施玲飛　邊平達(dá)　沈　朋

胃癌患者血清Cystatin C水平及影響其表達(dá)的相關(guān)因素分析

施玲飛邊平達(dá)沈朋★

目的 研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C（Cys C）的表達(dá)水平在胃癌患者與健康人群中的差異，分析影響其表達(dá)水平的相關(guān)因素。 方法 采用比濁法分別檢測并比較90例胃癌患者和46例健康對照者中血清Cys C濃度差別，并進(jìn)一步將胃癌患者血清 Cys C 的濃度與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤TNM分期、分化程度、癌栓形成作相關(guān)性分析。結(jié)果 胃癌患者血清Cys C水平低于健康對照者（P＜0.01）；相關(guān)性分析顯示胃癌患者血清Cys C水平與年齡、腫瘤大小、癌栓形成、分化程度相關(guān)（P＜0.05），與患者性別、腫瘤TNM分期無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論 胃癌患者血清Cys C水平低于健康對照者，且血清Cys C水平能反映腫瘤的惡性程度，檢測血清中Cystatin C表達(dá)水平有助于早期發(fā)現(xiàn)判斷患者病情并協(xié)助制定術(shù)后治療方案。

胃癌 血清 半胱氨酸蛋白酶抑制劑C

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，是危害我國人民健康的重大疾病之一，在新發(fā)癌癥及病死率上高居第三［1］，因此胃癌的早期診斷及治療尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)［2］，半胱氨酸蛋白酶抑制劑 C（Cystatin C，Cys C）是調(diào)控腫瘤細(xì)胞入侵和轉(zhuǎn)移的重要分子［3］，其異常表達(dá)可能與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，但目前Cys C在胃癌患者血清中表達(dá)情況的研究報道較少。本文擬檢測胃癌患者和健康對照者血清Cys C的水平，分析影響其表達(dá)水平的差異，并試圖分析影響胃癌患者血清Cys C表達(dá)水平的相關(guān)因素。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇2012年7月至2014年7月在浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院治療的胃癌患者90例（觀察組）。其中男59例，女31例；年齡37～80歲，平均年齡（60.38±5.88）歲。所有患者均經(jīng)過病理檢查確診，采血前均未行手術(shù)、放化療及抗腫瘤治療。根據(jù)2010年AJCC胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，劃分為Ⅰ期39例、Ⅱ期25例、Ⅲ期19例、IV期7例。術(shù)后患者按照病理分級，高中分化 36例、低分化54例。另外，選取健康體檢者82例作為對照組，男52例，女30例；年齡24～81歲，平均年齡（58.68±5.48）歲。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2血清Cys C、Scr及eGFR水平檢測 由于血清Cys C水平受腎功能影響［4］，需在統(tǒng)計分析中排除因腎功能水平差異導(dǎo)致的統(tǒng)計學(xué)差異，故所有受檢者抽取晨間空腹肘靜脈血3ml，分別做血清Cys C及血清肌酐（Serum creatinine，Scr）水平檢測。樣本在抽取后2h內(nèi)離心（4℃，3000r/min離心10min），取血清置于-80℃冰箱凍存待檢。血清Cys C水平采用顆粒增強散射免疫比濁法（PENIA）測定，采用羅氏診斷公司的專用試劑盒，采用試劑盒配備的校準(zhǔn)物和質(zhì)控品，腎小球濾過率（Estimating glomerular filtration rate，eGFR）采用改良的MDRD公式估算。檢測所用儀器為日立7600-010型全自動生化分析儀。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗。分類資料采用χ2檢驗。采用協(xié)方差分析去除可能混雜因素的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組血清Cys C表達(dá)水平比較 觀察組和對照組血清Cys C分別為（0.72±0.18）mg/L、（0.96±0.19）mg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2胃癌患者血清Cys C表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 將患者腎功能水平作為協(xié)變量進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明血清Cys C表達(dá)水平與患者年齡，腫瘤大小、腫瘤分化程度、癌栓形成均有相關(guān)性（P＜0.05），與患者性別、腫瘤TNM分期無關(guān)（P＞0.05），見表1。

表1　血清Cys C表達(dá)水平與胃癌患者臨床特征的關(guān)系

3　討論

Cys C是含有120個氨基酸的多肽鏈，分子量為15000，其由CST3基因編碼，位于染色體20 p11.21［5］，屬于2型半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族中成員。存在于所有體液中，無組織特異性，是組織蛋白酶（Cathepsin，Cat）B、H、L、S的抑制劑［6］。細(xì)胞內(nèi)半胱氨酸蛋白酶（Cats）參與和促進(jìn)癌癥過程可能會被半胱氨酸蛋白酶抑制物（Cystatin）控制吸收［7］，因此Cys C和Cats的表達(dá)水平與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展密切相關(guān)［8-9］，可作為惡性腫瘤的篩選指標(biāo)，應(yīng)用于研究和臨床檢驗。

目前國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)［10-12］肺癌、原發(fā)性肝癌、食管癌的腫瘤組織中，Cys C的水平高于正常組織，Cys C-mRNA高表達(dá)。但Cys C在不同腫瘤中表達(dá)并不一致，另一些研究發(fā)現(xiàn)［13-14］，頭頸部腫瘤和前列腺癌中Cys C表達(dá)是下調(diào)的。有結(jié)腸腫瘤研究者認(rèn)為［15］，雖然患者體內(nèi)Cat B和Cys C的含量均有增加，而Cat B的酶活性并未被相應(yīng)增加的Cys C所平衡，即兩者處于一種失平衡狀態(tài)，導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。作者檢測了胃癌患者和健康對照者血清Cys C的濃度，發(fā)現(xiàn)胃癌組的血清Cys C濃度明顯低于健康對照組（P＜0.01），提示血清Cys C水平低于正常人可能與胃癌發(fā)生相關(guān)。另外，方差分析結(jié)果提示Cys C與胃癌患者年齡、腫瘤直徑、癌栓形成、分化程度有關(guān)，與患者性別、腫瘤TNM分期無關(guān)。由于Cys C反映了腎小球濾過功能［4］，年齡＞60歲的老年患者，由于其腎功能下降，故血清中Cys C水平高于＜60歲的患者。腫瘤的直徑反映腫瘤體積以及腫瘤細(xì)胞的多寡，腫瘤細(xì)胞越多，血清Cys C消耗量越大，血清濃度越低。癌栓反應(yīng)了腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲情況，轉(zhuǎn)移灶使得腫瘤細(xì)胞呈多中心分布，大量消耗血清Cys C，故有癌栓組血清Cys C濃度更低。腫瘤細(xì)胞的分化程度亦能在血清Cys C濃度上體現(xiàn)，中分化組血清Cys C高于低分化組。然而本研究發(fā)現(xiàn)高分化組血清Cys C雖高于低分化組，但要低于中分化組，考慮高分化組樣本量太少僅2例患者，可能影響了統(tǒng)計學(xué)的結(jié)果，需要進(jìn)一步積累病例數(shù)。

總之，本資料初步證明在胃癌患者中，血清Cys C水平的變化與胃癌惡性程度及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，因此血清Cys C水平可作為篩選早期胃癌患者腫瘤分化及進(jìn)展程度的指標(biāo)，亦可作為胃癌患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)及預(yù)后的預(yù)判指標(biāo)。由于Cys C與Cats的關(guān)系，在后續(xù)研究中可進(jìn)行相關(guān)Cats的測定、Cats/Cysc的動態(tài)平衡情況，以進(jìn)一步闡明胃癌發(fā)生發(fā)展的機制、與胃癌臨床特征及預(yù)后的關(guān)系，尋找腫瘤基因治療的新靶點。

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Objective The aim of this study is to investigate the expression difference of sera cystatin C level between patients with gastric cancer and contrast volunteers and the determine factors that related. Methods Blood samples were collected from 90 patients with gastric cancer and 46 healthy control subjects. Cystatin C concentration were detected by turbidity measurement and were analyzed by univariate method. The correlation of sera cystatin C concentration to gastric cancer patient's age，gender，tumor size，tumor TNM stage，differentiation degree，tumor thrombi was analyzed by univariate method. Results Cystatin C levels were signifi cantly lower in the patients with gastric cancer than that in the healthy control subjects（P＜0.01）. Correlation analyze reveals that the level of Sera Cystatin C was correlated with patient's age，tumor size，tumor thrombi，differentiation degree of tumor（P＜0.05）. Cystatin C is not relevant with patient's gender，tumor TNM stage of gastric cancer（P＞0.05）. Conclusion Sera cystatin C level in gastric cancer patients was signifi cantly lower than healthy control subjects and refl ects the degree of malignant tumor. Sera cystatin C contributes to the early detection，diagnosis of patients with gastric cancer and helps the planning of therapy scheme after surgery.

Gastric cancer Sera Cystatin C

310024浙江省人民醫(yī)院望江山院區(qū)（施玲飛 邊平達(dá)）

310003 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院（沈朋）