吳 坤，劉娟娟，李 曉，鄒 力

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，陜西西安 710048）

嬰幼兒食品和乳品中VA與VE的測定

吳 坤，劉娟娟，李 曉，鄒 力

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，陜西西安 710048）

建立反相高效液相色譜法，同時測定食品中VA和VE（α-生育酚）的方法。取一定量乳粉加入水、VC的乙醇溶液、氫氧化鉀，于53℃條件下皂化30 min，立刻冷卻，乙腈提取，提取液調(diào)至中性，進(jìn)樣20 μL分析。選擇色譜條件為C18柱色譜柱，250 mm×4.6 mm，粒徑5 μm，流動相為甲醇，流速1.0 mL/min，柱溫35℃，檢測波長325 nm。結(jié)果表明，VA在0.1～1.0 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8；VE在1.0～5.0 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0；VA和VE的平均回收率在95%以上。該法前處理簡單快捷、分離度高、靈敏度高且準(zhǔn)確可靠，大大提高了實驗室的工作效率。

高效液相色譜；VA；VE

VA，又名視黃醇，是最早被發(fā)現(xiàn)的維生素?；糣A缺乏病常有營養(yǎng)不良、慢性腹瀉、慢性痢疾、麻疹后長期忌嘴、畏光、不明眨眼等合并癥，人體攝入過量的VA而引起中毒綜合征［1］。VE（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是最主要的抗氧化劑之一［2-3］。多溶于脂肪和乙醇等有機(jī)溶劑中，不溶于水，對熱、酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定，對氧敏感，對熱不敏感，由于這2種維生素在外界環(huán)境中不穩(wěn)定，易受光、氧等影響而被氧化破壞，影響因素較多，因此尋找合適的測定方法同時測定VA和VE仍然是目前檢驗技術(shù)的難點。

1 試驗方法

α-淀粉酶，酶活力≥1.5 U/mg；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；乙醇，色譜純；甲酸，優(yōu)級純；氫氧化鉀水溶液，稱取固體氫氧化鉀250 g，加入200 mL水溶解；VC的乙醇溶液（15 g/L）。

VA標(biāo)準(zhǔn)儲備液（視黃醇） （100 μg/mL）：準(zhǔn)確稱取10 mg的VA標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

VE標(biāo)準(zhǔn)儲備液（α-生育酚） （500 μg/mL）：準(zhǔn)確稱取50 mg的VE標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

注：VA，VE標(biāo)準(zhǔn)儲備液均須-10℃以下避光儲存。

高效液相色譜儀（配有二極管檢測器）、漩渦混勻器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；SHA-C型恒溫振蕩器，常州國華有限公司產(chǎn)品；超純水機(jī)，成都超純科技有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠產(chǎn)品；天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

（1）稱取混合均勻的固體試樣約1 g或者液體試樣約10 g（精確到0.001 g）于50 mL離心管中，固體試樣用45～50℃的水2 mL使其溶解，混合均勻。加入5 mL VC的乙醇溶液，充分混勻后加入4 mL氫氧化鉀水溶液混勻，放入恒溫振蕩器，溫度控制在53±2℃，水浴振蕩30 min后，取出立刻冷卻至室溫。于離心管中加入20 mL乙腈，劇烈振蕩10 min，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心3 min，取出上清液于另一刻度試管中，加入15 mL乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液。用甲酸調(diào)至中性，定容至40 mL。過0.45 μm有機(jī)濾膜，上機(jī)測定。

（2）稱取混合均勻的固體試樣約1 g或者液體試樣約10 g（精確到0.001 g）于150 mL三角燒瓶中，加入α-淀粉酶0.5 g，固體試樣需用10 mL 45～50℃的水使其溶解，混合均勻后充氮，蓋上瓶塞，置于60±2℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30 min。取出后按上述“加入5 mL VC的乙醇溶液……”步驟處理。

色譜柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，粒徑5 μm；柱溫35℃；流速1.0 mL/min；檢測波長325 nm；進(jìn)樣量20 μL；流動相：甲醇。

分別吸取一定量VA標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙醇定容配置成質(zhì)量濃度分別為0.1，0.2，0.4，0.8，1.0 μg/mL。

分別吸取一定量VE標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙醇定容配置成質(zhì)量濃度分別為1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μg/mL。

2 結(jié)果與討論

方法驗證數(shù)據(jù)見表1。

表1 方法驗證數(shù)據(jù)

自動進(jìn)樣20 μL標(biāo)液進(jìn)行分析，記錄各待測組分色譜峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X、峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行回歸分析。由表1可知，VA和VE在0.1～5.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3 實際樣品結(jié)果

VA結(jié)果見表2，VE結(jié)果見表3。

表2 VA結(jié)果

表3 VE結(jié)果

4 結(jié)論

本方法同時測定乳粉中VA和VE，該方法樣品預(yù)處理簡單、分離度高，相比國標(biāo)，結(jié)果更穩(wěn)定，明顯提高了檢測效率，且其準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，具有推廣應(yīng)用的實際意義。

［1］GB 5413.9—2010嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測定 ［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［2］GB/T 5009.82—2003食品中維生素A和維生素E的測定 ［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［3］ 唐靜，苗延霞.液相色譜儀最小檢測濃度測量結(jié)果不確定度評定 ［J］.中國計量，2010（10）：100-101.◇

Establish A reversed phase high performance liquid chromatography and determination of vitamin A and vitamin E in foods（alpha tocopherol） method.Powder add certain amount of water and ethanol solution of vitamin C and potassium hydroxide，53℃ saponification for 30 min，cooling immediately，acetonitrile extraction，extract to neutral and sample analysis of 20 μL.Chromatographic conditions：chromatographic column C18column，250 mm×4.6 mm，size 5 μm，mobile phase：methanol flow，rate 1.0 mL/min，column temperature 35℃，detection wavelength of 325 nm.The vitamin A has good linear concentration range at 0.1～1.0 μg/mL，correlation coefficient R2=0.999 8，vitamin E has concentration range correlation as 1.0～5.0 g/mL coefficient R2=0.999 0.Vitamin A and vitamin E，the average recovery is above 95%.Before the deal with simple and quick，high degree of separation，high sensitivity and accurate and reliable，greatly improving the efficiency of the laboratory.

high pressure liquid chromatography（HPLC）；VA；VE.

1671-9646（2016）09a-0041-02

TS207.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.09.014

2016-06-27

吳 坤（1985— ），女，本科，助理工程師，研究方向為食品農(nóng)副產(chǎn)品的檢驗。