王虎平　吳紅彥

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅　蘭州　730000)

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逍遙散防治阿爾茨海默病的作用及配伍機(jī)制

王虎平1吳紅彥1

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅蘭州730000)

目的探討逍遙散對(duì)D-半乳糖致阿爾茨海默病(AD)小鼠模型記憶能力及血清超氧化物歧化酶(SOD)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、乙酰膽堿酯酶(AchE)活性與丙二醛(MDA)水平的影響。方法60只KM種SPF級(jí)小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝健脾組、疏肝養(yǎng)血組、健脾養(yǎng)血組，每組10只。腹腔注射D-半乳糖復(fù)制擬AD小鼠模型并以逍遙散全方及各配伍藥組進(jìn)行干預(yù)，給藥第41天 進(jìn)行學(xué)習(xí)能力訓(xùn)練，第42天進(jìn)行記憶功能測(cè)試，然后股動(dòng)脈取血測(cè)定血清SOD、ChAT、AchE活性及MDA水平。結(jié)果逍遙散全方及各配伍藥組皆可延長(zhǎng)小鼠記憶潛伏時(shí)間，減少錯(cuò)誤次數(shù)，提高血清SOD、ChAT活性,降低AchE活性與MDA水平,但記憶功能及血清SOD、MDA、ChAT、AchE的改善皆以逍遙散全方組最明顯。結(jié)論逍遙散能較好地改善擬AD模型小鼠記憶功能、抗氧化能力及中樞神經(jīng)遞質(zhì)活性。疏肝、健脾、養(yǎng)血是有效防治AD的統(tǒng)一體，缺一不可。

逍遙散；阿爾茨海默?。挥洃浌δ埽籗OD；MDA；ChAT；AchE

阿爾茨海默病(AD)是一種進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)其發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)處于幾種“學(xué)說”階段，相應(yīng)的對(duì)癥治療不能滿足臨床患者的需求。前期研究中，本課題組以調(diào)和肝脾之名方逍遙散(《太平惠民和劑局方》)對(duì)AD小鼠模型進(jìn)行了干預(yù)研究，初步確證了逍遙散對(duì)AD的防治作用〔1～5〕。為了進(jìn)一步探索逍遙散防治AD的配伍結(jié)構(gòu)、精選防治AD的主要藥物，本研究以記憶功能及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、乙酰膽堿酯酶(AchE)活性為考察指標(biāo)對(duì)逍遙散進(jìn)行了疏肝、健脾、養(yǎng)血為單元藥組的拆方配對(duì)研究。

1　材料與方法

1.1主要材料60只KM種SPF級(jí)小鼠，(20±2)g，雌、雄各半，購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(甘)2004-0006。逍遙散各組成生藥(柴胡、薄荷、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓、煨姜、甘草)均購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。SOD、MDA、AchE、ChAT試劑盒及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20100522；D-半乳糖購(gòu)自北京中泰化學(xué)試劑公司，批號(hào)：20100514。小鼠跳臺(tái)儀(DT-200)、小鼠避暗自動(dòng)測(cè)試儀(BA-200)均購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。

1.2方法60只KM種SPF級(jí)小鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝健脾組、疏肝養(yǎng)血組、健脾養(yǎng)血組，每組10只?？瞻捉M小鼠每天腹腔注射生理鹽水24 ml/kg，其余各組小鼠每天腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg(濃度為5 mg/ml)復(fù)制AD小鼠模型〔6〕。造模同時(shí)，空白組及模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散全方及各配伍藥組小鼠每天灌胃各組對(duì)應(yīng)藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各組成藥物的劑量均按照2005版《中華人民共和國(guó)藥典》中逍遙丸〔7〕劑量，以人與小鼠體表面積體重比換算得到各實(shí)驗(yàn)組劑量，即逍遙散全方組、疏肝健脾組(柴胡、薄荷、白術(shù)、茯苓、煨姜、甘草)、疏肝養(yǎng)血組(柴胡、薄荷、當(dāng)歸、白芍)、健脾養(yǎng)血組(白術(shù)、茯苓、煨姜、甘草、當(dāng)歸、白芍)小鼠對(duì)應(yīng)生藥量分別為2.485、1.775、1.136及2.059 g/kg。連續(xù)灌胃42 d。

1.3指標(biāo)測(cè)定動(dòng)物給藥第41天，依次使用小鼠跳臺(tái)儀、小鼠避暗自動(dòng)測(cè)試儀進(jìn)行學(xué)習(xí)能力訓(xùn)練，第42天依次使用小鼠跳臺(tái)儀、小鼠避暗自動(dòng)測(cè)試儀進(jìn)行記憶功能測(cè)試〔8〕。測(cè)試結(jié)束后，股動(dòng)脈迅速取血測(cè)定小鼠血清SOD、AchE、ChAT活性及MDA含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0軟件作單因素方差分析。

2　結(jié)　果

2.1逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶功能的影響(跳臺(tái)法)模型組小鼠記憶潛伏時(shí)間縮短，錯(cuò)誤次數(shù)增多，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可延長(zhǎng)小鼠記憶潛伏時(shí)間、減少錯(cuò)誤次數(shù)，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但差異以逍遙散全方組最明顯，且與疏肝健脾組、疏肝養(yǎng)血組及健脾養(yǎng)血組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶功能的影響(避暗法)模型組小鼠記憶潛伏時(shí)間縮短，錯(cuò)誤次數(shù)增多，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可延長(zhǎng)小鼠記憶潛伏時(shí)間、減少錯(cuò)誤次數(shù)，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但差異以逍遙散全方組最明顯，且與疏肝健脾組、疏肝養(yǎng)血組及健脾養(yǎng)血組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1　逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶功能的影響(跳臺(tái)法)

與模型組相比：1)P<0.05，2)P<0.01；與逍遙散全方組相比：3)P<0.05，下表同

表2　逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶功能的影響(避暗法)

2.3逍遙散對(duì)AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影響 模型組小鼠血清SOD活性降低、MDA水平升高，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可提高小鼠血清SOD活性、降低MDA水平，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但逍遙散全方組與疏肝健脾組、疏肝養(yǎng)血組及健脾養(yǎng)血組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表3　逍遙散對(duì)AD模型小鼠血清SOD活性、MDA水平的影響

2.4逍遙散對(duì)擬AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影響模型組小鼠血清ChAT活性降低、AchE活性升高，與空白組相比差異顯著(P<0.01)。逍遙散全方及各配伍藥組均可提高小鼠血清ChAT活性、降低AchE活性，與模型組相比差異顯著(P<0.01或P<0.05)；但ChAT活性改善以逍遙散全方組最為明顯，與疏肝健脾組及健脾養(yǎng)血組相比差異顯著(P<0.05)。見表4。

表4　逍遙散對(duì)AD模型小鼠血清ChAT、AchE活性的影響

3　討　論

“肝者，將軍之官，謀慮出焉” (《素問·靈蘭秘典論》)、“肝者，罷極之本，魂之居也”(《素問·六節(jié)藏象論》)，肝為將軍之臟，性喜調(diào)達(dá)而惡抑郁，主疏泄、藏陰血，體陰而用陽(yáng)，舍于魂而華于筋，為神魂之居、行為之主； “脾藏二神意與智，意不安，思無慮，神奪愚也” (《醫(yī)方類聚》)、“脾主身之肌肉”(《素問·痿論篇》)、“脾病不能為胃行其津液，四肢不得稟水谷氣，氣日以衰，脈道不利，筋骨肌肉皆無氣以生，敞不用焉”(《 素問·太陰陽(yáng)明論》)，脾胃為后天之本，氣血生化之源，升清而灌四旁，散精而榮百脈，藏意智，主四肢，豐肌肉，為意智之舍、行為之力?？梢姡?、脾二臟與人之精神、行為密切相關(guān)，而AD的主要臨床表現(xiàn)就是精神異常與行為失常兩方面，這與祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)肝、脾功能的認(rèn)識(shí)非常吻合，據(jù)此提出了從肝、脾論治AD的科研假說。

逍遙散(《太平惠民和劑局方》)作為調(diào)和肝脾之名方，以肝脾為主治臟腑，以氣血為基礎(chǔ)物質(zhì)，土木同調(diào)，氣血并治。其中柴胡、薄荷疏肝氣，解郁結(jié)，暢情志，悅神魂，又可促脾運(yùn)，升清陽(yáng)，啟清竅，醒腦神；當(dāng)歸、白芍益陰血，藏神魂，舍意智，柔肝體，舒筋脈，又可充營(yíng)血，強(qiáng)四肢，實(shí)肌肉；白術(shù)、茯苓、甘草、煨姜入中焦，健中土，陪補(bǔ)后天之本，資生氣血之源，既健中土，實(shí)四肢，充肌肉，又化陰血，強(qiáng)肝體，柔肝筋，還可泄?jié)岫荆饷杀?，聰神明。八味相合，肝脾同調(diào)，氣血并治，神魂同寧，筋肉并健，如此，清陽(yáng)健行左升之道，精氣上注元神之府，氣暢神安，血充筋柔，木達(dá)土旺，體健肉堅(jiān)，腦靈神聰，行為自和，具有中醫(yī)藥防治AD的理論基礎(chǔ)；現(xiàn)代研究表明，逍遙散具有提高多巴胺等神經(jīng)受體含量、營(yíng)養(yǎng)保護(hù)神經(jīng)元、抗焦慮、抗抑郁、抗自由基氧化、調(diào)節(jié)免疫、雌激素樣等作用〔8～10〕，具有現(xiàn)代醫(yī)學(xué)防治AD的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

本研究表明，疏肝、健脾、養(yǎng)血三者的結(jié)合是中醫(yī)藥有效防治AD的統(tǒng)一體，缺一不可。而從疏肝、養(yǎng)血、健脾藥組中精選重點(diǎn)藥物組成新的防治AD的精方將是我們今后研究的方向之一，力爭(zhēng)為開發(fā)防治AD的中藥新產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

1王虎平,吳紅彥.逍遙散及其配伍組方對(duì)阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2013;33(18):4459-61.

2王虎平,邢喜平,張?chǎng)┚?等.逍遙散對(duì)阿爾茨海默病模型小鼠學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)遞質(zhì)的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2014;34(9):2468-70.

3王虎平，吳紅彥.逍遙散對(duì)AD模型小鼠行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)活性的影響〔J〕.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014;34(4):471-4.

4王虎平，吳紅彥.逍遙散對(duì)阿爾茨海默病模型小鼠血清及腦組織勻漿中SOD、GSH-PX活性及MDA水平的影響〔J〕.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013;30(6):1-3.

5蔡大勇，黃啟福，賈旭.丹梔逍遙散對(duì)D-半乳糖擬老年性癡呆大鼠腦病理學(xué)變化的影響〔J〕.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006;29(2)：114-7.

6國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典第一部〔S〕.2005:564.

7李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:256-8.

8徐志偉，敖海清，吳麗麗，等.逍遙散對(duì)慢性心理應(yīng)激損傷大鼠海馬神經(jīng)元的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2005;21(1):5-9.

9王靜怡，石玉瑁，查鵬洲，等.逍遙散的藥理研究〔J〕.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002;22(8)：489-90.

10楊玉峰，楊瑛.加味逍遙散對(duì)女性黃褐斑血清性激素水平的影響〔J〕.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000;23(5)：41-2.

〔2015-10-27修回〕

(編輯袁左鳴)

The effect and compatibility mechanism of Xiaoyao Powder on the Alzheimer's disease

WANG Hu-Ping,WU Hong-Yan.

Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,Gansu,China

ObjectiveTo investigate the effect of Xiaoyao Powder on the memory function and activity of SOD,MDA,ChAT and AchE in serum of Alzheimer's disease (AD) model mice and discuss the effect and mechanism of Xiaoyao Powder on the AD and explain the compatibility mechanism of combination of Shugan,Yangxue and Jianpi of Xiaoyao Powder.Methods60 SPF mice were divided into the blank control,model and Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue groups,with 10 mice in each group. AD model mice was made by injecting D-gal. While,AD model mice was prevented by Quanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder.At the 41st day,the ability of learning and memory training was done. At 42nd day,the memory function was detected and then to measure content of SOD,MDA,ChAT,AchE in serum.ResultsQuanfang,Shugan Jianpi,Shugan Yangxue,Jianpi Yangxue of Xiaoyao Powder could improve memory function of AD model mice,and could improve SOD,ChAT and decrease MDA and AchE,but the effect of Quanfang group of Xiaoyao Powder was most obvious.ConclusionsXiaoyao powder can better improve the memory function,antioxidant activity and neurotransmitter of A D model mice,has better prevention and treatment on the AD. The Shugan,Yangxue,Jianpi is effective in preventing and treating AD prescription structure.

Xiaoyao Powder;Alzheimer's disease;Memory function;SOD;MDA;ChAT;AchE

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81060284)；甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(No.ZDSYS-KJ-2013-010)；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中青年基金項(xiàng)目(No.2010-11)

吳紅彥(1963-)，男，博士生導(dǎo)師，教授，主要從事復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用研究。

王虎平(1980-)，男，碩士，在讀博士，主要從事老年病的中醫(yī)藥防治研究。

R749

A

1005-9202(2016)15-3632-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.009

1甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省中藥新產(chǎn)品創(chuàng)制工程實(shí)驗(yàn)室