、20 mg/kg連續(xù)給藥7 d后，小鼠在伴藥側(cè)逗留時(shí)間均無(wú)明顯延長(zhǎng)，沒(méi)有形成條件性位置偏愛(ài)。結(jié)論 狗牙花總生物堿具有鎮(zhèn)痛作用且無(wú)精神依賴性。

狗牙花總生物堿；鎮(zhèn)痛；精神依賴性；嗎啡

從非洲中西部的夾竹桃科植物伊波加(Tabernantheiboga)中提取分離的吲哚生物堿伊波加(Ibogaine)，具有多種神經(jīng)精神藥理作用[1-2]，如可減少嚙齒類動(dòng)物對(duì)精神興奮劑的自身給藥；可部分抑制嗎啡依賴小鼠、大鼠和猴的戒斷癥狀；能阻斷阿片類戒斷綜合征的各種生理和精神癥狀，還能緩解其他成癮物質(zhì)如可卡因、苯丙胺類、煙堿和酒精戒斷所引起的多種癥狀等。

我國(guó)沒(méi)有伊波加同屬植物，而有夾竹桃科狗牙花屬植物，其在民間用于高血壓病、 咽喉腫痛、風(fēng)濕痹痛或蛇咬傷等疾病的治療[3]。我國(guó)學(xué)者在夾竹桃科狗牙花屬植物中提取分離出許多與Ibogaine結(jié)構(gòu)相似的吲哚類生物堿，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該類吲哚類生物堿單體或總堿具有較好的生物活性，尤其是云南狗牙花總生物堿具有較好的戒毒活性[4-8]。本研究采用熱板法觀察狗牙花總生物堿對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用，并采用條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)評(píng)估其對(duì)小鼠的精神依賴性。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)藥物： 狗牙花總生物堿(第二軍醫(yī)大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室提供)，臨用時(shí)生理鹽水溶解； 鹽酸嗎啡(青海制藥廠，批號(hào)010220)，臨用時(shí)pH 3.5～4.0的生理鹽水配制。(2 )動(dòng)物： 昆明種小鼠，18～22 g，清潔級(jí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK(滬)2002-0002，由復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。動(dòng)物預(yù)先適應(yīng)性飼養(yǎng)l周，自由攝食、飲水。

1.2 方法 (1)小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)[9]：用熱板儀測(cè)定小鼠痛閾，熱板溫度控制在(55.0±0.5) ℃，記錄小鼠足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間，即熱板反應(yīng)潛伏期，作為痛閾評(píng)價(jià)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)時(shí)先剔除反應(yīng)潛伏期(基礎(chǔ)痛閾)>30 s或<5 s的小鼠，室溫維持在23～25 ℃。昆明種雌性小鼠，按照數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，即生理鹽水對(duì)照組、嗎啡組(5 mg/kg)及狗牙花總生物堿低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)2個(gè)劑量組，每組8只。給藥前和給藥后30 min測(cè)定熱板反應(yīng)潛伏期。(2 )小鼠條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)[10]：昆明種小鼠，雌雄各半，按數(shù)字表法隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、嗎啡組(5 mg/kg)及狗牙花總生物堿低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)2個(gè)劑量組，每組10只小鼠。每組給藥2次/d，給藥間隔8 h。觀察記錄小鼠在黑白箱的停留時(shí)間。訓(xùn)練前：實(shí)驗(yàn)前1 d抽離中間隔板，將小鼠置于中間通道處，記錄15 min內(nèi)小鼠在黑白箱的停留時(shí)間。訓(xùn)練：中間隔板隔離黑、白箱。每天訓(xùn)練2次，每次訓(xùn)練40 min。小鼠注射嗎啡或狗牙花總生物堿后即刻放入白箱，對(duì)照組小鼠注射生理鹽水后放入黑箱，共訓(xùn)練7 d 。測(cè)試：第8天打開(kāi)中間隔板，動(dòng)物放于中間通道處，記錄15 min內(nèi)小鼠在黑白箱的停留時(shí)間。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中保證箱內(nèi)光線、色調(diào)、氣味等環(huán)境條件一致。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板反應(yīng)實(shí)驗(yàn) 狗牙花總生物堿對(duì)小鼠痛閾的影響結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，狗牙花總生物堿可顯著延長(zhǎng)小鼠熱板反應(yīng)潛伏期，并呈量效關(guān)系，即隨劑量增加鎮(zhèn)痛作用加強(qiáng)。腹腔注射5mg/kg或20mg/kg狗牙花總生物堿30min后可使小鼠痛閾顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或<0.01)。

表1 4組小鼠熱板反應(yīng)潛伏期的變化比較(x±s)

組別動(dòng)物數(shù)劑量(mg/kg)熱板反應(yīng)潛伏期(s)給藥前給藥后對(duì)照組 8-12.1±2.312.4±3.3嗎啡組 8512.7±2.042.1±16.7ac低劑量組8512.8±1.519.8±7.2bd高劑量組82012.3±1.732.1±7.8ac

注：與對(duì)照組比較aP<0.01，bP<0.05；與給藥前比較cP<0.01，dP<0.05

2.2 小鼠條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn) 嗎啡組小鼠給藥后，表現(xiàn)為豎尾、異常興奮反應(yīng)；對(duì)照組給藥后，小鼠表現(xiàn)安靜，出現(xiàn)覓食等行為；狗牙花總生物堿低、高劑量組小鼠給藥后，小鼠無(wú)豎尾、興奮表現(xiàn)，未見(jiàn)明顯異常，能夠正常覓食。訓(xùn)練7 d后測(cè)試，嗎啡組小鼠在伴藥箱逗留時(shí)間顯著高于給藥前和生理鹽水對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明小鼠對(duì)嗎啡形成了明顯的條件性位置偏愛(ài)效應(yīng)。而狗牙花總生物堿低、高劑量組小鼠在伴藥箱停留時(shí)間與給藥前和對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示小鼠對(duì)狗牙花總生物堿沒(méi)有產(chǎn)生條件性位置偏愛(ài)效應(yīng)，表明在該實(shí)驗(yàn)劑量下對(duì)小鼠未產(chǎn)生精神依賴性。見(jiàn)表2。

表2 4組小鼠在伴藥箱逗留時(shí)間的變化比較(x±s)

注：與其他3組給藥后比較aP<0.05；與給藥前比較bP<0.05

3 討論

由于阿片類藥物的成癮在許多方面與其鎮(zhèn)痛機(jī)制密切相關(guān)。周身肌肉關(guān)節(jié)疼痛是海洛因成癮脫毒后的主要稽延性癥狀之一，也是促使吸毒者復(fù)吸的重要原因之一[5]。因此，非成癮性鎮(zhèn)痛藥在減少癮性復(fù)發(fā)的治療中具有相當(dāng)重要的意義。

有文獻(xiàn)[1-2]報(bào)道Ibogaine具有鎮(zhèn)痛活性，且可增強(qiáng)嗎啡的鎮(zhèn)痛作用，其結(jié)構(gòu)類似物亦可增強(qiáng)嗎啡對(duì)大鼠和小鼠的鎮(zhèn)痛作用，可能與μ受體和κ受體具有相當(dāng)高的親合力有關(guān)，而狗牙花在我國(guó)民間就用于風(fēng)濕骨痛、跌打損傷或蛇咬傷[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明狗牙花總生物堿具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且呈劑量依賴關(guān)系，故狗牙花總生物堿的鎮(zhèn)痛作用亦可能部分通過(guò)阿片系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。狗牙花總生物堿的鎮(zhèn)痛作用，對(duì)于減輕吸毒患者脫毒后的稽延性癥狀將會(huì)有積極的輔助治療作用。

Ibogaine及其結(jié)構(gòu)類似物可抑制大鼠靜脈可卡因、嗎啡等的自身給藥，可預(yù)防嗎啡和苯丙胺誘導(dǎo)的大鼠位置偏愛(ài)的形成，而且本身無(wú)身體依賴性和精神依賴性，其抗精神依賴作用的神經(jīng)化學(xué)基礎(chǔ)不僅與阿片受體有關(guān)，還涉及其他的神經(jīng)傳導(dǎo)通路[1-2]。

研究精神依賴性方法主要有大鼠或猴自身給藥實(shí)驗(yàn)、藥物辨別實(shí)驗(yàn)和小鼠或大鼠條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)[6]。自身給藥方法由于其需作頸靜脈插管，實(shí)驗(yàn)維護(hù)有一定難度，且受劑量單位和時(shí)間作用過(guò)程等多參數(shù)的影響，使其很難對(duì)濫用傾向提供更多的估計(jì)。藥物辨別實(shí)驗(yàn)需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行了嚴(yán)格的辨別訓(xùn)練，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，不利于藥物篩選。位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)方法由于實(shí)驗(yàn)周期短，簡(jiǎn)便易行，可廣泛應(yīng)用于精神依賴性的預(yù)測(cè)和評(píng)價(jià)。

本實(shí)驗(yàn)選擇小鼠條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)來(lái)評(píng)估狗牙花總生物堿的精神依賴性潛力。本研究結(jié)果顯示，嗎啡組小鼠在伴藥側(cè)逗留時(shí)間顯著高于給藥前和對(duì)照組，表明小鼠對(duì)嗎啡形成了明顯的條件性位置偏愛(ài)效應(yīng)，即表示模型建立成功。而給予狗牙花總生物堿5.0 mg/kg和20.0 mg/kg，小鼠在伴藥側(cè)停留時(shí)間與給藥前和對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示小鼠對(duì)狗牙花總生物堿沒(méi)有產(chǎn)生條件性位置偏愛(ài)效應(yīng)，表明在該實(shí)驗(yàn)劑量下對(duì)小鼠未產(chǎn)生精神依賴性。與文獻(xiàn)報(bào)道的Ibogaine及其結(jié)構(gòu)類似物無(wú)精神依賴性的結(jié)論一致。

因此，狗牙花總生物堿不僅具有抗嗎啡精神依賴的藥理活性和鎮(zhèn)痛作用，而且本身無(wú)精神依賴性，為進(jìn)一步研究提供了動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] Brown TK.Ibogainein the treatment of substance dependence[J]. Curr Drug Abuse Rev, 2013, 6(1): 3-16. DOI:10.2174/15672050113109990001.

[2] Popik P, Layer RT. 100 years ofibogaine: neurochemical and pharmacological actions of a putative anti-addictive drug[J]. Pharmacol Rev, 1995, 47(2): 235-253.

[3] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì). 中華本草[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1999: 5604.

[4] 黃矛，周麗華，張曉冬，等. 狗牙花總堿防治嗎啡依賴的藥理作用[J]. 中國(guó)藥物依賴性雜志, 2001, 10(1): 8-10. DOI:10.3969/j.issn.1007-9718.2001.01.005.

[5] 傅秋生，鮑燕燕，衣淑珍，等. 云南狗牙花總堿對(duì)嗎啡依賴小鼠位置偏愛(ài)再現(xiàn)的阻斷作用[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 20(5): 352-355. DOI:10.3969/j.issn.1008-9926.2004.05.013.

[6] Tang BQ, Wang WJ, Huang XJ, et al.Iboga-Type Alkaloids fromErvatamiaofficinalis[J]. J Nat Prod, 2014, 77(8): 1839-1846. DOI:10.1021/np500240b.

[7] Koenig X, Hilber K. The anti-addiction drugibogaineand the heart: a delicate relation[J]. Molecules, 2015, 20(2): 2208-2228. DOI:10.3390/molecules20022208.

[8] Geng CA, Liu XK. Five new indole alkaloids from the leaves ofRauvolfiayunnanensis[J]. Fitoterapia, 2013, 89: 42-47. DOI:10.1016/j.fitote.2013.05.017.

[9] 李蕓達(dá)，黃濤，顏?zhàn)娴?，? 石韋不同提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用考察[J]. 中國(guó)藥師, 2014, 17(10): 1642-1644. DOI:10.3969/j.issn.1008-049X.2014.10.011.

[10] 曾曉會(huì)，陳玉興，黃雪君，等. 復(fù)方戒毒片對(duì)嗎啡成癮動(dòng)物模型的影響[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào), 2014, 30(3): 346-349. DOI:10.3969/j.issn.1006-8783.2014.03.020.

(本文編輯：王映紅)

Experimental study on the effects of total Ervatamia yunnansis alkaloid on analgesia and psychological dependence

Li Zhiyuan, Wang Xinhong, Zhou Duo, Zhang Xiaodong

(No.22 Hospital, CPLA, Golmud 816099, China)

Objective To observe the effects of totalErvatamiayunnansisalkaloid on analgesia and psychological dependence in mice.Methods The hot plate test and conditional place preference test were used to valuate analgesic effect and the psychological dependence of totalErvatamiayunnansisalkaloid in mice.Results Following abdominal injection of totalErvatamiayunnansisalkaloid at dosages of 5 mg/kg and 20 mg/kg, latency of hot plate reaction of the mice was significantly prolonged(P<0.05 or <0.01). But, after medication ofErvatamiayunnansisat dosages of 5 and 20 mg/kg for 7 days, the time of staying in the drug-pair compartment wasn′t significantly extended and place preference wasn′t developed in mice.Conclusion TotalErvatamiayunnansisalkaloid seemed to have good analgesic effects and no psychological dependence was observed.

Totalervatamiayunnansisalkaloid; Analgesia; Psychological dependence; Morphine

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171260)；青海省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2014-ZJ-753)

816099 青海 格爾木，解放軍第二十二醫(yī)院(栗志遠(yuǎn)、王新紅、周鐸)；第二軍醫(yī)大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心(張曉冬)

R965；R285

A [DOI] 10.3969/j.issn.1009-0754.2016.05.011

2016-03-02)