劉芹，耿雪冉，許瀛引，張薇薇，王賀祥**

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源環(huán)境研究所，河南鄭州450002；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193）

雞腿菇復(fù)合制劑的抗S180腫瘤作用*

劉芹1，耿雪冉2，許瀛引2，張薇薇2，王賀祥2**

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源環(huán)境研究所，河南鄭州450002；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193）

旨在探討雞腿菇復(fù)合制劑的抗腫瘤作用，為雞腿菇復(fù)合制劑的推廣應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。通過腹股溝皮下注射S180腫瘤細(xì)胞建立小鼠腫瘤模型，把接種腫瘤細(xì)胞后的小鼠隨機(jī)分為陰性對照組，陽性對照組，雞腿菇復(fù)合制劑低、中、高劑量組，2周后檢測小鼠體重和腫瘤大小的不同。結(jié)果表明抗癌藥物環(huán)磷酰胺的腫瘤抑制率為71.8%；雞腿菇復(fù)合制劑低劑量組（1 233 mg·kg-1）、中劑量組（2 466 mg·kg-1）和高劑量組（3 699 mg·kg-1）的腫瘤抑制率分別為14.3%、43.5%和50.4%。這說明在實(shí)驗(yàn)條件下，雞腿菇復(fù)合制劑具有明顯抑瘤作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。

雞腿菇復(fù)合制劑；環(huán)磷酰胺；抗腫瘤

腫瘤已成為威脅人類健康與生命的主要疾病之一。目前，放、化療技術(shù)在治療腫瘤方面已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步，但是放、化療也具有很大的副作用［1-3］。環(huán)磷酰胺是目前臨床上常用的抗腫瘤藥物，其本身不具有抗腫瘤的作用，但是經(jīng)肝線粒體細(xì)胞色素P450和肝微粒體酶作用后生成的具有較強(qiáng)烷化作用的磷酰胺氮芥，對腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，同時(shí)也對免疫相關(guān)細(xì)胞呈現(xiàn)出較強(qiáng)的免疫抑制作用，所以用環(huán)磷酰胺治療時(shí)會(huì)引起機(jī)體免疫力的下降，副作用較大［3-4］。尋求天然無毒副作用的抗癌藥物已經(jīng)成為近年來研究的重點(diǎn)［1，5-6］。雞腿菇復(fù)合制劑主要是由雞腿菇等多種食用菌及中草藥組成。本研究采用腋下接種S180腫瘤的方法建立荷瘤小鼠模型，探究此制劑的抗腫瘤作用，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1　材料和方法

1.1藥品及主要試劑

雞腿菇復(fù)合制劑由蘇州佛果生物科技有限公司提供，主要成分為雞腿菇、猴頭菇、金針菇、草菇、香菇、茯苓、人參、枸杞子、佛手等。

環(huán)磷酰胺購自通化茂祥制藥有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性昆明鼠，體重18 g～22 g，由北京興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施持續(xù)保持屏障環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)。主要環(huán)境指標(biāo)的控制范圍：溫度（25±2）℃，相對濕度（55±5）%，光照明∶暗為12 h∶12 h。動(dòng)物飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)盒內(nèi)，每周2次更換墊料和籠具，保持盒內(nèi)環(huán)境清潔干燥；每日添加飼料和飲水，保持動(dòng)物自由飲食活動(dòng)。實(shí)驗(yàn)遵循中國農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1小鼠S180腫瘤體內(nèi)傳代

將腫瘤細(xì)胞懸液在離心機(jī)上以1 000 r·min-1，離心5 min，小心去除上清，用無菌生理鹽水清洗2次后，吹打成單細(xì)胞懸液，調(diào)整濃度為1×105個(gè)·mL-1備用。吸取腫瘤細(xì)胞懸液0.2 mL注射入小鼠腹腔；在實(shí)驗(yàn)室條件飼養(yǎng)小鼠，大致1周后可見小鼠腹部明顯隆起。引頸處死小鼠后，用無菌注射器抽取乳白色的瘤液，注入健康小鼠腹腔傳代3次，使S180腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)能夠穩(wěn)定生長。

1.3.2腫瘤動(dòng)物模型的建立

在無菌條件下，取傳代7 d的S180瘤源小鼠，引頸處死，無菌操作從小鼠腹腔內(nèi)抽取乳白色的瘤液，用生理鹽水稀釋成瘤細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)·mL-1，在昆明小鼠右腹股溝皮下注射瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠0.2 mL。

1.3.3分組與給藥方式

接種腫瘤細(xì)胞后的小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只。5組小鼠分別為陰性對照組（生理鹽水組）、陽性對照組（環(huán)磷酰胺組，30 mg·kg-1）以及雞腿菇復(fù)合制劑低劑量組（1 233 mg·kg-1）、中劑量組（2 466 mg·kg-1）和高劑量組（3 699 mg·kg-1）；另取12只未注射腫瘤細(xì)胞的小鼠作為正常組。

對陽性對照組和復(fù)合制劑處理組的每只小鼠于接種腫瘤細(xì)胞24 h后開始灌胃給藥，連續(xù)給藥2周；陰性對照組和正常組小鼠每天灌胃同樣體積的生理鹽水。

1.3.4稱量體重

分別于0天（接種腫瘤細(xì)胞前）、第5天、第10天和第16天稱量并記錄各組小鼠的體重。

1.3.5腫瘤抑制率

第16天引頸處死小鼠，分離腫瘤并用電子天平稱取重量。抑瘤率（P）公式為：

P=（C-T）/C×100%

式中：C為陰性對照組小鼠平均瘤重；T為實(shí)驗(yàn)組小鼠平均瘤重。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間差異采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果與分析

不同劑量的雞腿菇復(fù)合制劑對小鼠體內(nèi)S180腫瘤生長抑制率見表1。

表1　雞腿菇復(fù)合制劑對小鼠體內(nèi)S180腫瘤生長的影響Tab.1Effects of Coprinus comatus-compound on S180 tumor growth in mice

由表1可見，與陰性對照組相比，抗癌藥物環(huán)磷酰胺的腫瘤抑制率為71.8%，差異極顯著（P＜0.01）。雞腿菇復(fù)合制劑低劑量組的腫瘤抑制率為14.3%，差異不顯著；而中劑量組和高劑量組的腫瘤抑制率分別為43.5%和50.4%，都達(dá)到了差異極顯著水平（P＜0.01）。這說明雞腿菇復(fù)合制劑具有很好的抗腫瘤作用，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。雞腿菇復(fù)合制劑的低劑量、中劑量和高劑量折合60 kg體重的成年人每天的服用量分別為6 g、12 g和18 g。

雞腿菇復(fù)合制劑對小鼠體重的影響見表2和圖1。

表2　雞腿菇復(fù)合制劑對小鼠體重的影響Tab.2Effects of Coprinus comatus-compound on body weight in mice

圖1　雞腿菇復(fù)合制劑對小鼠體重的影響Fig.1Effects of Coprinus comatus-compound on body weight in mice

由表2和圖1可知，與陰性對照組相比，陽性對照組小鼠的體重明顯偏低，且后期有下降的趨勢，說明抗癌藥物環(huán)磷酰胺的腫瘤抑制率雖高，但毒副作用明顯。雞腿菇復(fù)合制劑的腫瘤抑制率雖不如環(huán)磷酰胺，但實(shí)驗(yàn)小鼠的體重逐步上升，預(yù)示其沒有毒副作用或毒副作用不大。

3　結(jié)論

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及預(yù)實(shí)驗(yàn)，建立了小鼠荷S180腫瘤模型。實(shí)驗(yàn)過程中對各組小鼠灌胃不同劑量的雞腿菇復(fù)合制劑，結(jié)果表明雞腿菇復(fù)合制劑具有很好的抗腫瘤作用。

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Antitumor Effect of Coprinus comatus-compound on S180 Tumor-bearing Mice

LIU Qin1，GENG Xue-ran2，XU Ying-yin2，ZHANG Wei-wei2，WANG He-xiang2
（1.Institute of Plant Nutrition and Resource Environment，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China；2.State Key Laboratory for Agrobiotechnology and Department of Microbiology，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

The antitumor activities of Coprinus comatus-compound were evaluated in Sarcoma 180 tumor-bearing mice by intraperitoneal administration.The tumor-bearing mice were randomly divided into five groups（twelve mice in each group），such as tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with cyclophosphamide（CTX）at the dose of 30 mg·kg-1；tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with Coprinus comatus-compound at the respective dose of 1 233 mg·kg-1，2 466 mg·kg-1，3 699 mg·kg-1；tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with the same volume of normal saline.Tumor were dissected and weighed after two weeks.Coprinus comatus-compound inhibited the growth of sarcoma 180 dose-dependently，with the inhibitory rates of 14.3%，43.5%，50.4%at the respective dose of 1 233 mg·kg-1，2 466 mg·kg-1，3 699 mg·kg-1.As expected，CTX，a frequently used chemotherapeutic drug，showed a higher tumor inhibition rate of 71.8%.In the present study，Coprinus comatus-compound could inhibit the growth of sarcoma 180 in vivo through oral administration in mice.

Coprinus comatus-compound；cyclophosphamide；antitumor

S646.9

A

1003-8310（2016）03-0055-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.03.012

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)基金（CARS-24）。

劉芹（1986-），女，博士，助理研究員，主要從事藥用與食用真菌研究。E-mail：liuqin_bio@163.com

**通信作者：王賀祥（1957-），男，博士，教授，主要從事藥用與食用真菌研究。E-mail：hxwang@cau.edu.cn

2016-03-10