劉榮鑫 應(yīng) 適

重慶市公安局沙坪壩區(qū)分局，重慶 400038

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604例盜竊案微量生物檢材的DNA檢驗(yàn)分析

劉榮鑫 應(yīng) 適

重慶市公安局沙坪壩區(qū)分局，重慶 400038

本文作者采用硅珠法對2014年以來實(shí)驗(yàn)室受理的604例盜竊案涉案微量生物檢材(錢包212例、鎖具188例、門柜把手98例、首飾盒56例、瓶罐50例)進(jìn)行了檢驗(yàn)分析，以檢出性別及13個以上STR基因座，并且圖譜峰值≥200RFU的檢材計算，604例檢材檢出率為76.5%。其中錢包檢出率為79.7%、鎖具檢出率為69.1%、門柜把手檢出率為74.5%、首飾盒檢出率為82.1%、瓶罐檢出率為88.0%。經(jīng)過研究說明，此硅珠法檢驗(yàn)效果較理想，并且省時、便捷、高效，適用于法醫(yī)微量生物檢材的DNA檢驗(yàn)。

微量物證；DNA；硅珠法

刑事案件中，盜竊案占有的比例最大，而破案率并不高?？辈楝F(xiàn)場時提取的物證多為微量生物檢材，DNA檢驗(yàn)難度大，筆者通過改進(jìn)硅珠法，提升了接觸性微量生物檢材的檢出率，筆者研究分析了2014年以來運(yùn)用本法處理的盜竊案微量生物檢材的檢驗(yàn)情況并討論。

一、實(shí)驗(yàn)材料

2014年以來實(shí)驗(yàn)室受理的盜竊案涉案微量生物檢材錢包212例、鎖具188例、門柜把手98例、首飾盒56例、瓶罐50例。共計604例。

二、實(shí)驗(yàn)方法

(一)微量物證DNA提取

采用DNA提取試劑盒(飛凈生物科技有限公司，福州)。①用干濕法提取微量生物檢材后，然后將棉簽擦拭子放入離心套管中，加入200μL裂解液后在99℃下裂解5min；②在8000r/min下離心3min，丟棄套管；加入800μL吸附液，14μL硅珠，渦旋后靜置15min；③在8000r/min下離心lmin，棄上清；加入700μL漂洗液，混勻后在8000r/min下離心1min，棄上清；④將沉淀物置于56℃金屬浴上烘干；再加入25μL洗脫液，混勻后置于56℃金屬浴上洗脫15min；⑤最后在15000r/min下離心3min，取上清液進(jìn)行PCR。

(二)PCR反應(yīng)及電泳分析

分別取上述檢材DNA模板適量，使用AmpFLSTR?Yfiler?PCR擴(kuò)增試劑盒和GeneAmp PCR System 9700進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增STR基因座(擴(kuò)增反應(yīng)系數(shù)為20μL，內(nèi)含mix8μL，prime set 4μL，DNA 8 μL)，最后對擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用ABI3500XL型熒光分析儀電泳檢測和GeneMapper ID-X分析。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

我們視包含性別及13個以上STR基因座，并且圖譜峰值在200RFU及以上的結(jié)果為檢驗(yàn)成功，對檢驗(yàn)604例的結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(見表1)。表中結(jié)果顯示，錢包檢出率為79.7%；鎖具檢出率為69.1%；門柜把手檢出率為74.5%；首飾盒檢出率為82.1%；瓶罐檢出率為88.0%，總檢出率為87%。

表1 604例盜竊案檢材檢驗(yàn)情況統(tǒng)計表

四、討論

接觸性檢材(touch DNA)是近年來法醫(yī)物證學(xué)的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。接觸性微量生物檢材通常細(xì)胞含量較少，如何從相關(guān)載體上提取到足夠多的脫落細(xì)胞，是檢驗(yàn)成功的關(guān)鍵。本文對涉案檢材均采用了干濕兩步擦拭法進(jìn)行提取。此類檢材因接觸人員復(fù)雜，這些皮膚接觸部位的脫落細(xì)胞松散地遺留在物體表面，往往后接觸會把前一次接觸者的細(xì)胞蹭掉，留下后接觸者的細(xì)胞，對微量DNA進(jìn)行檢驗(yàn)，大多獲得的DNA圖譜為最后的接觸者，從而在涉案物品上檢出嫌疑人的DNA成為可能。

通過對硅珠法進(jìn)行改良，可獲得較高純度DNA，并且具有以下合理設(shè)計：①通過使用具有過濾雜質(zhì)功能的離心套管，使實(shí)驗(yàn)操作更為簡便、去除雜質(zhì)和模板保留效果更為理想；②合理降低硅珠懸濁液的用量，使DNA更容易洗脫；③簡化漂洗，避免和減少漂洗過程中的DNA損耗；④小體系洗脫，提高了模板DNA的濃度；⑤適當(dāng)增加PCR循環(huán)數(shù)，在高純度DNA情況下可以極大提高擴(kuò)增成功率，可適當(dāng)增加PCR循環(huán)數(shù)至40個。本文實(shí)驗(yàn)從整體上簡化了實(shí)驗(yàn)操作步驟，并且減少了模板DNA的損耗量，有效提高了檢材的檢出率，從而印證了硅珠法改良后在微量物證提取及檢驗(yàn)中的應(yīng)用價值。

本文604例檢材均為實(shí)物提取送檢，從而更利于檢驗(yàn)人員視情況采用更為合理有效的提取方法，最大程度的進(jìn)行脫落細(xì)胞提取和轉(zhuǎn)移。因微量生物檢材會受到時間、濕度、溫度、光照、微生物等不利環(huán)境因素影響，多會加速DNA的降解，故提取后應(yīng)妥善保管和及時送檢，才能保證和提高檢材的檢出率，從而發(fā)揮接觸性微量生物檢材的科學(xué)證據(jù)作用。

[1]王林生，蘇勇，顧林崗.硅珠法提取PCR模板DNA[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2000(1).

[2]姚建，賈東濤，張玉紅等.檢材量對硅珠法提取脫落細(xì)胞DNA的影響[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2009(5).

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劉榮鑫(1984-)，男，漢族，陜西西安人，西北農(nóng)林科技大學(xué)，碩士研究生，重慶市公安局沙坪壩區(qū)分局，法醫(yī)師，研究方向：法醫(yī)物證；應(yīng)適(1986-)，男，漢族，重慶人，中國刑事警察學(xué)院本科畢業(yè)，重慶市公安局沙坪壩區(qū)分局。